本文關(guān)鍵詞：短發(fā)夾RNA慢病毒載體穩(wěn)定抑制NLRP3表達(dá)的HepG2細(xì)胞的構(gòu)建，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:構(gòu)建針對NLRP3基因的短發(fā)夾RNA(sh RNA)慢病毒表達(dá)載體,在Hep G2細(xì)胞中鑒定該載體對NLRP3的抑制效果。方法:設(shè)計(jì)針對NLRP3基因的sh RNA序列,將其插入慢病毒表達(dá)載體p WPT-U6-sh RNA-CMV-GFP中,將載體與包裝質(zhì)粒ps PAX2、p MD2.G共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,進(jìn)行病毒包裝;得到的病毒原液濃縮后系列稀釋為9個(gè)濃度遞減的病毒液,分別轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞后進(jìn)行滴度測定;用獲得的慢病毒液感染人肝癌細(xì)胞系Hep G2,獲得穩(wěn)定沉默NLRP3的細(xì)胞株;利用實(shí)時(shí)定量PCR和Western印跡檢測穩(wěn)定細(xì)胞株中NLRP3的沉默效應(yīng)。結(jié)果:構(gòu)建了具有沉默效應(yīng)的慢病毒干擾載體;稀釋法測定干擾病毒滴度為2×108TU/m L;實(shí)時(shí)定量PCR和Western印跡實(shí)驗(yàn)均證實(shí)慢病毒轉(zhuǎn)染后,細(xì)胞株中NLRP3表達(dá)水平明顯降低。結(jié)論:構(gòu)建了人NLRP3基因特異性慢病毒干擾載體,獲得NLRP3基因穩(wěn)定干擾的Hep G2細(xì)胞株。
【作者單位】： 解放軍總醫(yī)院內(nèi)分泌科;解放軍總醫(yī)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)所分子生物室;
【關(guān)鍵詞】： NLRP 短發(fā)卡RNA 慢病毒載體 Hep G細(xì)胞
【基金】：國家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃(2013AA020105)
【分類號】：R373;Q78
【正文快照】： NLRP3炎癥小體是新近發(fā)現(xiàn)的一種胞內(nèi)模式識別受體復(fù)合物,是核苷酸結(jié)合寡聚域樣受體家族[nucleotide-binding oligomerization domain(NOD)-like receptors,NLR]的模式識別受體。作為NLR家族中最明確的一個(gè)炎癥小體,其由NLRP3、半胱氨酸天冬氨酸特異性蛋白酶caspase-1和調(diào)節(jié)蛋

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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7 劉立霞;TNFAIP8家族在心肌缺血再灌注損傷中的表達(dá)及作用機(jī)制[D];山東大學(xué);2013年

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【相似文獻(xiàn)】

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1 劉希江;高峰;卜慧蓮;徐懋;曹菲;田學(xué)愎;楊輝;田玉科;;β-arrestin2抗基因RNA慢病毒載體體外基因沉默效應(yīng)研究[J];中國疼痛醫(yī)學(xué)雜志;2011年04期

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中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 杜婧;針對EphB4的小干擾RNA慢病毒載體對激光誘導(dǎo)的小鼠脈絡(luò)膜新生血管的抑制作用[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2012年

  本文關(guān)鍵詞：短發(fā)夾RNA慢病毒載體穩(wěn)定抑制NLRP3表達(dá)的HepG2細(xì)胞的構(gòu)建，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：507136