本文關鍵詞：抗人CD86雙價抗體的研制及生物學活性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：B7分子是表達在抗原遞呈細胞表面的協(xié)同刺激分子，其中CD86(又稱B7-2)和CD80(又稱B7-1)為B7分子家族重要成員，為T細胞活化提供重要的協(xié)同刺激信號。T細胞的活化不但需要TCR識別抗原肽段所介導的特異性信號，還需要CD28分子結合抗原提呈細胞表面B7分子所提供的協(xié)同刺激信號，從而誘導T細胞增殖并分化，發(fā)揮正常免疫防御及調節(jié)功能。 有研究表明，B系淋巴瘤細胞及多發(fā)性骨髓瘤細胞表面同時高表達CD86與CD28，在細胞間形成交互活化信號，導致此類腫瘤細胞的增殖與轉移；進一步研究表明，抗體封閉該腫瘤細胞表面CD86分子可以有效遏制此細胞的增殖。本研究在已獲得穩(wěn)定分泌抗人CD86單克隆抗體雜交瘤的基礎上，研制抗人CD86雙價抗體，并研究其對協(xié)同刺激信號的阻斷作用及對表達CD86的腫瘤細胞體內、外增殖的影響。 第一部分抗人CD86雙價抗體真核表達載體的構建及表達 【目的】構建重組抗人CD86雙價抗體真核表達載體，轉染至CHO細胞中表達，分離培養(yǎng)上清，純化CD86-diabody并鑒定其特性。 【方法】從分泌抗人CD86鼠源抗體的雜交瘤1D1中克隆抗體重、輕鏈可變區(qū)基因VH及VL。通過SOE-PCR技術構建VH-(GGGGS)-VL雙價抗體基因，再整合到真核表達載體pIRES2-EGFP中，以脂質體法轉染CHO細胞，F(xiàn)CM篩選G418加壓培養(yǎng)的陽性細胞克隆。大量培養(yǎng)該CHO細胞，IMAC法純化細胞培養(yǎng)上清得到抗體，再用BCA法測定抗體濃度，，最后通過SDS-PAGE電泳和考馬斯亮藍染色鑒定抗體雙價性。 【結果】構建了抗人CD86-diabody真核表達載體，篩選出一株具有穩(wěn)定分泌抗人CD86-diabody能力的CHO細胞株，細胞培養(yǎng)上清中抗體純品的得率為5.24mg/L，雙價抗體分子量約為56kDa。 【結論】構建了抗人CD86-diabody真核表達載體，在CHO細胞中成功表達，獲得了穩(wěn)定分泌抗人CD86-diabody的CHO細胞株，大量培養(yǎng)并純化得到了雙價抗體分子。 第二部分抗人CD86雙價抗體的生物活性研究 【目的】研究CD86-diabody對細胞表面CD86分子的特異性識別及介導的生物學活性。 【方法】通過免疫熒光技術分析CD86-diabody對人B系淋巴瘤細胞株Raji及Daudi膜型CD86分子的陽性結合率，并與抗CD86鼠源親本抗體及單鏈抗體比較抗原結合特性；通過單向混合淋巴細胞反應研究CD86-diabody對CD86-CD28協(xié)同刺激信號的阻斷作用；將CD86-diabody加入到Raji細胞培養(yǎng)體系中進行共培養(yǎng)，分析其對Raji細胞體外增殖的影響，并通過流式細胞術研究其對Raji細胞凋亡的誘導作用；Raji細胞經(jīng)CD86-diabody孵育后，接種BALB/c裸鼠，觀察其對腫瘤細胞體內成瘤的影響。 【結果】CD86-diabody與Raji及Daudi細胞結合陽性率分別為77.2%及70.6%；競爭結合實驗結果顯示，CD86-diabody對親本抗體及CD86-scFv與CD86結合抑制率為69.2%與56.7%；CD86-diabody阻斷協(xié)同刺激信號后，對淋巴細胞增殖的抑制率為62.9%；CD86-diabody孵育后，Raji細胞體外增殖率下降了37%，凋亡率增加了17.0%；Raji細胞經(jīng)CD86-diabody封閉后接種裸鼠，動態(tài)觀察發(fā)現(xiàn)腫瘤形成延遲6-8天，腫瘤體積較對照組相比小約30%。 【結論】研制的抗人CD86-diabody能特異性結合細胞膜型CD86分子，與親本抗體有著相同的抗原結合特性，可阻斷CD86-CD28信號的協(xié)同刺激作用并對表達CD86的腫瘤細胞體內、外增殖具有抑制效應。
【關鍵詞】：人CD86雙價抗體 CHO細胞 抑制增殖效應 協(xié)同刺激信號
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R392
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 研究背景10-19
• 參考文獻15-19
• 第一部分 抗人 CD86 雙價抗體真核表達載體的構建及表達19-40
• 1 試劑和材料19-20
• 2 實驗方法20-30
• 3 實驗結果30-37
• 4 討論37-38
• 參考文獻38-40
• 第二部分 抗人 CD86 雙價抗體生物學活性研究40-53
• 1 試劑和材料40-41
• 2 實驗內容41-44
• 3 實驗結果44-49
• 4 討論49-52
• 參考文獻52-53
• 全文總結53-54
• 綜述 雙價抗體的研制及在疾病診斷及生物治療中的應用54-62
• 參考文獻59-62
• 碩士研究生期間發(fā)表的論文62-63
• 本研究所獲得基金資助63-64
• 縮寫詞表64-65
• 致謝65-67

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前7條

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  本文關鍵詞：抗人CD86雙價抗體的研制及生物學活性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：491726