本文關(guān)鍵詞：乙肝可復(fù)制型DNA疫苗低電壓電穿孔遞送與免疫活性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：DNA疫苗在治療性疫苗研究領(lǐng)域的地位至關(guān)重要。關(guān)于DNA疫苗體內(nèi)遞送的研究發(fā)展很快，從最初的直接注射到基因槍接種，再發(fā)展到新近出現(xiàn)的電穿孔技術(shù)，質(zhì)粒DNA的體內(nèi)遞送效率顯著提高，這為DNA疫苗快速發(fā)展和應(yīng)用提供了有力的技術(shù)支持。其中電穿孔遞送兼?zhèn)涓咝А踩�、操作簡便和低成本等多�?xiàng)特質(zhì)，成為DNA疫苗遞送的首選方案，但關(guān)于電穿孔遞送條件的深入研究目前還有待進(jìn)步完善。 當(dāng)前文獻(xiàn)報(bào)道電穿孔遞送DNA疫苗的常用脈沖電壓多集中在180v-900v的高壓區(qū)。在實(shí)際應(yīng)用中我們發(fā)現(xiàn)高電壓遞送DNA疫苗質(zhì)粒，會對組織細(xì)胞造成定損傷；隨著免疫接種次數(shù)的增多，DNA疫苗在局部壞死組織的體內(nèi)遞送量也會逐漸降低；而且臨床試驗(yàn)時(shí)，患者對高電壓也會產(chǎn)生定恐懼不利于DNA疫苗的推廣應(yīng)用；所以本研究擬進(jìn)步探討低電壓下遞送DNA疫苗的可行性。 首先，本研究選取攜帶螢火蟲熒光素酶報(bào)告基因的三種不同類型表達(dá)質(zhì)粒，作為我們研究體內(nèi)電穿孔遞送的模式質(zhì)粒。它們分別是：①pGL3-CMV，為本室前期保存，帶有螢火蟲熒光素酶報(bào)告基因的完整表達(dá)框，分子量約為5kb，可以作為小分子量質(zhì)粒的代表；②pEE14.1-luc，為本研究自主構(gòu)建，由于基礎(chǔ)載體分子量較大約為11kb，該質(zhì)粒構(gòu)建成功后分子量可達(dá)12.5kb，可以作為大分子量質(zhì)粒的代表；③pSVK-luc，也是本研究自主構(gòu)建的表達(dá)質(zhì)粒，載體pSVK是基于塞姆利基森林病毒Semliki Forestvirus (SFV)改構(gòu)而成的可復(fù)制型表達(dá)載體，其表達(dá)特性與傳統(tǒng)DNA質(zhì)粒有顯著不同，該質(zhì)粒分子量約為13kb，可以作為復(fù)制子DNA疫苗質(zhì)粒的代表。重組質(zhì)粒pEE14.1-luc和pSVK-luc的構(gòu)建，以質(zhì)粒pGL3-CMV為模板擴(kuò)增熒光素酶報(bào)告基因，然后克隆入pEE14.1和pSVK載體中構(gòu)建而成，并采用Western blot、流式細(xì)胞術(shù)，免疫熒光和活體成像技術(shù)檢測重組質(zhì)粒在體內(nèi)外的表達(dá)情況。結(jié)果顯示重組質(zhì)粒pEE14.1-luc和pSVK-luc在體內(nèi)外均獲得高效表達(dá)。 其次，將pGL3-CMV、pEE14.1-luc和pSVK-luc作為模式質(zhì)粒，以1μg和50μg兩個(gè)劑量分別接種BALB/c小鼠左右腿部肌肉，再在低電壓范圍內(nèi)選取30V、60V和120V三個(gè)脈沖電壓進(jìn)行刺激，接種后48h活體成像儀檢測小鼠股四頭肌內(nèi)熒光素酶表達(dá)量。兩次接種后，剝離不同脈沖電壓刺激后的小鼠股四頭肌肉組織進(jìn)行HE染色觀察肌肉組織的纖維結(jié)構(gòu)。結(jié)果顯示：①各質(zhì)粒在高劑量50μg電穿孔遞送時(shí)，60V和120V脈沖電壓刺激下DNA遞送量顯著高于30V遞送，但60V和120V的DNA遞送量無顯著性差異；在120V電壓刺激后，HE染色檢測發(fā)現(xiàn)肌肉組織纖維出現(xiàn)明顯斷裂，溶脹，而在較低電壓組60V和30V的電壓刺激下未出現(xiàn)明顯組織纖維損傷，綜合比較，初步推斷60V低電壓下遞送三種類型質(zhì)粒DNA的表達(dá)效果均較優(yōu)，且局部組織細(xì)胞也無明顯損傷；②各質(zhì)粒在低劑量1μg電穿孔遞送時(shí)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)常規(guī)DNA質(zhì)粒pGL3-CMV、pEE14.1-luc均未檢測到熒光素酶基因表達(dá)，但可復(fù)制型大分子質(zhì)粒pSVK-luc在60V、120V脈沖電壓遞送下可見熒光素酶表達(dá)，初步推論可復(fù)制型質(zhì)粒在低劑量下接種存在定的優(yōu)勢。 