本文關(guān)鍵詞：wnt3a,wnt3誘導(dǎo)小鼠肝前體細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化及遷移的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的 利用重組腺病毒Ad-GFP-wnt3a和Ad-GFP-wnt3，分別轉(zhuǎn)染小鼠肝前體細(xì)胞，使其獲得高表達(dá)。通過(guò)觀察比較高表達(dá)wnt基因的小鼠肝前體細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化及遷移能力的變化，探討wnt信號(hào)通路，在小鼠肝前體細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化中發(fā)生的作用。 方法 將表達(dá)wnt的腺病毒Ad-GFP-wnt3a,Ad-GFP-wnt3分別轉(zhuǎn)入小鼠肝前體細(xì)胞中，，與空白對(duì)照組相比，觀察其形態(tài)變化。細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)觀察其對(duì)小鼠肝前體細(xì)胞遷移能力的影響。實(shí)時(shí)熒光定量Realtime-PCR和western-blot分別檢測(cè)小鼠肝前體細(xì)胞中上皮標(biāo)志物和間質(zhì)標(biāo)志物的表達(dá)改變。 結(jié)果 wnt3a誘導(dǎo)小鼠肝前體細(xì)胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化，提高其遷移能力 1.鏡下觀察，高表達(dá)wnt3a的小鼠肝前體細(xì)胞由不規(guī)則多邊形變?yōu)殚L(zhǎng)梭形。細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，Ad-wnt3a組細(xì)胞48h遷移距離為（0.53±0.05）mm，Ad-GFP組細(xì)胞48h遷移距離為（0.33±0.02）mm，與空白對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞遷移距離增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，Ad-GFP組24h穿過(guò)小孔的細(xì)胞為（10.33±2.08）個(gè)，而Ad-wnt3a組穿過(guò)的細(xì)胞為（62.00±3.60）個(gè)，相對(duì)空白對(duì)照組，其穿過(guò)小孔的細(xì)胞數(shù)量增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。 2.Realtime-PCR和Western-blot結(jié)果顯示，Ad-wnt3a組細(xì)胞間質(zhì)標(biāo)志物N-cadherin、vimentin和snail的mRNA和蛋白水平表達(dá)均上調(diào)，而上皮標(biāo)志物E-cadherin和CK18的mRNA水平和蛋白水平表達(dá)均下調(diào),差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。 腺病毒W(wǎng)nt3促進(jìn)小鼠肝前體細(xì)胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化 1.顯微鏡下可見(jiàn)，14-19細(xì)胞為不規(guī)則多邊形，而高表達(dá)wn3的14-19細(xì)胞的形狀為長(zhǎng)梭形。細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果均顯示，高表達(dá)wnt3的14-19細(xì)胞遷移能力明顯提高，與空載體轉(zhuǎn)染細(xì)胞相比，差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）。 2.實(shí)時(shí)熒光定量PCR和蛋白質(zhì)印跡結(jié)果顯示，間質(zhì)標(biāo)記物N-cadherin、vimentin和twist1在mRNA和蛋白水平表達(dá)上調(diào)，相反上皮標(biāo)記物E-cadherin在mRNA水平和蛋白水平表達(dá)下調(diào)，與空載體轉(zhuǎn)染細(xì)胞相比，差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。 結(jié)論 1.成功構(gòu)建高表達(dá)wnt基因的小鼠肝前體細(xì)胞株。 2.wnt3a能誘導(dǎo)小鼠肝前體細(xì)胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化，并增強(qiáng)其遷移能力。 3.wnt3能促進(jìn)小鼠肝前體細(xì)胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化，并提高其遷移能力。 4.wnt信號(hào)調(diào)控小鼠肝前體細(xì)胞的EMT轉(zhuǎn)化過(guò)程，提示其可能參與肝纖維化的過(guò)程。
【關(guān)鍵詞】：wnt3a wnt3 肝前體細(xì)胞 上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R329
【目錄】：

• 英漢縮略語(yǔ)名詞對(duì)照5-7
• 摘要7-10
• ABSTRACT10-13
• 前言13-17
• 參考文獻(xiàn)15-17
• 1 實(shí)驗(yàn)材料17-19
• 2 實(shí)驗(yàn)方法19-23
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與結(jié)論23-30
• 4 討論30-33
• 參考文獻(xiàn)33-35
• 全文總結(jié)35-36
• 文獻(xiàn)綜述36-42
• 參考文獻(xiàn)40-42
• 致謝42-43
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文43-44

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 胡代曦;張錫峰;蘆永良;馮濤;黃佳yN;;Wnt3a誘導(dǎo)小鼠肝前體細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2013年20期

2 李旭;齊明華;;肝內(nèi)細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化: 肝纖維化發(fā)生的新機(jī)制[J];世界華人消化雜志;2012年10期

3 李富貴;嚴(yán)律南;;肝干細(xì)胞的研究進(jìn)展及應(yīng)用前景[J];中國(guó)修復(fù)重建外科雜志;2007年02期

4 滕光菊,白雪帆,徐哲,黃長(zhǎng)形,聶青和;大鼠原代培養(yǎng)肝細(xì)胞的生物學(xué)特性研究[J];中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2003年08期

  本文關(guān)鍵詞：wnt3a,wnt3誘導(dǎo)小鼠肝前體細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化及遷移的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：477463