本文關(guān)鍵詞：短發(fā)夾RNA慢病毒載體穩(wěn)定抑制NLRP3表達的HepG2細胞的構(gòu)建，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:構(gòu)建針對NLRP3基因的短發(fā)夾RNA(sh RNA)慢病毒表達載體,在Hep G2細胞中鑒定該載體對NLRP3的抑制效果。方法:設計針對NLRP3基因的sh RNA序列,將其插入慢病毒表達載體p WPT-U6-sh RNA-CMV-GFP中,將載體與包裝質(zhì)粒ps PAX2、p MD2.G共轉(zhuǎn)染293T細胞,進行病毒包裝;得到的病毒原液濃縮后系列稀釋為9個濃度遞減的病毒液,分別轉(zhuǎn)染293T細胞后進行滴度測定;用獲得的慢病毒液感染人肝癌細胞系Hep G2,獲得穩(wěn)定沉默NLRP3的細胞株;利用實時定量PCR和Western印跡檢測穩(wěn)定細胞株中NLRP3的沉默效應。結(jié)果:構(gòu)建了具有沉默效應的慢病毒干擾載體;稀釋法測定干擾病毒滴度為2×108TU/m L;實時定量PCR和Western印跡實驗均證實慢病毒轉(zhuǎn)染后,細胞株中NLRP3表達水平明顯降低。結(jié)論:構(gòu)建了人NLRP3基因特異性慢病毒干擾載體,獲得NLRP3基因穩(wěn)定干擾的Hep G2細胞株。
【作者單位】： 解放軍總醫(yī)院內(nèi)分泌科;解放軍總醫(yī)院基礎醫(yī)學所分子生物室;
【關(guān)鍵詞】： NLRP 短發(fā)卡RNA 慢病毒載體 Hep G細胞
【基金】：國家高技術(shù)研究發(fā)展計劃(2013AA020105)
【分類號】：R373;Q78
【正文快照】： NLRP3炎癥小體是新近發(fā)現(xiàn)的一種胞內(nèi)模式識別受體復合物,是核苷酸結(jié)合寡聚域樣受體家族[nucleotide-binding oligomerization domain(NOD)-like receptors,NLR]的模式識別受體。作為NLR家族中最明確的一個炎癥小體,其由NLRP3、半胱氨酸天冬氨酸特異性蛋白酶caspase-1和調(diào)節(jié)蛋

【共引文獻】

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【相似文獻】

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中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

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