本文關(guān)鍵詞：丙型肝炎病毒核心蛋白核酸適體抗病毒作用機制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：丙型肝炎病毒（HCV）是引起嚴(yán)重慢性肝臟疾病的主要病原體，世界上約有1.8億的感染者。由于HCV的抗體產(chǎn)生周期長、HCV RNA含量低等使得通過檢測抗-HCV及實時熒光定量PCR檢測HCV RNA的方法存在嚴(yán)重的局限性。此外，HCV基因型具有高度變異性和突變性，使得目前的治療效果很不理想。加之，缺乏有效的丙肝疫苗，所以開發(fā)出一種新型檢測和治療HCV的方法在全世界范圍內(nèi)刻不容緩。HCV感染性病毒顆粒產(chǎn)生模式是核心蛋白在脂滴表面富積，參與病毒顆粒在脂滴表面或附近的組裝,然后在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)獲得包膜，進(jìn)一步分泌出體外。 核酸適體被稱為化學(xué)抗體，與抗體相比，核酸適體因其分子小、易合成和易修改而具有顯著性優(yōu)勢。研究發(fā)現(xiàn)，運用SELEX技術(shù)篩選出的針對HCV核心蛋白的核酸適體在開發(fā)藥物方面具有廣闊的前景。本文將HCV核心蛋白分段克隆到原核/真核表達(dá)載體，并對core分段蛋白進(jìn)行了原核表達(dá)及純化。我們的研究結(jié)果顯示：core蛋白核酸適體不僅能夠特異性識別原核表達(dá)的重組core蛋白，，還能檢測出HCV病人血清中的core蛋白。研究還發(fā)現(xiàn)core核酸適體不影響HCV RNA的復(fù)制及病毒的釋放，但抑制感染性病毒顆粒的產(chǎn)生。在核酸適體處理的HCV感染系統(tǒng)中，核酸適體沒有誘導(dǎo)干擾素及干擾素刺激因子（ISGs）的產(chǎn)生，細(xì)胞外ELONA實驗證實了核酸適體能夠與HCV core蛋白D1和D2相互作用，在細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)入真核重組質(zhì)粒D1及D1-D2后發(fā)現(xiàn)病毒的感染效果有了明顯的逆轉(zhuǎn)，這些結(jié)果表明抗病毒作用的產(chǎn)生是因為核酸適體影響了core蛋白的D1與D2區(qū)的生理學(xué)功能所致。進(jìn)一步實驗數(shù)據(jù)顯示，這些核酸適體破壞了core蛋白與脂滴表面的共定位，影響了core蛋白與NS5A蛋白的相互作用，擾亂了core蛋白與病毒基因組RNA的結(jié)合。 綜上所述，core核酸適體是通過影響core蛋白的生理學(xué)功能來影響HCV病毒的組裝，進(jìn)而達(dá)到抑制感染性病毒產(chǎn)生的目的�？傊覀�?yōu)檠芯縞ore蛋白在病毒生活周期中的作用提供了新的實驗工具，為開發(fā)早期的HCV診斷試劑及開發(fā)新一代抗病毒藥物提供參考。
【關(guān)鍵詞】：丙型肝炎病毒 核心蛋白 核酸適體 病毒組裝 ELONA
【學(xué)位授予單位】：湖南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R373.21
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-8
• 目錄8-11
• 第1章 緒論11-19
• 1.1 慢性丙型肝炎11-14
• 1.1.1 丙型肝炎病毒的發(fā)現(xiàn)及流行病學(xué)11-12
• 1.1.2 丙型肝炎病毒蛋白的基因結(jié)構(gòu)和功能12-13
• 1.1.3 丙型肝炎病毒生活周期13-14
• 1.2 丙型肝炎核心蛋白簡介14-15
• 1.2.1 丙型肝炎核心蛋白（core）的結(jié)構(gòu)與功能14-15
• 1.2.2 丙型肝炎核心蛋白介導(dǎo)的病毒顆粒組裝15
• 1.3 核酸適體及其藥物的臨床研究15-17
• 1.3.1 核酸適體功能簡介15-16
• 1.3.2 核酸適體藥物在臨床的研究16-17
• 1.4 課題的研究意義及設(shè)計思路17-19
• 第2章 HCV 核心分段蛋白的表達(dá)及純化19-42
• 2.1 前言19
• 2.2 實驗材料、儀器設(shè)備及溶液配制19-24
• 2.2.1 實驗材料19-20
• 2.2.2 實驗儀器設(shè)備20-21
• 2.2.3 溶液配制21-24
• 2.3 實驗方法24-35
• 2.3.1 原核/真核重組質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定24-31
• 2.3.2 原核重組質(zhì)粒 HCV 分段蛋白的小量表達(dá)31-33
• 2.3.3 原核 HCV core 分段蛋白的大量表達(dá)及純化33-35
• 2.4 實驗結(jié)果與討論35-41
• 2.4.1 原核/真核重組質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定35-38
• 2.4.2 分段蛋白的原核小量表達(dá)及鑒定38
• 2.4.3 分段蛋白的原核大量表達(dá)及純化38-40
• 2.4.4 討論40-41
• 2.5 本章小結(jié)41-42
• 第3章 檢測 Core 核酸適體與核心蛋白的結(jié)合區(qū)42-48
• 3.1 前言42
• 3.2 實驗材料及儀器42-43
• 3.2.1 實驗材料42
• 3.2.2 實驗儀器42-43
• 3.3 實驗方法43
• 3.4 實驗結(jié)果與討論43-47
• 3.4.1 丙型肝炎病毒核心蛋白核酸適體識別 core 蛋白的親和力鑒定43-45
• 3.4.2 丙型肝炎病毒核心蛋白核酸適體與 core 蛋白的結(jié)合區(qū)鑒定45-46
• 3.4.3 病人血清中核心蛋白含量與 HCV 病毒滴度的關(guān)系46-47
• 3.4.4 討論47
• 3.5 本章小結(jié)47-48
• 第4章 HCV Core 核酸適體對病毒生活周期的影響48-57
• 4.1 前言48
• 4.2 實驗材料、儀器48-49
• 4.2.1 實驗材料48-49
• 4.2.2 實驗儀器49
• 4.3 實驗方法49-53
• 4.4 實驗結(jié)果與討論53-56
• 4.4.1 HCV core 核酸適體對丙型肝炎病毒感染的抑制作用53-55
• 4.4.2 HCV core 核酸適體不誘導(dǎo) HCV 感染細(xì)胞先天性免疫應(yīng)答55
• 4.4.3 討論55-56
• 4.5 本章小結(jié)56-57
• 第5章 HCV Core 核酸適體抗病毒作用機制57-63
• 5.1 前言57
• 5.2 實驗材料、儀器57-58
• 5.2.1 實驗材料57-58
• 5.2.2 實驗儀器58
• 5.3 實驗方法58-59
• 5.4 實驗結(jié)果與討論59-62
• 5.4.1 core 蛋白 D1 和 D2 區(qū)對病毒感染的影響59-60
• 5.4.2 核心蛋白核酸適體對病毒組裝的影響60-62
• 5.4.3 討論62
• 5.5 本章小結(jié)62-63
• 結(jié)論與展望63-64
• 參考文獻(xiàn)64-71
• 致謝71

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 唐霓;;丙型肝炎病毒編碼蛋白的生物學(xué)功能[J];世界華人消化雜志;2009年28期

  本文關(guān)鍵詞：丙型肝炎病毒核心蛋白核酸適體抗病毒作用機制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：504654