本文關鍵詞：耐甲氧西林金黃色葡萄球菌表型與基因型分析研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：通過分析臨床分離的耐甲氧西林金黃色葡萄球菌菌株(methicillin-resistant staphylococcus aureus, MRSA)對多種抗菌藥物的耐藥性及耐藥特點,從表型和基因型兩個層面來分析研究MRSA的多重耐藥機制,尋找藥物作用的新靶點,為臨床合理有效使用抗菌藥物,治療MRSA感染以及預防耐藥菌株的不斷擴大提供一定的幫助。 方法：(1)本實驗收集了山西醫(yī)科大學第一醫(yī)院檢驗科、山西醫(yī)科大學第二醫(yī)院檢驗科和山西省人民醫(yī)院檢驗科從2012年1月到12月分離的金黃色葡萄球菌152株。采用法國梅里埃VITEK-Ⅱ細菌鑒定系統(tǒng)對收集菌株進行了確證試驗,152株均為金黃色葡萄球菌。依據(jù)美國臨床實驗室標準化研究所(NCLSI)標準操作規(guī)程,采用K-B (Kirby-Bauer)瓊脂擴散法和法國梅里埃VITEK-Ⅱ藥敏分析系統(tǒng)對收集菌株進行了耐藥表型確證和藥物敏感試驗,其中51株為MRSA,并對51株MRSA進行了p-內(nèi)酰胺酶檢測和耐藥特點分析。(2)用E-test卡測定了實驗菌株對萬古霉素的敏感性,即實驗菌株對萬古霉素的最低抑菌濃度(MIC)。(3)提取51株MRSA菌株DNA,采用特異性引物序列聚合酶鏈式反應(PCR)擴增法進行mecA, mecI、 mecRl基因檢測。(4)挑選4株具有代表性和特殊性的菌株,對其DNA擴增產(chǎn)物進行測序。(5)運用多重PCR擴增法對其進行了MRSA的耐藥性基因島(SCCmec)分型。(6)同時運用多重PCR擴增法進行MRSA毒力基因方面的研究。 結(jié)果：(1)MRSA對β-內(nèi)酰胺類藥物高度耐藥,耐藥率達100%,環(huán)丙沙星、左氧氟沙星、克林霉素、紅霉素、四環(huán)素、替考拉寧、復方磺胺甲惡唑、磷霉素、利奈唑胺、利福平和萬古霉素的耐藥率分別為88.2%、86.3%、86.3%、84.3%、82.4%、0%、15.7%、29.4%、0%、39.2%、0%。(2)未發(fā)現(xiàn)耐萬古霉素的菌株。(3)實驗菌株mecA、 mecI、mecRl基因檢出率全部為100%。(4)基因測序表明本地MRSA菌株與基因庫中已報道的菌株同源性在97%以上。(5)實驗菌株SCCmec分型發(fā)現(xiàn)多為Ⅱ型和Ⅲ型,另有29株可能為Ⅱ型新的亞型。(6)毒力基因檢測顯示femA基因檢出率為100%,腸毒素基因see攜帶率為76.5%,sed攜帶率為47.1%,sec攜帶率為5.9%；表皮剝落素基因etb攜帶率為49.0%；中毒性休克綜合癥毒素基因tst攜帶率為5.9%；有43.1%(22/51)株菌株同時帶有兩種腸毒素基因,有39.2%(20/51)株菌株同時帶有兩種毒素基因,有5.9%(3/51)株菌株同時帶有三種毒素基因。 結(jié)論：(1)收集的金黃色葡萄球菌中,β-內(nèi)酰胺類藥物耐藥率高達100%,MRSA對萬古霉素、替考拉寧、利奈唑胺敏感,對其他抗菌藥物均呈多重耐藥,耐藥趨勢嚴峻,需要對目前藥效的抗生素規(guī)范管理以延緩其耐藥進程。加強對萬古霉素、替考拉寧、利奈唑胺等常用藥物最小抑菌濃度(MIC)的監(jiān)測和臨床報告,關注萬古霉素對MRSA治療效果不佳的患者。(2)通過基因擴增和測序發(fā)現(xiàn)本地區(qū)菌株的mec基因主要是A型,菌株的同源性與已報道的菌株同源性在97%以上,同源性比較高,未出現(xiàn)較大的變異株。(3)運用多重PCR技術對51株MRSA進行SCCmec分型,發(fā)現(xiàn)了Ⅱ型新的亞型。探明了本地區(qū)MRSA的SCCmec型別或者亞型種類,闡明了本地區(qū)MRSA多重耐藥現(xiàn)狀及流行趨勢,為臨床制定有效的預防策略和治療措施、控制MRSA的漫延以及暴發(fā)流行提供了科學依據(jù),為更加深入了解和研究MRSA多重耐藥特征及其耐藥機制奠定了基礎。(4)毒力基因檢測發(fā)現(xiàn),本地區(qū)MRSA不僅高度耐藥,SCCmec亞型同時耐兩類四種抗菌藥物,同一菌株同時可檢測到兩種毒素基因,表明耐藥程度嚴重,多重耐藥模式復雜。
【關鍵詞】：耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA) 多重耐藥 PCR 葡萄球菌染色體mec盒(SCCmec)分型
【學位授予單位】：青島大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R378.1
【目錄】：

• 摘要2-4
• Abstract4-8
• 引言8-9
• 第1章 耐甲氧西林金黃色葡萄球菌表型分析9-14
• 1.1 實驗對象9
• 1.2 實驗試劑、儀器9
• 1.3 實驗方法9-10
• 1.3.1 金黃色葡萄球菌的鑒定9-10
• 1.3.2 MRSA的篩選與確證10
• 1.3.3 藥敏實驗10
• 1.4 實驗結(jié)果10-12
• 1.4.1 耐藥表型檢測結(jié)果11-12
• 1.4.2 藥敏試驗結(jié)果12
• 1.5 討論12-13
• 1.6 結(jié)論13-14
• 第2章 耐甲氧西林金黃色葡萄球菌基因型分析14-33
• 2.1 實驗試劑、器材14
• 2.2 實驗方法14-20
• 2.2.1 細菌模板DNA的制備15
• 2.2.2 mec基因PCR測定15-16
• 2.2.3 SCCmec多位點PCR測定16-18
• 2.2.4 MRSA毒力基因測定18-19
• 2.2.5 電泳及成像19-20
• 2.2.6 mec基因位點擴增產(chǎn)物序列測定20
• 2.3 結(jié)果20-30
• 2.3.1 mec基因PCR測定結(jié)果20-23
• 2.3.2 mec基因測序結(jié)果23-24
• 2.3.3 mec基因擴增產(chǎn)物與基因庫中已報道序列比對結(jié)果24-26
• 2.3.4 SCCmec分型結(jié)果26-27
• 2.3.5 MRSA毒力基因檢測結(jié)果27-30
• 2.4 討論30-32
• 2.5 結(jié)論32-33
• 結(jié)論33-34
• 參考文獻34-37
• 綜述37-51
• 綜述的參考文獻44-51
• 攻讀學位期間的研究成果51-52
• 致謝52-53

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前7條

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  本文關鍵詞：耐甲氧西林金黃色葡萄球菌表型與基因型分析研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：487162