本文關鍵詞：wnt3a,wnt3誘導小鼠肝前體細胞上皮間質轉化及遷移的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的 利用重組腺病毒Ad-GFP-wnt3a和Ad-GFP-wnt3，分別轉染小鼠肝前體細胞，使其獲得高表達。通過觀察比較高表達wnt基因的小鼠肝前體細胞上皮間質轉化及遷移能力的變化，探討wnt信號通路，在小鼠肝前體細胞上皮-間質轉化中發(fā)生的作用。 方法 將表達wnt的腺病毒Ad-GFP-wnt3a,Ad-GFP-wnt3分別轉入小鼠肝前體細胞中，，與空白對照組相比，觀察其形態(tài)變化。細胞劃痕實驗和細胞遷移實驗觀察其對小鼠肝前體細胞遷移能力的影響。實時熒光定量Realtime-PCR和western-blot分別檢測小鼠肝前體細胞中上皮標志物和間質標志物的表達改變。 結果 wnt3a誘導小鼠肝前體細胞發(fā)生上皮間質轉化，提高其遷移能力 1.鏡下觀察，高表達wnt3a的小鼠肝前體細胞由不規(guī)則多邊形變?yōu)殚L梭形。細胞劃痕實驗結果顯示，Ad-wnt3a組細胞48h遷移距離為（0.53±0.05）mm，Ad-GFP組細胞48h遷移距離為（0.33±0.02）mm，與空白對照組比較，實驗組細胞遷移距離增加，差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。細胞遷移實驗結果顯示，Ad-GFP組24h穿過小孔的細胞為（10.33±2.08）個，而Ad-wnt3a組穿過的細胞為（62.00±3.60）個，相對空白對照組，其穿過小孔的細胞數(shù)量增加，差異具有統(tǒng)計學意義(P0.01)。 2.Realtime-PCR和Western-blot結果顯示，Ad-wnt3a組細胞間質標志物N-cadherin、vimentin和snail的mRNA和蛋白水平表達均上調，而上皮標志物E-cadherin和CK18的mRNA水平和蛋白水平表達均下調,差異具統(tǒng)計學意義（P0.05）。 腺病毒W(wǎng)nt3促進小鼠肝前體細胞發(fā)生上皮間質轉化 1.顯微鏡下可見，14-19細胞為不規(guī)則多邊形，而高表達wn3的14-19細胞的形狀為長梭形。細胞劃痕實驗和細胞遷移實驗結果均顯示，高表達wnt3的14-19細胞遷移能力明顯提高，與空載體轉染細胞相比，差異具統(tǒng)計學意義（P＜0.001）。 2.實時熒光定量PCR和蛋白質印跡結果顯示，間質標記物N-cadherin、vimentin和twist1在mRNA和蛋白水平表達上調，相反上皮標記物E-cadherin在mRNA水平和蛋白水平表達下調，與空載體轉染細胞相比，差異具統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。 結論 1.成功構建高表達wnt基因的小鼠肝前體細胞株。 2.wnt3a能誘導小鼠肝前體細胞發(fā)生上皮間質轉化，并增強其遷移能力。 3.wnt3能促進小鼠肝前體細胞發(fā)生上皮間質轉化，并提高其遷移能力。 4.wnt信號調控小鼠肝前體細胞的EMT轉化過程，提示其可能參與肝纖維化的過程。
【關鍵詞】：wnt3a wnt3 肝前體細胞 上皮間質轉化
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R329
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照5-7
• 摘要7-10
• ABSTRACT10-13
• 前言13-17
• 參考文獻15-17
• 1 實驗材料17-19
• 2 實驗方法19-23
• 3 實驗結果與結論23-30
• 4 討論30-33
• 參考文獻33-35
• 全文總結35-36
• 文獻綜述36-42
• 參考文獻40-42
• 致謝42-43
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表的論文43-44

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 胡代曦;張錫峰;蘆永良;馮濤;黃佳yN;;Wnt3a誘導小鼠肝前體細胞上皮-間質轉化[J];第三軍醫(yī)大學學報;2013年20期

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  本文關鍵詞：wnt3a,wnt3誘導小鼠肝前體細胞上皮間質轉化及遷移的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：477463