本文關(guān)鍵詞：輪狀病毒腹瀉嬰兒腸道微生態(tài)變化的研究

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【摘要】：輪狀病毒(rotavirus, RV)感染腹瀉是引起世界范圍內(nèi)嬰幼兒重癥腹瀉的主要原因,在發(fā)展中國家每年有60萬嬰幼兒由于RV感染腹瀉引起脫水,甚至死亡。該疾病對嬰幼兒的健康,生長發(fā)育乃至生命都造成嚴(yán)重影響。RV引起腹瀉是通過擾亂腸道黏膜細(xì)胞的吸收,使得腸道微生態(tài)平衡失調(diào),腸道功能發(fā)生紊亂而造成的。腹瀉導(dǎo)致腸道菌群失調(diào),而菌群失調(diào)又誘發(fā)或加重腹瀉。因此理清腹瀉時腸道菌群狀況對預(yù)防和治療RV感染腹瀉意義深遠(yuǎn)。本研究通過對嬰兒糞便中微生物的分析探討了RV病毒感染腹瀉嬰兒腸道微生態(tài)的變化,揭示了腸道微生態(tài)在嬰兒RV感染腹瀉疾病中的作用。 本試驗以2011年1-3月間哈爾濱市兒童醫(yī)院確診的15例RV感染腹瀉嬰兒(RV腹瀉組)和15例健康嬰兒(對照組)為研究對象,利用試劑盒法提取嬰兒糞便DNA,利用調(diào)查問卷方式收集嬰兒生長發(fā)育和患病情況信息,采用細(xì)菌的16S rDNA V3區(qū)通用引物、乳酸桿菌屬專一性引物和雙歧桿菌屬專一性引物對糞便總DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行變性梯度凝膠電泳(DGGE)分析,利用Quantity One軟件對RV感染腹瀉嬰兒的腸道菌群進(jìn)行聚類和相似性分析,利用Shannon-Weaver指數(shù)對腸道菌群進(jìn)行生物多樣性分析,利用基因測序技術(shù)和Quantity One軟件對RV感染腹瀉嬰兒腸道微生物進(jìn)行定性和定量分析。 研究結(jié)果表明：RV腹瀉組和對照組的腸道優(yōu)勢菌群多樣性存在明顯差異(P0.05),且RV腹瀉組的多樣性低于對照組,表明RV腹瀉對腸道菌群多樣性存在一定影響。RV腹瀉嬰兒腸道中擬桿菌屬、梭菌屬、腸桿菌屬、屎腸球菌和大腸桿菌屬占優(yōu)勢。與對照組比,乳酸菌屬、雙歧桿菌屬和消化球菌屬在RV感染腹瀉嬰兒的腸道中不占優(yōu)勢,說明RV感染腹瀉后嬰兒腸道優(yōu)勢菌群的組成發(fā)生變化。 RV腹瀉組和對照組腸道乳酸桿菌屬的多樣性存在明顯差異(P0.05),且RV腹瀉組的多樣性低于對照組,表明RV腹瀉對乳酸桿菌屬的多樣性存在一定影響。RV腹瀉組乳酸桿菌屬的組成為：短乳酸桿菌、植物乳酸桿菌和發(fā)酵乳酸桿菌。和對照組相比,嗜熱乳酸桿菌和植物乳酸桿菌不是RV腹瀉組腸道乳酸桿菌屬的優(yōu)勢種,說明RV感染腹瀉后嬰兒腸道菌種乳酸桿菌屬的組成發(fā)生了變化。 RV腹瀉組和對照組腸道雙歧桿菌屬的多樣性存在明顯差異(P0.05),且RV腹瀉組的多樣性低于對照組,表明RV腹瀉對雙歧桿菌屬的多樣性存在一定影響。RV腹瀉組雙歧桿菌屬的組成為：短雙歧桿菌和青春雙歧桿菌。和對照組相比,嬰兒雙歧桿菌、長雙歧桿菌和短雙歧桿菌不是RV腹瀉組腸道雙歧桿菌屬的優(yōu)勢種,說明RV感染腹瀉后嬰兒腸道菌種雙歧桿菌屬的組成發(fā)生了變化。
【關(guān)鍵詞】：輪狀病毒感染腹瀉 DGGE 多樣性 優(yōu)勢菌群 乳酸桿菌屬 雙歧桿菌屬
【學(xué)位授予單位】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R378
【目錄】：

