本文關鍵詞：惡性瘧疾疫苗M.RCAg-1的中試制備及其與不同佐劑配伍的免疫原性研究

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【摘要】：瘧疾作為世界三大傳染病之一仍然威脅著人類的健康。WHO最新數據顯示,2012年全球有627000入因感染瘧疾而死亡,而這其中平均每天有1300條年輕的生命被瘧疾奪走,大部分是非洲五歲以下的兒童。由于耐藥性瘧原蟲蟲株和抗殺蟲劑雌性按蚊的出現及擴散,使得傳統預防和治療瘧疾的方法面臨威脅。因此,研發(fā)出一種安全、有效、經濟的瘧疾疫苗以降低瘧疾的發(fā)病率和死亡率成為當務之急。 據文獻報道,惡性瘧原蟲紅內期疫苗候選抗原單獨或簡單聯合使用時的免疫效果并不理想,因此多抗原多表位重組蛋白疫苗成為瘧疾疫苗研究的方向之一。課題組前期通過“表位改組”技術構建了瘧原蟲隨機重組抗原-1(malaria random constructed antigen-1, M. RCAg-1),作為惡性瘧疾多表位人工隨機重組蛋白疫苗的M.RCAg-1在BALB/c小鼠、新西蘭兔、非人靈長類動物模型中被證實具有很好的免疫原性和體內外保護性,極有研發(fā)前景。 本研究在前期工作建立的M. RCAg-1工程菌基礎上,通過協同合作,使用30L的發(fā)酵罐中試規(guī)模發(fā)酵培養(yǎng)M.RCAg-1工程菌,并對M.RCAg-1中試規(guī)模的純化工藝進行改進,建立了一條簡便可行的M.RCAg-1的中試規(guī)模高效制備工藝。此外,為增強M. RCAg-1的免疫原性,本研究選用了兩種極具有臨床應用前景的Toll樣受體激動劑類的吡喃葡萄糖基脂佐劑(glucopyranosyl lipid adjuvant, GLA)與其配伍,并在BALB/c小鼠模型中評價在各佐劑作用下疫苗的免疫效果,進而篩選出最佳佐劑,為隨后進行的M.RCAg-1的臨床前研究奠定基礎。主要取得以下進展： 1.協助合作方,成功摸索出M. RCAg-1的中試規(guī)模的發(fā)酵與純化工藝,經兩步純化后獲得了純度大于95%,回收率為53.2%左右的中試M.RCAg-1蛋白； 2.從與M. RCAg-1配伍的佐劑中篩選出增強其免疫原性的能力最強的佐齊GLA-SE,確定該佐劑的最佳免疫劑量為5ug。 3.將中試M. RCAg-1分別與GLA-SE佐劑和弗氏佐劑配伍免疫BALB/c小鼠的,經對其免疫后血清抗體及脾淋巴細胞進行分析,初步證實GLA-SE是一個很有潛力的多表位蛋白疫苗M. RCAg-1候選佐劑。
【關鍵詞】：惡性瘧原蟲 疫苗 發(fā)酵 純化 佐劑
【學位授予單位】：北京協和醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R392
【目錄】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-7
• 前言7-9
• 實驗材料9-13
• 實驗方法13-31
• 實驗結果31-44
• 討論44-48
• 結論48-49
• 參考文獻49-51
• 文獻綜述51-59
• 參考文獻56-59
• 附錄59-61
• 致謝61-62
• 個人簡歷62-63

【參考文獻】

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1 喬彥良,孫愛玉,李桂華,趙金東,郭步術,遇欣,盛英霞,楊漢春;西咪替丁對雞新城疫疫苗免疫效果的影響[J];山東家禽;2002年01期

2 孫成金;王健;丁軍穎;郭鵬;鄭凡;張振龍;;多表位惡性瘧疾疫苗M.RCAg-1在大腸桿菌表達的條件優(yōu)化和大規(guī)模培養(yǎng)[J];微生物學免疫學進展;2009年03期

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本文編號：561503