本文關(guān)鍵詞：耐甲氧西林金黃色葡萄球菌表型與基因型分析研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：通過分析臨床分離的耐甲氧西林金黃色葡萄球菌菌株(methicillin-resistant staphylococcus aureus, MRSA)對多種抗菌藥物的耐藥性及耐藥特點(diǎn),從表型和基因型兩個層面來分析研究MRSA的多重耐藥機(jī)制,尋找藥物作用的新靶點(diǎn),為臨床合理有效使用抗菌藥物,治療MRSA感染以及預(yù)防耐藥菌株的不斷擴(kuò)大提供一定的幫助。 方法：(1)本實(shí)驗(yàn)收集了山西醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院檢驗(yàn)科、山西醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院檢驗(yàn)科和山西省人民醫(yī)院檢驗(yàn)科從2012年1月到12月分離的金黃色葡萄球菌152株。采用法國梅里埃VITEK-Ⅱ細(xì)菌鑒定系統(tǒng)對收集菌株進(jìn)行了確證試驗(yàn),152株均為金黃色葡萄球菌。依據(jù)美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化研究所(NCLSI)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程,采用K-B (Kirby-Bauer)瓊脂擴(kuò)散法和法國梅里埃VITEK-Ⅱ藥敏分析系統(tǒng)對收集菌株進(jìn)行了耐藥表型確證和藥物敏感試驗(yàn),其中51株為MRSA,并對51株MRSA進(jìn)行了p-內(nèi)酰胺酶檢測和耐藥特點(diǎn)分析。(2)用E-test卡測定了實(shí)驗(yàn)菌株對萬古霉素的敏感性,即實(shí)驗(yàn)菌株對萬古霉素的最低抑菌濃度(MIC)。(3)提取51株MRSA菌株DNA,采用特異性引物序列聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)擴(kuò)增法進(jìn)行mecA, mecI、 mecRl基因檢測。(4)挑選4株具有代表性和特殊性的菌株,對其DNA擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測序。(5)運(yùn)用多重PCR擴(kuò)增法對其進(jìn)行了MRSA的耐藥性基因島(SCCmec)分型。(6)同時運(yùn)用多重PCR擴(kuò)增法進(jìn)行MRSA毒力基因方面的研究。 結(jié)果：(1)MRSA對β-內(nèi)酰胺類藥物高度耐藥,耐藥率達(dá)100%,環(huán)丙沙星、左氧氟沙星、克林霉素、紅霉素、四環(huán)素、替考拉寧、復(fù)方磺胺甲惡唑、磷霉素、利奈唑胺、利福平和萬古霉素的耐藥率分別為88.2%、86.3%、86.3%、84.3%、82.4%、0%、15.7%、29.4%、0%、39.2%、0%。(2)未發(fā)現(xiàn)耐萬古霉素的菌株。(3)實(shí)驗(yàn)菌株mecA、 mecI、mecRl基因檢出率全部為100%。(4)基因測序表明本地MRSA菌株與基因庫中已報(bào)道的菌株同源性在97%以上。(5)實(shí)驗(yàn)菌株SCCmec分型發(fā)現(xiàn)多為Ⅱ型和Ⅲ型,另有29株可能為Ⅱ型新的亞型。(6)毒力基因檢測顯示femA基因檢出率為100%,腸毒素基因see攜帶率為76.5%,sed攜帶率為47.1%,sec攜帶率為5.9%；表皮剝落素基因etb攜帶率為49.0%；中毒性休克綜合癥毒素基因tst攜帶率為5.9%；有43.1%(22/51)株菌株同時帶有兩種腸毒素基因,有39.2%(20/51)株菌株同時帶有兩種毒素基因,有5.9%(3/51)株菌株同時帶有三種毒素基因。 結(jié)論：(1)收集的金黃色葡萄球菌中,β-內(nèi)酰胺類藥物耐藥率高達(dá)100%,MRSA對萬古霉素、替考拉寧、利奈唑胺敏感,對其他抗菌藥物均呈多重耐藥,耐藥趨勢嚴(yán)峻,需要對目前藥效的抗生素規(guī)范管理以延緩其耐藥進(jìn)程。加強(qiáng)對萬古霉素、替考拉寧、利奈唑胺等常用藥物最小抑菌濃度(MIC)的監(jiān)測和臨床報(bào)告,關(guān)注萬古霉素對MRSA治療效果不佳的患者。(2)通過基因擴(kuò)增和測序發(fā)現(xiàn)本地區(qū)菌株的mec基因主要是A型,菌株的同源性與已報(bào)道的菌株同源性在97%以上,同源性比較高,未出現(xiàn)較大的變異株。(3)運(yùn)用多重PCR技術(shù)對51株MRSA進(jìn)行SCCmec分型,發(fā)現(xiàn)了Ⅱ型新的亞型。探明了本地區(qū)MRSA的SCCmec型別或者亞型種類,闡明了本地區(qū)MRSA多重耐藥現(xiàn)狀及流行趨勢,為臨床制定有效的預(yù)防策略和治療措施、控制MRSA的漫延以及暴發(fā)流行提供了科學(xué)依據(jù),為更加深入了解和研究MRSA多重耐藥特征及其耐藥機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。(4)毒力基因檢測發(fā)現(xiàn),本地區(qū)MRSA不僅高度耐藥,SCCmec亞型同時耐兩類四種抗菌藥物,同一菌株同時可檢測到兩種毒素基因,表明耐藥程度嚴(yán)重,多重耐藥模式復(fù)雜。
【關(guān)鍵詞】：耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA) 多重耐藥 PCR 葡萄球菌染色體mec盒(SCCmec)分型
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R378.1
【目錄】：

