本文關(guān)鍵詞：發(fā)熱伴血小板減少綜合征病毒滅活病毒的純化及免疫原性初步研究

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【摘要】：為了解純化后滅活發(fā)熱伴血小板減少綜合征病毒(Severe fever with thrombocytopenia syndrome bunyavirus,SFTSV)的免疫原性,本研究通過(guò)超濾濃縮和分子篩層析相結(jié)合的方法對(duì)滅活的SFTSV進(jìn)行純化,采用Western blot和SDS-PAGE對(duì)滅活病毒的純化樣品進(jìn)行分析和鑒定,采用雙抗夾心ELISA方法對(duì)其中糖蛋白(Glycoprotein,GP)和核蛋白(Nucleoprotein,NP)的抗原含量進(jìn)行檢測(cè)。濃縮純化的SFTSV滅活病毒,經(jīng)電鏡觀察并通過(guò)BCA法測(cè)定其總蛋白濃度。然后,將純化的滅活SFTSV按兩種不同的免疫程序免疫新西蘭兔,評(píng)價(jià)免疫原性和比較免疫效果。結(jié)果顯示,SFTSV滅活并超濾濃縮后,分子篩層析可觀察到兩個(gè)洗脫峰,其中之一為滅活病毒顆粒,SDS-PAGE、Western blot和ELISA法分析均可檢測(cè)到GP和NP抗原,而另一洗脫峰主要成分則為NP。濃縮后的純化病毒純度達(dá)90%以上,總蛋白濃度約為1.1mg/mL,且具有典型的布尼亞病毒電鏡形態(tài)。純化的SFTSV滅活病毒免疫實(shí)驗(yàn)動(dòng)物后,可在血清中檢出高滴度病毒特異性IgG和中和抗體,但抗體滴度受免疫程序的影響,0d、14d和28d天三針程序免疫動(dòng)物的效果明顯優(yōu)于0d、7d和28d免疫程序組。本研究顯示了滅活SFTSV培養(yǎng)液中除完整病毒顆粒外,還含有大量游離的NP,經(jīng)分子篩層析純化可獲得高純度滅活病毒,同時(shí)明確了純化的SFTSV滅活病毒具有良好的免疫原性,可誘導(dǎo)產(chǎn)生高滴度中和抗體和病毒特異IgG抗體,可為滅活病毒疫苗的進(jìn)一步研究提供重要的線索。
【作者單位】： 中國(guó)疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制所衛(wèi)生部醫(yī)學(xué)病毒和病毒病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 發(fā)熱伴血小板減少綜合征病毒(SFTSV) 滅活病毒 分子篩層析 純化 免疫原性
【基金】：“重大新藥創(chuàng)制”科技重大專(zhuān)項(xiàng):發(fā)熱伴血小板減少綜合征布尼亞病毒滅活疫苗的研制(2013ZX09102029)
【分類(lèi)號(hào)】：R373.3
【正文快照】： 發(fā)熱伴血小板減少綜合征(Sever fever withthrombocytopenia syndrome,SFTS)是一種危害嚴(yán)重的經(jīng)蜱傳播的新發(fā)傳染病,病死率高,主要表現(xiàn)為發(fā)熱,血小板和白細(xì)胞減少,嚴(yán)重者出現(xiàn)多臟器衰竭而死亡[1],病原體為發(fā)熱伴血小板減少綜合征病毒(Severe fever with thrombocytopenia synd

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1 郝成章;朱既明;巖波;何觀儀;童葵塘;王，

本文編號(hào)：515870