最后，為進(jìn)步驗(yàn)證低電壓下遞送DNA疫苗在實(shí)際應(yīng)用中的可行性，以本室前期構(gòu)建的乙肝可復(fù)制型DNA疫苗pSVK-HBVA及常規(guī)小分子DNA疫苗pVAX1-HBVA為研究對象，分別設(shè)立兩種疫苗的高（100μg）中（10μg）低（1μg）三個(gè)劑量組，免疫接種BALB/c小鼠，并在60v的低電壓下進(jìn)行電穿孔遞送，分別檢測兩種DNA疫苗在小鼠體內(nèi)的體液免疫和細(xì)胞免疫應(yīng)答。結(jié)果顯示：1、低電壓（60V）遞送乙肝DNA疫苗在體內(nèi)激起較強(qiáng)的細(xì)胞與體液免疫應(yīng)答;2、60V電壓三次免疫接種過程順利，未見BALB/c小鼠股四頭肌肌肉組織僵硬現(xiàn)象，保證多次免疫遞送的成功；3，雖抗體滴度呈定的劑量依賴即隨著免疫劑量的升高，抗體滴度也逐步升高，但復(fù)制子DNA疫苗pSVK-HBVA在常規(guī)DNA疫苗1/100的劑量下，即可激活高效的細(xì)胞免疫應(yīng)答，顯示出良好應(yīng)用潛質(zhì)。 綜上所述，本研究以pGL3-CMV、pEE14.1-luc、pSVK-luc為模式質(zhì)粒，初步驗(yàn)證低電壓(60V)遞送DNA疫苗可行，又以低脈沖電壓（60V）遞送本室前期構(gòu)建乙肝可復(fù)制型DNA疫苗pSVK-HBVA和常規(guī)乙肝DNA疫苗pVAX1-HBVA，證實(shí)低電壓電穿孔遞送上述疫苗可激活體內(nèi)高水平的免疫應(yīng)答，且乙肝可復(fù)制子DNA疫苗在常規(guī)DNA疫苗1/100的劑量下，即可激活高效的細(xì)胞免疫應(yīng)答，揭示了乙肝可復(fù)制型DNA疫苗的良好應(yīng)用前景和潛質(zhì)；同時(shí)，，進(jìn)步驗(yàn)證DNA疫苗電穿孔低電壓體內(nèi)遞送的可行性，為DNA疫苗電穿孔免疫遞送提供重要參考數(shù)據(jù)更為電穿孔技術(shù)的臨床應(yīng)用奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：乙肝可復(fù)制型DNA疫苗 熒光素酶基因 電穿孔遞送 活體成像技術(shù) 細(xì)胞免疫 體液免疫
【學(xué)位授予單位】：新疆大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R392
【目錄】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-11
• 英文縮略語11-16
• 第一部分 前言16-24
• 參考文獻(xiàn)20-24
• 第二部分 實(shí)驗(yàn)部分24-67
• 第一章 熒光素酶表達(dá)質(zhì)粒 pEE14.1-luc 和 pSVK-luc 的構(gòu)建與表達(dá)24-48
• 1. 材料與方法24-39
• 1.1 材料24-25
• 1.1.1 菌株與載體24
• 1.1.2 化學(xué)試劑和酶24-25
• 1.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和主要儀器設(shè)備25
• 1.2 方法25-34
• 1.2.1 pSVK-luc、pEE14.1-luc 重組質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定25-30
• 1.2.1.1 pSVK-luc 重組質(zhì)粒的構(gòu)建25-26
