本文關(guān)鍵詞：hBMP-2基因轉(zhuǎn)染對Hucb-MSC及軟骨細(xì)胞影響的實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：目的探討脂質(zhì)體介導(dǎo)重組質(zhì)粒pIRES2-EGFP-hBMP-2基因轉(zhuǎn)染臍血間充質(zhì)干細(xì)胞和人軟骨細(xì)胞的可行性。 方法利用密度梯度離心法和貼壁培養(yǎng)法分離臍血,獲取并培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞,流式細(xì)胞儀鑒定,X-treme GENE轉(zhuǎn)染試劑介導(dǎo)重組質(zhì)粒pIRES2-EGFP-hBMP-2轉(zhuǎn)染第3代細(xì)胞,觀察EGFP的表達(dá)情況,分別收集第12、24、36、48、60、72、84、96h細(xì)胞培養(yǎng)上清,酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測上清中hBMP-2蛋白含量,免疫熒光檢測細(xì)胞內(nèi)蛋白表達(dá)。轉(zhuǎn)染后2周,行免疫組化檢測細(xì)胞的變化。重組質(zhì)粒pIRES2-EGFP-hBMP-2轉(zhuǎn)染人軟骨細(xì)胞,觀察細(xì)胞變化。結(jié)果密度梯度離心法與貼壁培養(yǎng)法可以分離獲取人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞,流式細(xì)胞儀鑒定表面標(biāo)記CD90, CD105高表達(dá),不表達(dá)CD34, CD45.脂質(zhì)體介導(dǎo)重組質(zhì)粒pIRES2-EGFP-hBMP-2可成功轉(zhuǎn)染人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞,轉(zhuǎn)染率為27.7%±7.59%。ELISA檢測到較高濃度的hBMP-2蛋白質(zhì)分泌,與對照組相比,具有顯著性差異(p＜0.01)。免疫熒光可檢測到hBMP-2蛋白形成。免疫組化檢測顯示部分細(xì)胞Ⅱ型膠原蛋白表達(dá)陽性。轉(zhuǎn)染后軟骨細(xì)胞傳代次數(shù)增加。 結(jié)論hBMP-2基因可以有效轉(zhuǎn)染人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞,標(biāo)記基因和目的基因可在細(xì)胞中表達(dá),有hBMP蛋白質(zhì)分泌,并可促進(jìn)其表達(dá)Ⅱ型膠原蛋白。hBMP-2可維持軟骨細(xì)胞表型,并促進(jìn)其傳代增殖。
【關(guān)鍵詞】：臍血間充質(zhì)干細(xì)胞 骨形成蛋白 軟骨細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R3416
【目錄】：

• 摘要2-3
• Abstract3-6
• 引言6-8
• 第一章 材料和方法8-19
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料8
• 1.2 主要試劑8
• 1.3 主要儀器8-9
• 1.4 實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備9-10
• 1.5 主要實(shí)驗(yàn)方法10-19
• 1.5.1 hBMP-2基因轉(zhuǎn)染人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞11-16
• 1.5.1.1 臍血間充質(zhì)干細(xì)胞的分離11
• 1.5.1.2 臍血間充質(zhì)干細(xì)胞的原代培養(yǎng)11
• 1.5.1.3 臍血間充質(zhì)干細(xì)胞的傳代培養(yǎng)11-12
• 1.5.1.4 流式細(xì)胞儀鑒定細(xì)胞表型12
• 1.5.1.5 基因轉(zhuǎn)染臍血間充質(zhì)干細(xì)胞12-13
• 1.5.1.6 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測BMP-2蛋白表達(dá)量13-15
• 1.5.1.7 BMP-2蛋白免疫熒光檢測15-16
• 1.5.1.8 細(xì)胞免疫組織化學(xué)Ⅱ型膠原檢測16
• 1.5.2 hBMP-2基因轉(zhuǎn)染人軟骨細(xì)胞16-19
• 1.5.2.1 人軟骨細(xì)胞的分離培養(yǎng)16-17
• 1.5.2.2 人軟骨細(xì)胞傳代培養(yǎng)17
• 1.5.2.3 人軟骨細(xì)胞的Ⅱ型膠原檢測17-18
• 1.5.2.4 人軟骨細(xì)胞的基因轉(zhuǎn)染18-19
• 第二章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果19-22
• 2.1 hBMP-2基因轉(zhuǎn)染人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞19-20
• 2.2 hBMP-2基因轉(zhuǎn)染人軟骨細(xì)胞20-22
• 第三章 討論22-27
• 3.1 人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞22-24
• 3.2 人軟骨細(xì)胞24-27
• 結(jié)論27-28
• 附圖28-37
• 參考文獻(xiàn)37-42
• 綜述42-56
• 參考文獻(xiàn)49-56
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果56-57
• 致謝57-58

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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本文編號：565402