• 摘要8-9
• Abstract9-11
• 1 引言11-21
• 1.1 輪狀病毒感染腹瀉的研究進(jìn)展11-12
• 1.1.1 輪狀病毒概述11
• 1.1.2 致病機(jī)理11-12
• 1.1.3 臨床癥狀12
• 1.2 嬰兒腸道微生物研究概述12-17
• 1.2.1 嬰兒腸道微生物的分布與組成12-16
• 1.2.2 嬰兒腸道微生物的主要功能16-17
• 1.3 微生物分子生態(tài)學(xué)主要技術(shù)簡介17-20
• 1.3.1 16S rRNA 序列分析原理17-18
• 1.3.2 目的基因的 PCR 擴(kuò)增18
• 1.3.3 變形梯度凝膠電泳技術(shù)18-20
• 1.4 課題來源20
• 1.5 本研究的目的與意義20-21
• 2 材料與方法21-28
• 2.1 實驗材料21-22
• 2.1.1 研究對象21
• 2.1.2 主要試劑21-22
• 2.1.3 儀器與設(shè)備22
• 2.2 實驗方法22-28
• 2.2.1 糞便樣本總 DNA 的提取22-23
• 2.2.2 RV 感染腹瀉嬰兒 16SrRNA-V3 區(qū) PCR 及 DGGE（變性梯度凝膠電泳）分析23-25
• 2.2.3 RV 感染腹瀉嬰兒乳酸桿菌屬專一片段 PCR 擴(kuò)增及 DGGE 分析25-26
• 2.2.4 RV 感染腹瀉嬰兒雙歧桿菌屬專一片段 PCR 擴(kuò)增及 DGGE 分析26-27
• 2.2.5 RV 感染腹瀉嬰兒 DGGE 條帶測序分析27
• 2.2.6 數(shù)據(jù)分析27-28
• 3 結(jié)果與分析28-48
• 3.1 調(diào)查結(jié)果統(tǒng)計28-29
• 3.2 RV 感染腹瀉嬰兒腸道菌群的多樣性29-33
• 3.2.1 RV 感染腹瀉嬰兒 16S rDNA V3 區(qū) PCR 擴(kuò)增29
• 3.2.2 RV 感染腹瀉嬰兒腸道菌群的多樣性分析29-33
• 3.3 RV 感染腹瀉嬰兒腸道優(yōu)勢菌群分析33-36
• 3.3.1 RV 感染腹瀉嬰兒 DGGE 優(yōu)勢條帶的測序分析33-35
• 3.3.2 RV 感染腹瀉嬰兒腸道優(yōu)勢菌群組成分析35-36
• 3.4 RV 感染腹瀉嬰兒腸道乳酸桿菌屬的分析36-41
• 3.4.1 RV 感染腹瀉嬰兒腸道乳酸桿菌屬的 PCR 擴(kuò)增36
• 3.4.2 RV 感染腹瀉嬰兒腸道乳酸桿菌屬的多樣性分析36-39
• 3.4.3 RV 病毒感染腹瀉嬰兒腸道乳酸桿菌屬的測序分析39-40
• 3.4.4 RV 感染腹瀉嬰兒腸道乳酸桿菌屬組成分析40-41
• 3.5 RV 感染腹瀉嬰兒腸道雙歧桿菌屬的分析41-48
• 3.5.1 RV 感染腹瀉嬰兒腸道雙歧桿菌屬的 PCR 擴(kuò)增41-42
• 3.5.2 RV 感染腹瀉嬰兒腸道雙歧桿菌屬的多樣性分析42-45
• 3.5.3 RV 感染腹瀉嬰兒腸道雙歧桿菌屬的測序分析45-46
• 3.5.4 RV 感染腹瀉嬰兒腸道雙歧桿菌屬組成分析46-48
• 4 討論48-53
• 4.1 RV 感染腹瀉疾病與腸道菌群之間的關(guān)系48
• 4.2 RV 感染腹瀉嬰兒腸道菌群多樣性分析48-49
• 4.3 RV 感染腹瀉嬰兒腸道優(yōu)勢菌群分析49-50
• 4.4 RV 感染腹瀉嬰兒腸道乳酸桿菌屬分析50-51
• 4.4.1 RV 感染腹瀉嬰兒腸道乳酸桿菌屬多樣性分析50
• 4.4.2 RV 感染腹瀉嬰兒腸道乳酸桿菌屬組成分析50-51
• 4.5 RV 感染腹瀉嬰兒腸道雙歧桿菌屬分析51-53
• 4.5.1 RV 感染腹瀉嬰兒腸道雙歧桿菌屬多樣性分析51
• 4.5.2 RV 感染腹瀉嬰兒腸道雙歧桿菌屬組成分析51-53
• 5 結(jié)論53-54
• 致謝54-55
• 參考文獻(xiàn)55-61
• 附錄61-63
• 攻讀碩士期間發(fā)表的論文63

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 何英;;新生兒輪狀病毒腸道外感染32例臨床分析[J];中國兒童保健雜志;2009年04期

2 樓金s，

本文編號：543405