• 1.2.1.2 PCR 回收產(chǎn)物與 pMDl8-simple-T 載體的連接反應(yīng)26-27
• 1.2.1.3 大腸桿菌(E.coli)DH5α感受態(tài)細(xì)胞的制備27
• 1.2.1.4 大腸桿菌(E. coil)DH5α的轉(zhuǎn)化27-28
• 1.2.1.5 重組質(zhì)粒 pMD18-simple-T-luc 的篩選與鑒定28-29
• 1.2.1.5.1 重組質(zhì)粒 pMD18-simple-T-luc 的菌液 PCR 鑒定28
• 1.2.1.5.2 重組質(zhì)粒 pMD18-simple-T-luc 的酶切鑒定28-29
• 1.2.1.5.3 重組質(zhì)粒 pMD18-simple-T-luc 的 DNA 測序分析29
• 1.2.1.6 重組質(zhì)粒 pSVK-luc 的構(gòu)建29-30
• 1.2.1.6.1 基于塞姆利基森林病毒復(fù)制子載體 pSVK 空載體的酶切鑒定29-30
• 1.2.1.6.2 重組質(zhì)粒 pSVK-luc 構(gòu)建30
• 1.2.1.6.3 重組表達(dá)質(zhì)粒 pSVK-luc 的轉(zhuǎn)化和鑒定30
• 1.2.2 重組質(zhì)粒 pEE14.1-luc 的構(gòu)建30-34
• 1.2.2.1 熒光素酶基因片段（luc）的獲得30-32
• 1.2.2.2 熒光素酶基因（luc）片段與 pEE14.1 載體的連接32-34
• 1.3 體外檢測熒光素酶基因的表達(dá)34-37
• 1.3.1 293T 細(xì)胞的培養(yǎng)與轉(zhuǎn)染34-35
• 1.3.1.1 293T 細(xì)胞的傳代培養(yǎng)34
• 1.3.1.2 293T 細(xì)胞的培養(yǎng)與轉(zhuǎn)染34-35
• 1.3.2 western blot 檢測 pSVK-luc、pEE14.1-luc 在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)的檢測35-36
• 1.3.3 流式細(xì)胞術(shù)及免疫熒光法體外檢測熒光素酶基因的表達(dá)36-37
• 1.4 活體成像技術(shù)檢測重組質(zhì)粒 pSVK -luc、pEE14.1-luc 活體內(nèi)表達(dá)37-39
• 1.4.1 免疫用質(zhì)粒 pSVK -luc、pEE14.1-luc、pGL3-CMV 的大量提取37-38
• 1.4.2 動(dòng)物免疫方案38-39
• 2. 結(jié)果39-44
• 2.1 熒光素酶基因 luc 的克隆39
• 2.2 熒光素酶基因 luc 片段的回收39
• 2.3 重組質(zhì)粒 pMD18-sample-T-luc 的鑒定39-41
• 2.3.1 重組質(zhì)粒 pMD18-sample-T-luc 的 PCR 鑒定39-40
• 2.3.2 重組 pMD18-sample-T-luc 載體的酶切鑒定40
• 2.3.3 重組質(zhì)粒 DNA pMD18-sample-T-luc 的測序分析40-41
• 2.4 塞姆利基森林病毒復(fù)制子載體（pSVK 空載體）的酶切鑒定41-42
• 2.4.1 重組質(zhì)粒 pSVK-luc、pEE14.1-luc 的鑒定41-42
• 2.4.1.1 重組質(zhì)粒 pSVK-luc、pEE14.1-luc 的 PCR 鑒定41-42
• 2.4.1.2 重組 pSVK-luc 載體的酶切鑒定42
• 2.4.1.3 重組質(zhì)粒 pSVK-luc、pEE14.1-luc 的測序鑒定42
• 2.5 Western blot 體外檢測熒光素酶基因的表達(dá)42-43
• 2.6 流式細(xì)胞術(shù)、免疫熒光體外檢測熒光素酶基因的表達(dá)43-44
• 2.6.1 流式細(xì)胞術(shù)檢測熒光素酶基因的表達(dá)43
• 2.6.2 免疫熒光法體外檢測熒光素酶基因的表達(dá)43-44
• 2.7 活體成像技術(shù)檢測重組質(zhì)粒 pSVK-luc、pEE14.1-luc 體內(nèi)表達(dá)44
