本文關(guān)鍵詞：脊柱結(jié)核分枝桿菌鏈霉素耐藥株篩選及其耐藥機(jī)制初步探討

  更多相關(guān)文章： 結(jié)核耐藥機(jī)制 脊柱結(jié)核 耐藥基因 耐藥結(jié)核 基因突變

【摘要】：目的： 探討脊柱結(jié)核分枝桿菌鏈霉素耐藥基因rpsL、gidB、rrs的突變及其新的耐藥機(jī)制。為下一步深入探索脊柱結(jié)核新的耐藥機(jī)制研究提供基礎(chǔ)，為抗脊柱結(jié)核藥物的研發(fā)提供科學(xué)的理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)，提出新的治療策略和思路。最終遏制脊柱結(jié)核及肺結(jié)核在世界的傳播及惡化。 材料與方法： 選取2012年09月至2013年02月在我院收治的19例脊柱結(jié)核患者。術(shù)中顯露結(jié)核病灶后，收取干酪樣壞死物、死骨等病變組織，用標(biāo)本袋密封后送檢培養(yǎng)。 1. BACTECTMMGITTM960全自動(dòng)分枝桿菌快速培養(yǎng)儀進(jìn)行結(jié)核菌培養(yǎng)（其內(nèi)增加MGIT PANTA抑菌劑抑制污染及雜菌）及絕對(duì)濃度法藥敏試驗(yàn)：經(jīng)常規(guī)處理臨床標(biāo)本后，接種至MGIT培養(yǎng)管，置于BACTECTMMGITTM960全自動(dòng)分枝桿菌快速培養(yǎng)儀進(jìn)行培養(yǎng)；培養(yǎng)出陽性結(jié)果后進(jìn)行絕對(duì)濃度法藥敏試驗(yàn)(包含異煙肼、利福平、乙胺丁醇、鏈霉素)，同時(shí)進(jìn)行傳統(tǒng)菌種鑒定。 2.目的基因提�。╮psL、gidB、rrs）、電泳檢測及DNA測序：培養(yǎng)所獲得菌落經(jīng)常規(guī)前處理后，，經(jīng)基因組提取、PCR擴(kuò)增、瓊脂糖凝膠電泳、分離獲得目的DNA、最后進(jìn)行DNA測序。將測序所得結(jié)果與H37Rv DNA（來自Gene bank）做對(duì)比研究。分析基因突變位點(diǎn)與耐藥的相關(guān)性。 結(jié)果： 1. BACTECTMMGITTM960全自動(dòng)分枝桿菌快速培養(yǎng)儀培養(yǎng)及絕對(duì)濃度法藥物敏感試驗(yàn)： 1.1BACTECTMMGITTM960全自動(dòng)分枝桿菌快速培養(yǎng)儀培養(yǎng)結(jié)果：共培養(yǎng)標(biāo)本19例，培養(yǎng)陽性16例，陰性3例。陽性率為84.2%。 1.2絕對(duì)濃度法藥敏試驗(yàn)結(jié)果共16例陽性菌株進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，存在耐藥的有3例，耐藥率為18.7%(3/16)。 1.3菌種鑒定結(jié)果共16例標(biāo)本培養(yǎng)結(jié)果為陽性，以TCH(噻吩-2-羧酸肼)、對(duì)PNB(對(duì)硝基苯甲酸)和L-J(改良羅氏培養(yǎng)基)做菌種鑒定。鑒定結(jié)果：16例均鑒定為MTB，且均為人型。 2.基因芯片菌種鑒定及DNA測序 2.1基因芯片分枝桿菌菌種鑒定結(jié)果BACTECTMMGITTM960全自動(dòng)分枝桿菌快速培養(yǎng)儀培養(yǎng)的16例陽性菌株均進(jìn)行基因芯片菌種鑒定，鑒定結(jié)果均為人型，BACTECTMMGITTM960系統(tǒng)培養(yǎng)結(jié)果與基因芯片菌種鑒定的結(jié)果全數(shù)符合； 2.2DNA測序結(jié)果 A、B、C耐藥菌株在gidB基因測序中，均發(fā)現(xiàn)了新突變位點(diǎn)，A菌株：第615（205丙氨酸—丙氨酸）、299（100絲氨酸—苯丙氨酸）、276（92谷氨酸—天門冬氨酸）有突變，其中615為新的突變位點(diǎn)。B菌株：第615（205丙氨酸—丙氨酸）、299（100絲氨酸—苯丙氨酸）、276（92谷氨酸—天門冬氨酸）有突變，224移碼（670C缺失），其中615、670為新的突變位點(diǎn)。C菌株：在第615（205丙氨酸—丙氨酸）、299（100絲氨酸—苯丙氨酸）、276（92谷氨酸—天門冬氨酸）、102（34甘氨酸—甘氨酸）有突變，其中205、34為新的突變位點(diǎn)。在rpsL基因上A、B、C三菌株在363（121賴氨酸—賴氨酸）均有同義突變；而在rrs基因上均未發(fā)現(xiàn)突變。 結(jié)論： 1、本實(shí)驗(yàn)在脊柱結(jié)核桿菌鏈霉素耐藥株gidB基因中發(fā)現(xiàn)了新的突變位點(diǎn)：C102T、T615C、224移碼（670C缺失）。 2、初步得出在rrs、rpsL基因未發(fā)生突變及gidB基因C102T、T615C均為同義突變的情況下，T276G、G299A雙位點(diǎn)的突變可能導(dǎo)致脊柱結(jié)核桿菌SM高耐藥水平，而224移碼（670C缺失）也可能為其中原因之一。
【關(guān)鍵詞】：結(jié)核耐藥機(jī)制 脊柱結(jié)核 耐藥基因 耐藥結(jié)核 基因突變
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R3416
【目錄】：

• 主要縮略語及英文索引4-5
• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-11
• 前言11-13
• 材料與方法13-22
• 結(jié)果22-52
• 討論52-57
• 結(jié)論57-58
• 實(shí)驗(yàn)附圖58-65
• 參考文獻(xiàn)65-70
• 綜述70-89
• 參考文獻(xiàn)80-89
• 讀研期間發(fā)表文章89-90
• 致謝90

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 楊松;張耀亭;鐘敏;王易偉;;痰中耐藥結(jié)核分枝桿菌katG基因的快速檢測及異煙肼耐藥機(jī)制研究[J];江西醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2008年04期

2 孫冰梅 ,車志宏;結(jié)核分枝桿菌耐藥的分子機(jī)制及耐藥基因檢測方法的研究進(jìn)展[J];山西醫(yī)藥雜志;2005年04期

  本文關(guān)鍵詞：脊柱結(jié)核分枝桿菌鏈霉素耐藥株篩選及其耐藥機(jī)制初步探討

  更多相關(guān)文章： 結(jié)核耐藥機(jī)制 脊柱結(jié)核 耐藥基因 耐藥結(jié)核 基因突變

本文編號(hào)：515064