本文關(guān)鍵詞：Cre重組酶調(diào)控的OVA-HBsAg轉(zhuǎn)基因乙肝模型小鼠的制備及鑒定

  更多相關(guān)文章： 小鼠 轉(zhuǎn)基因 重組酶類 肝炎 乙型 慢性

【摘要】：目的制備Cre重組酶調(diào)控的卵清蛋白(OVA)-HBs Ag轉(zhuǎn)基因小鼠,為乙肝的防治提供更好的動物模型。方法采用原核顯微注射方法將線性化的攜帶OVA-HBs Ag基因并帶有Lox P位點(diǎn)的質(zhì)粒注入C57BL/6J×DBA小鼠受精卵的雄原核內(nèi),制備受Cre重組酶調(diào)控表達(dá)的OVA-HBs Ag轉(zhuǎn)基因小鼠。將F1代OVA-HBs Ag陽性母鼠與本室飼育的Alb-Cre轉(zhuǎn)基因陽性公鼠進(jìn)行雜交,獲得子代小鼠,觀察Cre對OVA-HBs Ag轉(zhuǎn)基因小鼠HBs Ag的誘導(dǎo)表達(dá)情況。采用PCR、ELISA和免疫組化方法檢測HBs Ag基因、Cre基因在轉(zhuǎn)基因小鼠體內(nèi)的整合及表達(dá)情況。結(jié)果共注射受精卵491枚,成活337枚,成活率68.6%。產(chǎn)下F0代小鼠29只,其中PCR陽性4只,外源基因整合率13.8%。目前已傳至F4代,F1-F4代PCR陽性率分別為27.5%、32.0%、22.9%、25.0%,ELISA法未檢測到血清中HBs Ag表達(dá)。將F1代OVA-HBs Ag陽性母鼠與Alb-Cre陽性公鼠雜交,獲得16只子代小鼠,PCR檢測Cre基因和HBs Ag基因雙陽性的子代小鼠有6只,其中2只小鼠血清HBs Ag檢測為陽性,誘導(dǎo)表達(dá)陽性率為33.3%。結(jié)論成功制備出OVA-HBs A轉(zhuǎn)基因小鼠,且可穩(wěn)定傳代,Cre重組酶可以誘導(dǎo)小鼠體內(nèi)HBs Ag的表達(dá)。
【作者單位】： 解放軍458醫(yī)院全軍肝病中心、全軍轉(zhuǎn)基因動物重點(diǎn)實驗室;
【關(guān)鍵詞】： 小鼠 轉(zhuǎn)基因 重組酶類 肝炎 乙型 慢性
【基金】：廣州市科技計劃項目(201510010004)~~
【分類號】：R512.62;R-332
【正文快照】： 感染造成的,每年因HBV感染造成的死亡人數(shù)約為100萬~200萬[1-3]。HBV慢性感染的機(jī)制至今仍未明確,目前仍缺乏有效的治療手段[4]。在乙肝相關(guān)研究中,乙肝動物模型具有非常重要的地位[5],但目前仍缺乏可用于慢性HBV感染和慢性乙肝研究的具有正常免疫功能的動物模型,客觀上影響了

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本文編號：529715