• 3. 討論44-47
• 參考文獻(xiàn)47-48
• 第二章 低電壓電穿孔體內(nèi)遞送疫苗質(zhì)粒條件的初步研究48-58
• 1、材料與方法48-52
• 1.1 材料48
• 1.1.1 質(zhì)粒、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及主要試劑48
• 1.1.2 主要儀器設(shè)備48
• 1.2 方法48-52
• 1.2.1 pGL3-CMV，pSVK-luc 和 pEE14.1-luc 質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化48-49
• 1.2.2 pGL3-CMV，pSVK-luc 和 pEE14.1-luc 質(zhì)粒的大量提取49-50
• 1.2.3 重組質(zhì)粒 pGL3-CMV、pSVK-luc 和 pEE14.1-luc 的酶切鑒定50-51
• 1.2.4 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)分組及 DNA 免疫策略51
• 1.2.5 Xenogen 成像系統(tǒng)檢測螢光素酶在小鼠體內(nèi)的表達(dá)51-52
• 1.2.6 蘇木精-伊紅（HE）染色檢測 BALB/c 小鼠大腿肌肉纖維結(jié)構(gòu)52
• 1.2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理52
• 2．結(jié)果52-54
• 2.1 重組質(zhì)粒 pGL3-CMV，pSVK-luc 和 pEE14.1-luc 的酶切鑒定52
• 2.2 熒光素酶基因小鼠股四頭肌內(nèi)的表達(dá)量檢測52-53
• 2.3 蘇木精-伊紅（HE）染色法檢測 BALB/c 小鼠大腿肌肉纖維結(jié)構(gòu)53-54
• 3. 討論54-56
• 參考文獻(xiàn)56-58
• 第三章 低電壓體內(nèi)遞送乙肝 DNA 疫苗的初步藥效學(xué)分析58-67
• 1 材料和方法58-59
• 1.1 材料58-59
• 1.1.1 質(zhì)粒及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物58
• 1.1.2 主要試劑及檢測試劑盒58
• 1.1.3 主要的儀器設(shè)備58-59
• 2 方法59-62
• 2.1 免疫用質(zhì)粒的大量提取與純化59
• 2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及免疫策略59
• 2.3 乙肝治療性疫苗 pVAX-HBVA、pSVK-HBVA 的免疫活性研究59-62
• 2.3.1 ELISA 定量檢測 BALB/c 小鼠血清中抗 HBcAg 抗體59-60
• 2.3.2 ELISPOT 檢測 BALB/c 小鼠 IFN-γ分泌細(xì)胞數(shù)60-62
• 2.3.2.1 免疫小鼠脾臟單細(xì)胞懸液的制備60
• 2.3.2.2 ELISPOT 法檢測免疫小鼠脾細(xì)胞 IFN-γ分泌細(xì)胞數(shù)60-61
• 2.3.2.3 CCK-8 法檢測免疫小鼠脾臟淋巴細(xì)胞增殖61-62
• 2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理62
• 3. 結(jié)果62-64
• 3.1 ELISA 定量檢測 BALB/c 小鼠血清中抗 HBcAg 抗體62
• 3.2 ELISPOT 檢測免疫小鼠 IFN-γ分泌細(xì)胞數(shù)62-63
• 3.3 CCK8 檢測免疫小鼠脾臟淋巴細(xì)胞增殖63-64
• 4 討論64-66
• 參考文獻(xiàn)66-67
• 第三部分 結(jié)論與展望67-69
• 第四部分 附錄69-72
• 附錄一 碩士期間參加的研究課題和發(fā)表論文69-70
• 附錄二 個(gè)人簡歷70-72
• 致謝72-73

