本文關(guān)鍵詞：蛋白酶K單抗研制及其雙抗體夾心ELISA定量檢測(cè)方法的建立

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【摘要】：目的研制蛋白酶K單克隆抗體并構(gòu)建定量檢測(cè)蛋白酶K的雙抗體夾心ELISA方法 ,用于生物制品中蛋白酶K的檢測(cè)。方法用雜交瘤技術(shù)制備抗蛋白酶K的單抗,用棋盤法優(yōu)化ELISA條件,建立定量檢測(cè)蛋白酶K的雙抗體夾心ELISA方法,分析其特異性、精密性和準(zhǔn)確性。結(jié)果經(jīng)免疫、融合、克隆、篩選到穩(wěn)定分泌蛋白酶K單抗的雜交瘤細(xì)胞。獲得1株阻斷蛋白酶K活性的單抗5G6,以5G6為包被抗體、4D3為酶標(biāo)抗體,構(gòu)建蛋白酶K定量檢測(cè)的ELISA方法。本方法線性相關(guān)系數(shù)R=0.99,線性范圍為293.4~2 500 pg/ml;定量限度為293.4 pg/ml;變異系數(shù)為CV15%;回收率介于89.3%~129.2%之間,37℃6 d的回收率80%;與蛋白酶K以外的其他蛋白無交叉反應(yīng)。結(jié)論獲得阻斷蛋白酶K活性的單抗,構(gòu)建出靈敏、特異的蛋白酶K定量檢測(cè)方法。
【作者單位】： 北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司;
【關(guān)鍵詞】： 蛋白酶K 單克隆抗體 雙抗體夾心ELISA
【分類號(hào)】：R392
【正文快照】： 蛋白酶K是一種從林伯氏白色念球菌(Tritirachiumalbum limber)中純化得到的絲氨酸蛋白酶類[1],合成該蛋白酶的微生物能在以角蛋白(Kerantin)為唯一碳氮源的環(huán)境中生長(zhǎng),因此得名[2]。由于蛋白酶K具有優(yōu)良的蛋白水解特性,不僅常用于多種分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)等相關(guān)實(shí)驗(yàn),而且廣

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本文編號(hào)：519604