• 摘要2-4
• Abstract4-8
• 引言8-9
• 第1章 耐甲氧西林金黃色葡萄球菌表型分析9-14
• 1.1 實(shí)驗(yàn)對象9
• 1.2 實(shí)驗(yàn)試劑、儀器9
• 1.3 實(shí)驗(yàn)方法9-10
• 1.3.1 金黃色葡萄球菌的鑒定9-10
• 1.3.2 MRSA的篩選與確證10
• 1.3.3 藥敏實(shí)驗(yàn)10
• 1.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果10-12
• 1.4.1 耐藥表型檢測結(jié)果11-12
• 1.4.2 藥敏試驗(yàn)結(jié)果12
• 1.5 討論12-13
• 1.6 結(jié)論13-14
• 第2章 耐甲氧西林金黃色葡萄球菌基因型分析14-33
• 2.1 實(shí)驗(yàn)試劑、器材14
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法14-20
• 2.2.1 細(xì)菌模板DNA的制備15
• 2.2.2 mec基因PCR測定15-16
• 2.2.3 SCCmec多位點(diǎn)PCR測定16-18
• 2.2.4 MRSA毒力基因測定18-19
• 2.2.5 電泳及成像19-20
• 2.2.6 mec基因位點(diǎn)擴(kuò)增產(chǎn)物序列測定20
• 2.3 結(jié)果20-30
• 2.3.1 mec基因PCR測定結(jié)果20-23
• 2.3.2 mec基因測序結(jié)果23-24
• 2.3.3 mec基因擴(kuò)增產(chǎn)物與基因庫中已報(bào)道序列比對結(jié)果24-26
• 2.3.4 SCCmec分型結(jié)果26-27
• 2.3.5 MRSA毒力基因檢測結(jié)果27-30
• 2.4 討論30-32
• 2.5 結(jié)論32-33
• 結(jié)論33-34
• 參考文獻(xiàn)34-37
• 綜述37-51
• 綜述的參考文獻(xiàn)44-51
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果51-52
• 致謝52-53

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 戈梅,陳代杰;細(xì)菌耐藥性機(jī)制的研究與新藥開發(fā)Ⅰ 細(xì)菌產(chǎn)生鈍化酶的耐藥機(jī)制與新藥研究[J];國外醫(yī)藥(合成藥 生化藥 制劑分冊);2001年02期

2 陳穎;周建黨;郭建軍;許薇;;頭孢西丁擴(kuò)散法檢測耐甲氧西林葡萄球菌異質(zhì)性耐藥菌株的評價[J];中南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2007年01期

3 朱德妹;胡付品;汪復(fù);蔣曉飛;俞云松;楊青;孫自鏞;簡翠;王傳清;王愛敏;張泓;李萬華;徐英春;孫宏莉;倪語星;孫景勇;徐元宏;沈繼錄;胡云建;艾效曼;單斌;杜艷;魏蓮花;吳玲;蘇丹虹;卓超;賈蓓;黃文祥;張朝霞;季萍;;2009年中國CHINET葡萄球菌屬細(xì)菌耐藥性監(jiān)測[J];中國感染與化療雜志;2010年06期

4 歐陽范獻(xiàn),陳允鳳,卜平鳳,黃瑾,鮑時翔;�？诘貐^(qū)耐藥金黃色葡萄球菌檢測及其流行病學(xué)分析[J];中華流行病學(xué)雜志;2005年10期

5 曹鴻霞;熊自忠;王中新;徐元宏;李旭;;耐甲氧西林金黃色葡萄球菌HVR基因分型[J];中華醫(yī)院感染學(xué)雜志;2008年01期

6 黃輝;安如俊;周建黨;周秀萍;;移植患者呼吸道金黃色葡萄球菌感染的分子流行病學(xué)[J];中華醫(yī)院感染學(xué)雜志;2008年02期

7 朱健銘;吳康樂;姜如金;;221株耐甲氧西林金黃色葡萄球菌qacA/qacB基因檢測及臨床意義[J];中華醫(yī)院感染學(xué)雜志;2008年11期

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本文編號：487162