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 趙凌;多抗原疫苗接種預(yù)防狗蜱傳萊姆病[J];國外醫(yī)學(xué).預(yù)防.診斷.治療用生物制品分冊;2002年06期

2 于娜;鼻腔接種:一種有發(fā)展前景的非侵入性疫苗接種方法[J];國外醫(yī)學(xué).藥學(xué)分冊;2002年02期

3 孫鳳蘭;疫苗接種后血小板減少性紫癜[J];中國小兒血液;2002年04期

4 菲琳;;停止疫苗接種的后果令人擔(dān)憂[J];國外醫(yī)學(xué)情報(bào);2002年11期

5 焦蘭萍,賀志莉,王川,宋海玲;疫苗接種后急性播散性腦脊髓炎2例[J];實(shí)用兒科臨床雜志;2003年12期

6 迮文遠(yuǎn);論疫苗接種副反應(yīng)[J];華南預(yù)防醫(yī)學(xué);2003年01期

7 呂景佳,陳若荔,李奕雁;泉州市區(qū)有價(jià)疫苗使用現(xiàn)狀及控制對策[J];中國公共衛(wèi)生管理;2003年03期

8 王飛,賀蓓;兒童時(shí)期多抗原疫苗接種不會增加免疫外感染的危險(xiǎn)性[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;2005年35期

9 Smith P.J.;Chu S.Y.;Barker L.E.;王經(jīng)緯;;對沒有接種疫苗兒童的調(diào)查[J];世界核心醫(yī)學(xué)期刊文摘(兒科學(xué)分冊);2005年07期

10 呂進(jìn)明;趙維雅;王化巖;;關(guān)于疫苗分類管理的回顧分析[J];中國藥房;2006年04期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 趙根明;袁正安;張濤;顧寶柯;陳健;于淼;蔡華;陳昕;五磐石;;上海市甲型H1N1流感疫苗接種的效果效益評估[A];華東地區(qū)第十次流行病學(xué)學(xué)術(shù)會議暨華東地區(qū)流行病學(xué)學(xué)術(shù)會議20周年慶典論文匯編[C];2010年

2 楊錫強(qiáng);;疫苗接種的不良反應(yīng)及其處理[A];中華醫(yī)學(xué)會第十五次全國兒科學(xué)術(shù)大會論文匯編（上冊）[C];2010年

3 李明娟;王曉霞;;疫苗報(bào)道的困境與出路研究[A];2012年度中國健康傳播大會優(yōu)秀論文集[C];2012年

4 李鑫;滕繼軍;王軍紅;張晨;;疫苗接種后面部變異型吉蘭-巴雷綜合征1例報(bào)道[A];山東省2013年神經(jīng)內(nèi)科學(xué)學(xué)術(shù)會議暨中國神經(jīng)免疫大會2013論文匯編[C];2013年

5 吳云紅;朱亮;初煒;孔祥金;;基于互聯(lián)網(wǎng)的動(dòng)態(tài)疫苗監(jiān)管模式[A];2010年中國藥學(xué)大會暨第十屆中國藥師周論文集[C];2010年

6 萬朝敏;;疫苗接種在流感大流行群體防控中的作用[A];中華醫(yī)學(xué)會第十五次全國兒科學(xué)術(shù)大會論文匯編（上冊）[C];2010年

7 唐秋艷;林興兵;劉麗;史楠;曹友聲;;疫苗發(fā)展現(xiàn)狀與挑戰(zhàn)[A];科技、工程與經(jīng)濟(jì)社會協(xié)調(diào)發(fā)展——河南省第四屆青年學(xué)術(shù)年會論文集（下冊）[C];2004年

8 劉柏林;熊亞軍;唐有智;唐孝富;;合川區(qū)適齡兒童卡介疫苗接種成功率調(diào)查分析[A];重慶市預(yù)防醫(yī)學(xué)會2012年學(xué)術(shù)年會論文集[C];2012年

9 陳賢希;陳波;;疫苗藥品管理與應(yīng)用存在的問題及對策[A];2013年中國藥學(xué)會藥事管理專業(yè)委員會年會暨“醫(yī)藥安全與科學(xué)發(fā)展”學(xué)術(shù)論壇論文集（下冊）[C];2013年

10 熊仲祥;;“金苗通”:關(guān)注下一代從零開始[A];信息讓生活更美好——江蘇省通信行業(yè)信息化案例選編[C];2010年

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 伊逸;“疫苗事件”漸行漸遠(yuǎn) 監(jiān)管警鐘仍須長鳴[N];中國改革報(bào);2005年

