本文關(guān)鍵詞：胞外泛素對Treg細(xì)胞免疫抑制活性的影響

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【摘要】：背景與目的CD4+CD25+FoxP3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg細(xì)胞)在維持機(jī)體免疫穩(wěn)態(tài),特別是免疫耐受中具有重要作用,其作用的發(fā)揮主要是通過調(diào)控CD4+CD25'效應(yīng)性T細(xì)胞(Teff細(xì)胞)的功能來實(shí)現(xiàn)的。Treg細(xì)胞的數(shù)量和活性與自身免疫性疾病密切相關(guān),因此如何有效調(diào)節(jié)Treg細(xì)胞數(shù)量和活性已經(jīng)成為研究熱點(diǎn)。我們前期研究發(fā)現(xiàn)泛素在血液制劑的貯存過程中濃度明顯升高,且與保存時間正相關(guān)。而泛素受體CXCR4在Treg細(xì)胞表面高表達(dá),與Treg細(xì)胞的趨化遷移、免疫耐受的誘導(dǎo)以及抗腫瘤免疫作用密切相關(guān),本研究探討泛素是否通過結(jié)合Treg細(xì)胞表面受體CXCR4進(jìn)而影響Treg細(xì)胞的免疫抑制活性。方法將正常人外周血的單個核細(xì)胞(PBMCs)與不同濃度N末端標(biāo)記FITC熒光的泛素37℃共孵育1小時,流式細(xì)胞儀初步分析泛素與人PBMCs中Treg細(xì)胞的結(jié)合能力；用磁珠分選的Treg細(xì)胞與N末端標(biāo)記FITC熒光的泛素37℃共孵育1小時,流式細(xì)胞儀再次驗(yàn)證胞外泛素與Treg細(xì)胞的結(jié)合率,并得出兩者結(jié)合的最適泛素濃度；運(yùn)用Transwell方法分析不同濃度泛素(0、0.2、0.4、0.6和0.8μM)對人PBMCs中Treg細(xì)胞趨化遷移能力的影響；最后胞外泛素對Treg細(xì)胞發(fā)揮免疫抑制功能的影響通過Treg細(xì)胞與Teff細(xì)胞共培養(yǎng)后檢測：CFSE標(biāo)記的Teff細(xì)胞與Treg細(xì)胞按照1：0、1：1、1：2和1：3的比例共培養(yǎng),37℃培養(yǎng)72小時,流式細(xì)胞儀檢測Treg細(xì)胞對Teff細(xì)胞增殖的影響；CFSE標(biāo)記的Teff細(xì)胞與Treg細(xì)胞按照1：1的比例共培養(yǎng),實(shí)驗(yàn)組加入最適濃度泛素,對照組不加泛素,37℃孵育72小時,流式細(xì)胞儀檢測泛素對Treg細(xì)胞發(fā)揮免疫抑制功能的影響；胞外泛素對人外周血Treg細(xì)胞凋亡的作用：Treg細(xì)胞與不同濃度泛素(0、0.2、0.4、0.6和0.8μM)置于37℃孵育箱中共培養(yǎng)48小時,收集細(xì)胞,加AnnexinV和PI,流式細(xì)胞儀檢測泛素對Treg細(xì)胞凋亡的影響。結(jié)果胞外泛素可以與PBMCs中的Treg細(xì)胞和磁珠分選Treg細(xì)胞結(jié)合,結(jié)合率分別為1.26±0.11%和17.93±1.81%,95%CI分別為1.00%-1.52%和13.64%-22.23%,兩者結(jié)合的最適濃度泛素為0.6 μM；泛素可以影響Treg細(xì)胞的趨化遷移,當(dāng)泛素濃度為0.6μM時,該影響作用較明顯；Treg細(xì)胞可以抑制Teff細(xì)胞的增殖,隨著共培養(yǎng)體系中Treg細(xì)胞比例的增大,其免疫抑制功能增強(qiáng),胞外泛素可以促進(jìn)Treg細(xì)胞的免疫抑制功能；一定濃度泛素可以抑制Treg細(xì)胞的凋亡,濃度為0.6μM時該作用最明顯。結(jié)論胞外泛素可以與Treg細(xì)胞結(jié)合,并可進(jìn)一步影響Treg細(xì)胞對Teff細(xì)胞的功能調(diào)控進(jìn)而影響其免疫抑制作用的發(fā)揮,調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)。
【關(guān)鍵詞】：泛素 調(diào)節(jié)性T細(xì)胞 效應(yīng)性T細(xì)胞 免疫耐受 免疫抑制
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R392
【目錄】：

• 附件3-5
• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 前言9-11
• 材料與方法11-27
• 結(jié)果27-35
• 討論35-40
• 參考文獻(xiàn)40-47
• 小結(jié)47-48
• 綜述48-58
• 參考文獻(xiàn)54-58
• 附錄58-59
• 致謝59-61

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本文編號：534636