本文關(guān)鍵詞：惡性瘧疾疫苗M.RCAg-1的中試制備及其與不同佐劑配伍的免疫原性研究

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【摘要】：瘧疾作為世界三大傳染病之一仍然威脅著人類的健康。WHO最新數(shù)據(jù)顯示,2012年全球有627000入因感染瘧疾而死亡,而這其中平均每天有1300條年輕的生命被瘧疾奪走,大部分是非洲五歲以下的兒童。由于耐藥性瘧原蟲蟲株和抗殺蟲劑雌性按蚊的出現(xiàn)及擴(kuò)散,使得傳統(tǒng)預(yù)防和治療瘧疾的方法面臨威脅。因此,研發(fā)出一種安全、有效、經(jīng)濟(jì)的瘧疾疫苗以降低瘧疾的發(fā)病率和死亡率成為當(dāng)務(wù)之急。 據(jù)文獻(xiàn)報道,惡性瘧原蟲紅內(nèi)期疫苗候選抗原單獨(dú)或簡單聯(lián)合使用時的免疫效果并不理想,因此多抗原多表位重組蛋白疫苗成為瘧疾疫苗研究的方向之一。課題組前期通過“表位改組”技術(shù)構(gòu)建了瘧原蟲隨機(jī)重組抗原-1(malaria random constructed antigen-1, M. RCAg-1),作為惡性瘧疾多表位人工隨機(jī)重組蛋白疫苗的M.RCAg-1在BALB/c小鼠、新西蘭兔、非人靈長類動物模型中被證實(shí)具有很好的免疫原性和體內(nèi)外保護(hù)性,極有研發(fā)前景。 本研究在前期工作建立的M. RCAg-1工程菌基礎(chǔ)上,通過協(xié)同合作,使用30L的發(fā)酵罐中試規(guī)模發(fā)酵培養(yǎng)M.RCAg-1工程菌,并對M.RCAg-1中試規(guī)模的純化工藝進(jìn)行改進(jìn),建立了一條簡便可行的M.RCAg-1的中試規(guī)模高效制備工藝。此外,為增強(qiáng)M. RCAg-1的免疫原性,本研究選用了兩種極具有臨床應(yīng)用前景的Toll樣受體激動劑類的吡喃葡萄糖基脂佐劑(glucopyranosyl lipid adjuvant, GLA)與其配伍,并在BALB/c小鼠模型中評價在各佐劑作用下疫苗的免疫效果,進(jìn)而篩選出最佳佐劑,為隨后進(jìn)行的M.RCAg-1的臨床前研究奠定基礎(chǔ)。主要取得以下進(jìn)展： 1.協(xié)助合作方,成功摸索出M. RCAg-1的中試規(guī)模的發(fā)酵與純化工藝,經(jīng)兩步純化后獲得了純度大于95%,回收率為53.2%左右的中試M.RCAg-1蛋白； 2.從與M. RCAg-1配伍的佐劑中篩選出增強(qiáng)其免疫原性的能力最強(qiáng)的佐齊GLA-SE,確定該佐劑的最佳免疫劑量為5ug。 3.將中試M. RCAg-1分別與GLA-SE佐劑和弗氏佐劑配伍免疫BALB/c小鼠的,經(jīng)對其免疫后血清抗體及脾淋巴細(xì)胞進(jìn)行分析,初步證實(shí)GLA-SE是一個很有潛力的多表位蛋白疫苗M. RCAg-1候選佐劑。
【關(guān)鍵詞】：惡性瘧原蟲 疫苗 發(fā)酵 純化 佐劑
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R392
【目錄】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-7
• 前言7-9
• 實(shí)驗(yàn)材料9-13
• 實(shí)驗(yàn)方法13-31
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果31-44
• 討論44-48
• 結(jié)論48-49
• 參考文獻(xiàn)49-51
• 文獻(xiàn)綜述51-59
• 參考文獻(xiàn)56-59
• 附錄59-61
• 致謝61-62
• 個人簡歷62-63

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 喬彥良,孫愛玉,李桂華,趙金東,郭步術(shù),遇欣,盛英霞,楊漢春;西咪替丁對雞新城疫疫苗免疫效果的影響[J];山東家禽;2002年01期

2 孫成金;王健;丁軍穎;郭鵬;鄭凡;張振龍;;多表位惡性瘧疾疫苗M.RCAg-1在大腸桿菌表達(dá)的條件優(yōu)化和大規(guī)模培養(yǎng)[J];微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展;2009年03期

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本文編號：561503