2 馬現(xiàn)永;亟待營造落實(shí)科學(xué)發(fā)展觀的“生態(tài)環(huán)境”[N];中國畜牧獸醫(yī)報(bào);2005年

3 ;現(xiàn)在,最稀缺的仍是真相[N];第一財(cái)經(jīng)日報(bào);2010年

4 本報(bào)記者 趙玲;理性看待疫苗風(fēng)險(xiǎn)[N];中國醫(yī)藥報(bào);2010年

5 舒圣祥;請“創(chuàng)造條件”讓公眾監(jiān)督疫苗亂象[N];檢察日報(bào);2010年

6 記者李紅;世界疫苗接種投資嚴(yán)重不足[N];科技日報(bào);2002年

7 李丹;我國疫苗產(chǎn)業(yè)成長空間廣闊[N];科技日報(bào);2010年

8 本報(bào)記者;通報(bào)山西“貼簽疫苗”有關(guān)情況[N];山西日報(bào);2010年

9 玉溪市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 歐陽仙;禽類疫苗免疫注意事項(xiàng)[N];云南科技報(bào);2011年

10 本報(bào)記者 戴岱;疫苗接種 家長要有“安全弦”[N];中國消費(fèi)者報(bào);2013年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 邢泉;靶向防齲DNA疫苗增強(qiáng)粘膜免疫的分子機(jī)制研究[D];武漢大學(xué);2010年

2 赫兢;治療性乙型肝炎病毒DNA疫苗的基礎(chǔ)研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2005年

3 許瑾;河北省正定縣農(nóng)村居民對菌痢疫苗接受性及影響因素研究[D];復(fù)旦大學(xué);2005年

4 王敏慧;異型M-CSF/M-CSFR DNA疫苗構(gòu)建及其免疫效應(yīng)的研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2002年

5 邱志華;病毒樣顆粒構(gòu)建和治療性降壓疫苗的研究[D];華中科技大學(xué);2013年

6 朱中元;結(jié)核DNA疫苗的構(gòu)建、免疫功能及保護(hù)效果研究[D];華南熱帶農(nóng)業(yè)大學(xué);2004年

7 萬家余;甲、乙型肝炎口服二價(jià)DNA疫苗的研究[D];吉林大學(xué);2005年

8 趙振林;T細(xì)胞疫苗誘導(dǎo)移植免疫耐受的實(shí)驗(yàn)研究[D];昆明醫(yī)學(xué)院;2003年

9 尹遵棟;部分地區(qū)成人流行性乙型腦炎流行病學(xué)特征及疫苗接種的衛(wèi)生經(jīng)濟(jì)學(xué)評價(jià)[D];中國疾病預(yù)防控制中心;2011年

10 傅傳喜;S_(79)株腮腺炎減毒活疫苗人群免疫保護(hù)效果研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2009年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 侯永娟;學(xué)齡前流動(dòng)兒童疫苗接種調(diào)查與分析[D];首都經(jīng)濟(jì)貿(mào)易大學(xué);2012年

2 黃令;疫苗價(jià)值的經(jīng)濟(jì)學(xué)研究[D];上海社會科學(xué)院;2010年

3 陳宇斌;疫苗接種管理系統(tǒng)的設(shè)計(jì)與實(shí)現(xiàn)[D];廈門大學(xué);2014年

4 董鐸;我國疫苗不良事件監(jiān)測體系研究[D];沈陽藥科大學(xué);2007年

5 李亮;湖南省四縣農(nóng)村人群狂犬病暴露率及疫苗接種影響因素研究[D];中南大學(xué);2012年

6 錢小慧;全過程視角的疫苗安全影響因素分析[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2013年

7 魏茂提;疫苗聯(lián)合接種的安全性和有效性實(shí)驗(yàn)研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2004年

8 吳小麗;中試生產(chǎn)防齲DNA疫苗、結(jié)核DNA疫苗效力評價(jià)試驗(yàn)[D];武漢生物制品研究所;2010年

9 司亞軍;我國疫苗安全監(jiān)管法律問題研究[D];復(fù)旦大學(xué);2012年

10 劉曉丹;疫苗接種應(yīng)激對仔豬免疫相關(guān)因子的影響[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

  本文關(guān)鍵詞：乙肝可復(fù)制型DNA疫苗低電壓電穿孔遞送與免疫活性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：508173