本文關(guān)鍵詞：重組幽門螺桿菌多表位疫苗工程菌株的構(gòu)建及其微生物學(xué)特性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的構(gòu)建含有幽門螺桿菌尿素酶(ureI、ureB)及霍亂毒素B亞單位(ctB)融合片段的多表位疫苗工程菌,并研究其微生物學(xué)特性。方法通過生物信息學(xué)方法從ureI和ureB基因中篩選出T細(xì)胞和B細(xì)胞優(yōu)勢(shì)表位,通過柔性Linker相連,并在其N端加入分子內(nèi)佐劑序列ctB,按照大腸桿菌BL21(DE3)的密碼子偏好性進(jìn)行密碼子優(yōu)化,即為BIB序列。人工合成之后,插入原核表達(dá)質(zhì)粒pET28a(+)中,構(gòu)建pET28a(+)/ctB-ureI-ureB〔pET28a(+)/BIB〕重組質(zhì)粒。經(jīng)限制性內(nèi)切酶酶切鑒定及DNA測(cè)序鑒定正確后,將質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入大腸桿菌BL21(DE3)中。BIB工程菌經(jīng)乳糖誘導(dǎo)表達(dá)后,SDS-PAGE檢測(cè)重組蛋白BIB的表達(dá)情況,并對(duì)其N端氨基酸序列和相對(duì)分子質(zhì)量進(jìn)行測(cè)定,Western blot對(duì)其進(jìn)行抗原性鑒定。結(jié)果原核表達(dá)質(zhì)粒pET28a(+)/BIB經(jīng)雙酶切和測(cè)序鑒定構(gòu)建正確,SDS-PAGE電泳顯示在相對(duì)分子質(zhì)量33×103處有一條明顯條帶,其N端氨基酸序列和相對(duì)分子質(zhì)量與設(shè)計(jì)序列100%一致,Western blot結(jié)果顯示BIB可以與抗幽門螺桿菌悉尼株(SS1株)小鼠血清及鼠抗CTB單抗產(chǎn)生特異性反應(yīng)。結(jié)論成功構(gòu)建了幽門螺桿菌多表位重組原核表達(dá)工程菌,該工程菌表達(dá)的BIB蛋白抗原性良好。
【作者單位】： 四川大學(xué)華西基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與法醫(yī)學(xué)院微生物學(xué)教研室;四川萬可泰生物技術(shù)有限責(zé)任公司;
【關(guān)鍵詞】： 幽門螺桿菌 多表位疫苗 尿素酶B亞單位 尿素酶I亞單位 霍亂毒素B亞單位
【基金】：四川省科技廳科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(No.2014SZ0036)資助
【分類號(hào)】：R392
【正文快照】： 隨著對(duì)抗原表位認(rèn)識(shí)的深入,表位疫苗已成為新型疫苗研究的熱點(diǎn),被認(rèn)為是繼滅活疫苗、亞單位疫苗、活載體疫苗之后的第四代疫苗,其具有免疫反應(yīng)特異、副作用小和針對(duì)性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)[1,2]。幽門螺桿菌(Helicobacter pylori,H.pylori)感染導(dǎo)致機(jī)體對(duì)H.pylori自身天然抗原產(chǎn)生免疫耐受

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：477261