發(fā)布時(shí)間：2017-07-03 21:07

  本文關(guān)鍵詞：轉(zhuǎn)化生長因子-β1（TGF-β1）對Kruppel樣因子15（KLF15）的調(diào)控機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： TGF-β1 細(xì)胞外基質(zhì) KLF15

【摘要】：目的：探討TGF-β1對kruppel樣因子15（KLF15）表達(dá)的影響及其調(diào)控機(jī)制 方法：培養(yǎng)大鼠間質(zhì)成纖維細(xì)胞（NRK-49F），給予TGF-β1刺激及KLF15質(zhì)粒轉(zhuǎn)染NRK-49F過表達(dá)觀察KLF15和細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）變化，通過Real-time PCR檢測KLF15mRNA和FNmRNA、CTGFmRNA、COLⅢmRNA變化，并通過WesternBlot檢測KLF15和CTGF蛋白表達(dá)變化，通過ELSA檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清液FN蛋白和Ⅲ型膠原變化。絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路特異性斷劑預(yù)處理NRK-49F后給予TGF-β1干預(yù),觀察FNmRNA、CTGFmRNA、COLⅢ mRNA、KLF15mRNA和KLF15蛋白及相關(guān)蛋白的磷酸化水平變化。 結(jié)果：TGF-β1干預(yù)大鼠腎臟成纖維細(xì)胞（NRK-49F）后促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)的分泌，，抑制KLF15的表達(dá)。NRK-49F過表達(dá)KLF15后細(xì)胞外基質(zhì)表達(dá)明顯降低，ERK/MAPK和JNK/MAPK通路阻滯劑阻斷TGF-β1對KLF15的抑制作用，而給予P38/MAPK通路阻滯劑并未抑制TGF-β1對KLF15的調(diào)控作用 結(jié)論：KLF15可抑制細(xì)胞外基質(zhì)產(chǎn)生，TGF-β1可能通過ERK/MAPK和JNK/MAPK細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路調(diào)控KLF15的表達(dá)，促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)的產(chǎn)生。
【關(guān)鍵詞】：TGF-β1 細(xì)胞外基質(zhì) KLF15
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R3416
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-6
• 目錄6-9
• 中文詳細(xì)摘要9-11
• 英文詳細(xì)摘要11-14
• 縮略詞表14-15
• 前言15-20
• 參考文獻(xiàn)17-20
• 第一部分 TGF-β1 對細(xì)胞外基質(zhì)分泌和 KLF15 表達(dá)的影響20-44
• 一、 材料與方法20-34
• （一） 材料20-22
• 1、 細(xì)胞系20-21
• 2、 主要試劑21
• 3、 主要耗材和儀器21-22
• （二） 方法22-34
• 1、 大鼠腎臟間質(zhì)成纖維細(xì)胞培養(yǎng)和干預(yù)22
• 2、 實(shí)時(shí)定量 PCR22-24
• 3、 KLF15 質(zhì)粒擴(kuò)增24-25
• 4、 小鼠 KLF15 基因腺病毒包裝25-31
• 5、 腺病毒感染 NRK-49F 細(xì)胞的最佳 MOI 值摸索31
• 6、大鼠腎臟間質(zhì)成纖維細(xì)胞（NRK-49F）腺病毒感染31-32
• 7、 Western blot 檢測 NRK-49F 細(xì)胞的 KLF15 和 CTGF 蛋白表達(dá)量32-33
• 8、 ELSA 法檢測細(xì)胞上清液纖維連接蛋白和Ⅲ型膠原的表達(dá)33-34
• 9、 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理34
• 二、 結(jié)果34-40
• （一） TGF-β1 對大鼠腎臟間質(zhì)成纖維細(xì)胞（NRK-49F）細(xì)胞外基質(zhì)及 KLF15 的影響34-36
• （二） 過表達(dá) KLF15 及過表達(dá)后給予 TGF-β1 干預(yù)對細(xì)胞外基質(zhì)分泌的影響36-40
• 三、 討論40-41
• 參考文獻(xiàn)41-44
• 第二部分 TGF-β1 調(diào)控 KLF15 的機(jī)制研究44-60
• 一、 材料與方法45-50
• （一） 材料45-46
• 1、 細(xì)胞系45
• 2、 主要試劑45
• 3、 主要耗材和儀器45-46
• （二） 方法46-50
• 1、 大鼠間質(zhì)成纖維細(xì)胞（NRK-49F）培養(yǎng)和干預(yù)46
• 2、 實(shí)時(shí)定量 PCR46-49
• 3、 Western blot49-50
• 4、 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法50
• 二、 結(jié)果50-56
• （一） 給予 ERK/MAPK 特異性阻滯劑預(yù)處理后 TGF-β1 干預(yù) NRK-49F后 ERK 磷酸化水平、細(xì)胞外基質(zhì)分泌和 KLF15 變化50-52
• （二） 給予 JNK/MAPK 特異性阻滯劑預(yù)處理后 TGF-β1 干預(yù) NRK-49F 44后 JNK 磷酸化水平、細(xì)胞外基質(zhì)分泌和 KLF15 變化52-54
• （三） 給予 P38/MAPK 特異性阻滯劑預(yù)處理后 TGF-β1 干預(yù) NRK-49F 46后 JNK 磷酸化水平、細(xì)胞外基質(zhì)分泌和 KLF15 變化54-56
• 三、 討論56-57
• 參考文獻(xiàn)57-60
• 全文總結(jié)60-61
• 綜述61-67
• 參考文獻(xiàn)64-67
• 在讀期間完成和發(fā)表的文章67-68
• 致謝68

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 胡志娟,李英;TGF-β/Smad信號通路與腎臟疾病的研究進(jìn)展[J];中國中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志;2005年01期

2 唐雪棟;林瑞霞;楊青;李廣波;劉延霞;陳波;;地黃提取物對Smads信號通路影響的實(shí)驗(yàn)研究[J];中國中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志;2008年08期

3 賀玉珍;張李梅;牟授菡;陳曉健;尹燕志;鞠建偉;;中藥干預(yù)轉(zhuǎn)化生長因子-β_1在慢性腎臟病中的研究進(jìn)展[J];中國中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志;2010年10期

4 蘇麗娜;覃遠(yuǎn)漢;周添標(biāo);雷鳳英;趙艷君;黃韋芳;彭小銅;;轉(zhuǎn)化生長因子-β1/Smad3信號通路在腎間質(zhì)纖維化大鼠腎臟組織中的表達(dá)和作用[J];實(shí)用兒科臨床雜志;2011年05期

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本文編號：515176