本文關(guān)鍵詞：融合蛋白R(shí)GD-TRAIL在畢赤酵母中的表達(dá)及活性

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【摘要】：本文分別利用大腸桿菌和畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)構(gòu)建表達(dá)RGD-TRAIL蛋白,比較兩種表達(dá)系統(tǒng)對(duì)該蛋白活性的影響,并對(duì)畢赤酵母表達(dá)的RGD-TRAIL進(jìn)行活性分析。利用基因工程方法分別構(gòu)建重組質(zhì)粒p ET30-rgdtrail和p HBM-rgd-trail,于大腸桿菌和畢赤酵母中誘導(dǎo)表達(dá)。采用MTT法、ELISA法、劃痕及Transwell小室和Hoechst 33342染色檢測(cè)RGD-TRAIL對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖抑制、親和活性、遷移和凋亡的影響。Western blotting檢測(cè)相關(guān)凋亡蛋白的表達(dá)。重組蛋白R(shí)GD-TRAIL于大腸桿菌中以包涵體形式表達(dá),在畢赤酵母中分泌表達(dá)。MTT結(jié)果顯示,畢赤酵母表達(dá)的RGD-TRAIL抑制腫瘤細(xì)胞增殖活性明顯強(qiáng)于大腸桿菌表達(dá)的RGD-TRAIL。ELISA實(shí)驗(yàn)表明,酵母表達(dá)的RGD-TRAIL可與表達(dá)αv和DR4、DR5的腫瘤細(xì)胞發(fā)生特異性結(jié)合。劃痕和Transwell實(shí)驗(yàn)證明,RGD-TRAIL能抑制腫瘤細(xì)胞A549和HT1080遷移。經(jīng)過(guò)RGD-TRAIL作用后,熒光顯微鏡下可觀察到腫瘤細(xì)胞明顯發(fā)生凋亡,Western blotting檢測(cè)PARP及caspase-3均出現(xiàn)剪接體。研究結(jié)果提示,畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)更適合于RGD-TRAIL蛋白的表達(dá),且能夠很好地發(fā)揮靶向作用及殺傷活性。
【作者單位】： 中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院醫(yī)藥生物技術(shù)研究所;
【關(guān)鍵詞】： RGD 腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體 細(xì)胞凋亡 融合蛋白
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81373437) 國(guó)家科技重大專項(xiàng)資助項(xiàng)目(2012ZX09301002-001-022-01)
【分類號(hào)】：R378
【正文快照】： Hoechst 33342染色檢測(cè)RGD-TRAIL對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖抑制、親和活性、遷移和凋亡的影響。Western blotting檢測(cè)相關(guān)凋亡蛋白的表達(dá)。重組蛋白R(shí)GD-TRAIL于大腸桿菌中以包涵體形式表達(dá),在畢赤酵母中分泌表達(dá)。MTT結(jié)果顯示,畢赤酵母表達(dá)的RGD-TRAIL抑制腫瘤細(xì)胞增殖活性明顯強(qiáng)于大腸，

本文編號(hào)：543270