本文關(guān)鍵詞：過(guò)表達(dá)VCAM-1對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞免疫特性的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：摘要目的：克隆小鼠血管細(xì)胞粘附分子1(vascular cell adhesion molecule-1, VCAM-1)cDNA全長(zhǎng),構(gòu)建綠色熒光蛋白標(biāo)記的VCAM-1基因逆轉(zhuǎn)錄病毒載體。探討VCAM-1基因在間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells, MSC)中過(guò)表達(dá)對(duì)細(xì)胞免疫學(xué)特性的影響,為優(yōu)化MSC的臨床應(yīng)用提供依據(jù)。 方法：采用DNA重組技術(shù),將目的基因VCAM-1克隆至含有報(bào)告基因EGFP的逆轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)載體MIGR1中；在脂質(zhì)體介導(dǎo)下,將重組的逆轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,收獲攜帶VCAM-1基因的重組逆轉(zhuǎn)錄病毒的上清,并感染MSC細(xì)胞系C3H10T1/2,熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)和感染效率；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)MSC膜表面的VCAM-1表達(dá)情況；3H-TdR摻入法測(cè)定過(guò)表達(dá)VCAM-1的MSC對(duì)其免疫學(xué)特性的影響。 結(jié)果：成功構(gòu)建過(guò)表達(dá)VCAM-1基因的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果表明VCAM-1在MSC細(xì)胞系C3H10T1/2中穩(wěn)定高表達(dá)。 進(jìn)一步,過(guò)表達(dá)VCAM-1基因的MSC細(xì)胞系C3H10T1/2形態(tài)無(wú)改變。與轉(zhuǎn)染空載體的C3H10T1/2相比,過(guò)表達(dá)VCAM-1的C3H10T1/2對(duì)于有絲分裂原誘導(dǎo)的T淋巴細(xì)胞增殖抑制作用顯著增強(qiáng),且這種抑制效應(yīng)呈劑量依賴(lài)性,隨著C3H10T1/2細(xì)胞數(shù)量的逐漸增加,其抑制效應(yīng)逐漸增強(qiáng)。當(dāng)C3H10T1/2與效應(yīng)細(xì)胞比例為1：10時(shí),轉(zhuǎn)染了空載體的C3H10T1/2組淋巴細(xì)胞增殖活性(cpm值)降低了29.8%,而過(guò)表達(dá)VCAM-1的C3H10T1/2組則降低了65.3%,,抑制率是空載體C3H10T1/2組的2.16倍。 結(jié)論：過(guò)表達(dá)VCAM-1可顯著增強(qiáng)間充質(zhì)干細(xì)胞系C3H10T1/2抑制T細(xì)胞活化的能力,為下一步利用過(guò)表達(dá)VCAM-1的MSCs治療相關(guān)免疫疾病奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和理論依據(jù)。圖9幅,表13個(gè),參考文獻(xiàn)53篇。
【關(guān)鍵詞】：血管細(xì)胞粘附分子1 間充質(zhì)干細(xì)胞 免疫抑制
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R392
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-8
• 目錄8-9
• 英文~.略詞表9-11
• 前言11-14
• 1 VCAM-1逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的構(gòu)建與鑒定14-30
• 1.1 對(duì)象與方法15-25
• 1.1.1 對(duì)象15-17
• 1.1.2 方法17-25
• 1.2 結(jié)果25-27
• 1.2.1 小鼠VCAM-1基因的RT-PCR擴(kuò)增25
• 1.2.2 重組逆轉(zhuǎn)錄病毒質(zhì)粒MIGR1-VCAM-1的構(gòu)建及鑒定25-27
• 1.3 討論27-29
• 1.4 小結(jié)29-30
• 2 過(guò)表達(dá)VCAM-1的間充質(zhì)干細(xì)胞及其免疫特性研究30-44
• 2.1 對(duì)象與方法31-36
• 2.1.1 對(duì)象31-33
• 2.1.2 方法33-36
• 2.2 結(jié)果36-39
• 2.2.1 逆轉(zhuǎn)錄病毒質(zhì)粒及重組逆轉(zhuǎn)錄病毒質(zhì)粒在包裝細(xì)胞T293中的轉(zhuǎn)染率分析36
• 2.2.2 VCAM-1在間充質(zhì)干細(xì)胞系C3H10T 1/2中穩(wěn)定過(guò)表達(dá)36-37
• 2.2.3 過(guò)表達(dá)VCAM-1的間充質(zhì)干細(xì)胞系C3H10T 1/2抑制T細(xì)胞增殖37-39
• 2.3 討論39-43
• 2.4 小結(jié)43-44
• 3 結(jié)論44-45
• 參考文獻(xiàn)45-50
• 攻讀學(xué)位期間主要的研究成果目錄50-51
• 綜述51-62
• 綜述參考文獻(xiàn)55-62
• 致謝62-63
• 附件63

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 司英健;張曦;陳幸華;劉耀;高蕾;高力;張誠(chéng);彭賢貴;王慶余;;VCAM-1和EGFP雙基因共表達(dá)重組腺病毒的構(gòu)建[J];重慶醫(yī)學(xué);2007年17期

2 林傳明;顧健;;間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)系統(tǒng)性紅斑狼瘡血栓易發(fā)狀態(tài)的免疫調(diào)節(jié)和修復(fù)機(jī)制研究新進(jìn)展[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志;2011年04期

  本文關(guān)鍵詞：過(guò)表達(dá)VCAM-1對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞免疫特性的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：482832