本文關(guān)鍵詞：四種結(jié)核分枝桿菌特異蛋白抗原的克隆表達(dá)和血清學(xué)評價(jià)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：我國長期采用細(xì)菌學(xué)結(jié)合臨床癥狀的方法診斷結(jié)核病,它結(jié)合了痰涂片鏡檢、細(xì)菌培養(yǎng)、結(jié)核菌素皮膚試驗(yàn)(PPD皮試)和X線影像等檢查的結(jié)果。但由于痰涂片陽性率低、細(xì)菌培養(yǎng)費(fèi)時(shí)長,PPD皮試存在假陽性,以及X線影像檢查特異性低,從而大大降低了對結(jié)核病診斷的效率。近些年一些新興結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室檢測技術(shù)的應(yīng)用,使結(jié)核病的檢測更加快速靈敏。血清學(xué)檢測技術(shù)就是其中的典范,這種技術(shù)具有操作簡便、快速、穩(wěn)定性好、無需特殊精密儀器、便于推廣等優(yōu)點(diǎn),成為結(jié)核病診斷的良好輔助方法。然而,目前應(yīng)用的結(jié)核抗原大多靈敏度很低,單一抗原在血清學(xué)檢測時(shí)效果并不理想。本研究利用早期實(shí)驗(yàn)室建立的評價(jià)方法,在完善方法的同時(shí),對四種結(jié)核分枝桿菌特異性蛋白抗原進(jìn)行了克隆、表達(dá)和純化。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay, ELISA)和受試者工作特征曲線法(Receiver Operating Characteristic Curve,ROC)建立出一套抗原診斷效能的評價(jià)體系。然后,對四種重組結(jié)核抗原的診斷效能進(jìn)行分析,進(jìn)而分析出不同抗原組合的診斷性能,并以實(shí)驗(yàn)結(jié)果對評價(jià)方法進(jìn)行佐證,最終評價(jià)得出最佳的抗原組合方式。 研究通過文獻(xiàn)檢索、抗原表位分析等方法,篩選出CFP10-ESAT6、38kDa、Ag85B和HspX四種蛋白進(jìn)行了克隆表達(dá)。成功純化出重組蛋白CFP10-ESAT6、38kDa、Ag85B和HspX后,應(yīng)用ELISA方法對其診斷價(jià)值進(jìn)行了評價(jià)。測得這兒種蛋白的最佳包被濃度分別為2.79μg/ml、5.45μg/ml、9.00μg/ml和7.60μg/ml,最佳血清稀釋度除Ag85B為1：400外,其余均為1：200。對CFP10-ESAT6、38kDa、Ag85B和HspX四種結(jié)核抗原及其不同組合的ELISA檢測的評價(jià)結(jié)果顯示,單一抗原中38kDa的診斷性能最佳,靈敏度為55.9%,特異度為87.8%,Youden指數(shù)為0.437；其余三種抗原的靈敏度從40.9%至47.9%不等,Youden指數(shù)均低于38kDa；抗原組合的診斷效能高于單種抗原,診斷效果最好的組合為38kDa+CFP10-ESAT6+HspX,靈敏度為75.3%,特異度為68.9%,Youden指數(shù)為0.442,實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)其為最佳的抗原組合。 本研究成功對CFP10-ESAT6、38kDa、Ag85B和HspX幾種抗原進(jìn)行了克隆、表達(dá)、純化和檢測性能評價(jià),對之前的研究結(jié)果做出了進(jìn)一步數(shù)據(jù)補(bǔ)充,對今后的血清學(xué)診斷方法提出了合理的抗原組合建議。
【關(guān)鍵詞】：結(jié)核病 結(jié)核分枝桿菌 診斷效能評價(jià) 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) 受試者工作特征曲線
【學(xué)位授予單位】：中國疾病預(yù)防控制中心
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R378;R392
【目錄】：

• Abbreviation6-7
• 中文摘要7-9
• Abstract9-12
• 前言12-14
• 總體實(shí)驗(yàn)技術(shù)路線14-15
• 第一部分 抗原的克隆表達(dá)、純化及鑒定15-43
• 材料和方法15-26
• 結(jié)果26-41
• 討論41-43
• 第二部分 抗原的血清學(xué)驗(yàn)證43-57
• 材料和方法43-46
• 結(jié)果46-52
• 討論52-57
• 結(jié)論57-58
• 參考文獻(xiàn)58-60
• 綜述60-67
• 參考文獻(xiàn)65-67
• 致謝67

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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本文編號：497218