發(fā)布時間：2017-07-03 00:06

  本文關鍵詞：金黃色葡萄球菌基因敲除質粒的構建及應用

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【摘要】：背景:耐甲氧西林金黃色葡萄球菌已經(jīng)成為全球院內(nèi)感染的首要致病菌,建立快速簡單的基因敲除方法是研究耐甲氧西林金黃色葡萄球菌毒力、耐藥性的重要技術。目的:構建適用于金黃色葡萄球菌基因敲除的質粒,用于金葡菌耐藥性及毒力的研究。方法:以p UC19為構建的基本骨架,通過overlap PCR的技術手段,把p CL52.1中p LE194Ts溫敏復制子及質粒p HY300PLK中四環(huán)素抗性基因片段,通過高保證擴增后,連接入p UC19的Eco RⅠ位點,保留p UC19中所有的多克隆位點,構建大腸桿菌-金黃色葡萄球菌穿梭質粒,并對金黃色葡萄球菌N315 dap B基因進行敲除,通過多重PCR對基因敲除菌株進行鑒定。結果與結論:成功構建了大腸桿菌-金黃色葡萄球菌穿梭質粒p YZ1和p YZ8,并用于金葡菌基因的敲除,通過酶切及overlap技術構建了同源重組質粒p YZ-Δdap B,電轉入RN4220進行修飾后,再電轉入N315,通過溫度篩選,獲得了dap B基因突變菌株,成功的敲除了dap B基因。提示p YZ1和p YZ8能夠成功用于金黃色葡萄球菌耐藥菌株基因的敲除,為進一步研究臨床金黃色葡萄球菌分離株耐藥性及毒力提供了工具。
【作者單位】： 解放軍蘭州軍區(qū)烏魯木齊總醫(yī)院臨床檢驗診斷中心;
【關鍵詞】： 抗甲氧西林金黃色葡萄球菌 毒力 基因敲除技術 質粒 實驗動物 組織工程 金黃色葡萄球菌 甲氧西林 耐藥性 基因敲除 同源重組 國家自然科學基金
【基金】：國家自然科學基金青年項目(81401703)~~
【分類號】：R378.11
【正文快照】： 川省劍閣縣人,漢族,2006年新疆大學畢業(yè),主管技師,主要從事細菌耐藥方面的研究。通訊作者:袁文常,博士,主管技師,解放軍蘭州軍區(qū)烏魯木齊總醫(yī)院臨床檢驗診斷中心,新疆維吾爾自治區(qū)烏魯木齊市8300002015.05.025[http://www.crter.org](2015)05-00799-06稿件接受:2014-11-03Wei

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前8條

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中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前5條

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【相似文獻】

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8 北京大學臨床藥理研究所 衛(wèi)生部全國細菌耐藥監(jiān)測網(wǎng) 王進;金黃色葡萄球菌在蔓延[N];健康報;2008年

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