本文關(guān)鍵詞：TALE-TFs構(gòu)建方法的建立及優(yōu)化，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的在傳統(tǒng)方案的基礎(chǔ)上建立一種經(jīng)濟(jì)有效且易于操作的類(lèi)轉(zhuǎn)錄激活效應(yīng)子轉(zhuǎn)錄因子(TALE-TFs)的構(gòu)建和功能檢測(cè)方案。方法采用基于PCR的Golden gate克隆法分別嘗試構(gòu)建類(lèi)轉(zhuǎn)錄激活效應(yīng)物(TALEs)的六聚體、五聚體、四聚體和三聚體,比較構(gòu)建結(jié)果,選擇最優(yōu)效果方案進(jìn)行TALE-TFs的構(gòu)建。采用片段置換反應(yīng)(FSR)構(gòu)建了含有TALE-TFs結(jié)合片段的RFP質(zhì)粒pminCMV,并與TALE-TFs進(jìn)行共轉(zhuǎn)染,觀(guān)察紅色熒光驗(yàn)證TALE-TFs的轉(zhuǎn)錄活性。結(jié)果 TALEs中所含的串聯(lián)重復(fù)模塊越少,獲得的構(gòu)建產(chǎn)物越多。共轉(zhuǎn)染時(shí),TALE-TFs使得pminCMV成功啟動(dòng)表達(dá)。結(jié)論該研究為不同條件下實(shí)驗(yàn)方案的選擇提供了依據(jù),并利用含有TALE-TF結(jié)合片段和紅色熒光的質(zhì)粒建立了快捷直觀(guān)的轉(zhuǎn)錄活性驗(yàn)證方法。
【作者單位】： 河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科;重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院教育部感染性疾病分子生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 類(lèi)轉(zhuǎn)錄激活效應(yīng)物 質(zhì)粒構(gòu)建 轉(zhuǎn)錄 轉(zhuǎn)染
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81000732)
【分類(lèi)號(hào)】：R3416
【正文快照】： 類(lèi)轉(zhuǎn)錄激活效應(yīng)物(TALEs)蛋白家族是來(lái)自于植物病原體-黃單胞桿菌的天然細(xì)菌效應(yīng)蛋白。它類(lèi)似于真核生物的轉(zhuǎn)錄因子,通過(guò)識(shí)別特異DNA序列來(lái)調(diào)節(jié)宿主基因的轉(zhuǎn)錄,促進(jìn)細(xì)菌定植。TALEs蛋白中部包含一段由串聯(lián)重復(fù)單體構(gòu)成的DNA特異識(shí)別和結(jié)合區(qū)域,其中每個(gè)單體含有大約34個(gè)氨基酸

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 趙美威;段承俐;劉江;;基于類(lèi)轉(zhuǎn)錄激活因子效應(yīng)物(TALEs)的基因組定點(diǎn)操控技術(shù)[J];動(dòng)物學(xué)研究;2013年05期

2 劉暢;馮沖;宋志強(qiáng);李西睿;王寧;儲(chǔ)明星;潘登科;;利用TALENs技術(shù)建立基因定點(diǎn)修飾的豬Oct-4-EGFP細(xì)胞系[J];中國(guó)畜牧獸醫(yī);2013年11期

3 陶果;信吉閣;肖晶;劉海京;成文敏;查星琴;曾養(yǎng)志;;基因敲除技術(shù)最新研究進(jìn)展及其應(yīng)用[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2013年29期

4 何華蘭;;TAL效應(yīng)蛋白研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技;2014年05期

5 蔣蓉;黃萍;劉國(guó)芳;玉延華;姜偉;何勇強(qiáng);黃勝;;利用酵母雙雜法鑒定水稻白葉枯病菌Ⅲ型效應(yīng)物寄主靶標(biāo)初探[J];基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué);2014年03期

6 蔣國(guó)鳳;;基于TALE的生物工程技術(shù)在植物抗病性上的應(yīng)用[J];基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué);2015年05期

7 蔡哲彥;萬(wàn)永奇;唐e，

本文編號(hào)：471989