本文關(guān)鍵詞：β-神經(jīng)生長(zhǎng)因子基因轉(zhuǎn)染對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞功能的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的研究β-神經(jīng)生長(zhǎng)因子(β-NGF)基因轉(zhuǎn)染人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)對(duì)細(xì)胞增殖、單克隆形成、細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞遷移相關(guān)功能的影響。方法將人源β-NGF基因重組的真核表達(dá)質(zhì)粒(p EGFP-N1/β-NGF)轉(zhuǎn)染至HUVEC,同時(shí)設(shè)置p EGFP-N1空載組、正常組(未轉(zhuǎn)染質(zhì)粒)、酪氨酸激酶受體A(Trk A)抑制劑組(β-NGF基因轉(zhuǎn)染組加入1∶1000的K252a)。觀察轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化,利用real-time PCR和Western blot檢測(cè)β-NGF基因轉(zhuǎn)染表達(dá)效果,MTT法檢測(cè)β-NGF基因轉(zhuǎn)染對(duì)細(xì)胞增殖的影響,平板單克隆實(shí)驗(yàn)檢測(cè)β-NGF基因轉(zhuǎn)染對(duì)細(xì)胞單克隆形成能力的變化,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)β-NGF基因轉(zhuǎn)染對(duì)細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡率的影響,Transwell方法檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞遷移能力的變化,Western blot檢測(cè)β-NGF基因轉(zhuǎn)染前后Trk A和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)的表達(dá)變化。結(jié)果β-NGF基因成功轉(zhuǎn)染HUVEC 48 h后能夠顯著提高β-NGF mRNA和蛋白的表達(dá)水平(P0.05),同時(shí)促進(jìn)細(xì)胞增殖、單克隆形成、細(xì)胞遷移能力,并影響細(xì)胞周期抑制細(xì)胞凋亡率(P0.05)。β-NGF基因轉(zhuǎn)染HUVEC后Trk A和VEGF表達(dá)水平也隨之顯著上升(P0.05),但受到Trk A抑制劑的抑制。結(jié)論β-NGF基因能夠成功轉(zhuǎn)染HUVEC并顯著表達(dá),進(jìn)而促進(jìn)細(xì)胞增殖、單克隆形成、細(xì)胞遷移能力,并影響細(xì)胞周期抑制細(xì)胞凋亡率,而其發(fā)揮作用與Trk A結(jié)合誘導(dǎo)VEGF表達(dá)上調(diào)有關(guān)。
【作者單位】： 三峽大學(xué)人民醫(yī)院心血管內(nèi)科;三峽大學(xué)附屬第一人民醫(yī)院心血管內(nèi)科;
【關(guān)鍵詞】： 內(nèi)皮細(xì)胞 β-神經(jīng)生長(zhǎng)因子 基因轉(zhuǎn)染 細(xì)胞增殖 細(xì)胞遷移
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助(81270280)
【分類號(hào)】：R329.2
【正文快照】： 神經(jīng)生長(zhǎng)因子(nerve growth factor,NGF)是目前最先發(fā)現(xiàn)且研究較為清楚的一個(gè)神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子,而β-NGF是其中具有生物活性的亞基成分[1]。近來(lái)研究發(fā)現(xiàn)β-NGF可以在體外作用于血管內(nèi)皮促進(jìn)血管新生,表明其在血管損傷修復(fù)中發(fā)揮積極作用[2]。王中京等[3]構(gòu)建β-NGF腺病毒轉(zhuǎn)染,發(fā)

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：497143