本文關(guān)鍵詞：人組織相容性Ⅰ類相關(guān)鏈A位點抗原性在移植免疫中的基礎(chǔ)與臨床研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：利用桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)對MICA*008胞外區(qū)序列進(jìn)行重組蛋白的表達(dá)，為研究抗MICA抗體介導(dǎo)體液免疫奠定物質(zhì)基礎(chǔ)。通過對腎移植受者移植前后抗MICA抗體的隨訪檢測，結(jié)合MICA基因分型分析腎移植術(shù)前和術(shù)后新生抗MICA特異性抗體在移植腎功能減退中的意義。通過對國際協(xié)作組抗MICA抗體結(jié)果進(jìn)行整體匯總和對比分析，對在臨床推廣應(yīng)用的MICA特異性抗體檢測起一定的指導(dǎo)作用。 方法： 第一部分：選取人群中最常見的MICA*008等位基因，利用桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)進(jìn)行MICA*008胞外區(qū)序列的重組蛋白的表達(dá)，首先將轉(zhuǎn)移載體pFastBac-MICA*008轉(zhuǎn)化到E.coil DH10Bac中進(jìn)行轉(zhuǎn)座，通過藍(lán)白斑篩選和測序鑒定，獲得Bacmid-MICA*008，用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染昆蟲細(xì)胞SF9，收獲培養(yǎng)上清，鎳柱純化上清中的表達(dá)產(chǎn)物，經(jīng)Western blot和考馬斯亮藍(lán)染色鑒定重組蛋白。 第二部分：采用免疫磁珠流式細(xì)胞儀液相芯片技術(shù)（Luminex技術(shù)），對82例腎移植受者進(jìn)行移植前抗MICA抗體檢測和移植后四年的動態(tài)隨訪，結(jié)合供受者M(jìn)ICA基因分型分析移植后新生抗MICA特異性抗體類型，分析其與移植腎功能的相關(guān)性。在移植后1個月，3個月，6個月，，12個月，24個月，36個月，48個月等動態(tài)隨訪點比較抗體陰性組和抗MICA抗體陽性組血清肌酐平均值的差異，并分析統(tǒng)計學(xué)差異。 第三部分：對16屆國際組織相容性和遺傳免疫協(xié)作組發(fā)放的16份血清樣本采用Luminex技術(shù)檢測抗MICA抗體的特異性。將此次協(xié)作組結(jié)果匯總，按各實驗室使用的三種抗MICA抗體試劑類型將結(jié)果分類分析，三種試劑分別標(biāo)記為Kit-A，B，C。結(jié)合本實驗室及協(xié)作組結(jié)果，分析三種檢測試劑檢測抗MICA特異性抗體結(jié)果的異同。 結(jié)果： 第一部分：轉(zhuǎn)座后的Bacmid-MICA*008經(jīng)測序鑒定和Blast比對，插入序列與MICA*008序列一致。收集轉(zhuǎn)染后P3代的病毒上清液，經(jīng)鎳柱純化最終獲得重組MICA08蛋白約1.5mg/L左右，經(jīng)Western blot和考馬斯亮藍(lán)染色鑒定，重組蛋白片段大小約37kDa，與目的蛋白大小相符。 第二部分：研究表明抗MICA抗體存在于12.2%（10/82）的腎移植前患者中。10例移植前抗MICA抗體陽性受者中有3例移植后新生抗MICA抗體，另外7例隨訪期間抗MICA抗體的特異性類型均無改變。1例移植術(shù)前抗體陰性移植后3個月新生抗MICA抗體。結(jié)合供受者M(jìn)ICA基因分型判斷有2例受者新生的抗體為抗供者特異性抗體且出現(xiàn)相關(guān)的臨床排斥反應(yīng)，2例受者新生的為非供者特異性抗體�？筂ICA抗體陽性組平均血清肌酐水平均高于抗體陰性組，在隨訪至36~48個月后具有統(tǒng)計學(xué)意義。 第三部分：在16份血清標(biāo)本中S04為陰性，15份標(biāo)本結(jié)果陽性，其中S10標(biāo)本各實驗室均上報為陽性。依據(jù)MICA抗原公共表位分G1組(MICA-01，02，07，12，17，18）和G2(MICA-04，06，08/27，09，19)組，5例標(biāo)本用Kit-A和B均能判別MICA-G1組特異性抗體，Kit-C存在MICA08/27，MICA19的假陽性結(jié)果。5例標(biāo)本用Kit-A和B均能判別MICA-G2組特異性抗體。其余5例標(biāo)本用Kit-A，B，C均無法判別MICA特異性抗體一致的結(jié)果。從三種試劑均能判別10種MICA特異性抗體結(jié)果分析，MICA08/27（86.67%，13/15）抗體結(jié)果一致性最高，MICA19（40%，6/15）一致性最低。使用Kit-B試劑的實驗室間有13例MICA特異性抗體標(biāo)本結(jié)果符合率大于80%。 結(jié)論：1.應(yīng)用桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)可高效表達(dá)重組MICA08蛋白，而通過鎳柱親和層析純化P3病毒上清液可制備高純度的重組MICA08蛋白。2.應(yīng)用免疫磁珠流式細(xì)胞儀液相芯片技術(shù)可檢測抗MICA特異性抗體，供、受者M(jìn)ICA基因錯配是產(chǎn)生新生抗體的重要原因，預(yù)存和新生抗MICA抗體與移植后腎功能減退密切相關(guān)，而新生的DSA抗MICA抗體是移植排斥反應(yīng)的重要原因。3.三種檢測抗MICA特異性抗體試劑均對檢測結(jié)果的陰性或陽性判斷沒有差異，但對MICA抗體特異性分析存在不一致，有爭議的MICA特異性類型可選擇兩種以上的試劑進(jìn)行對比檢測。
【關(guān)鍵詞】：抗MICA抗體 MICA分子 重組MICA蛋白 腎移植
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R392
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 前言10-16
• 參考文獻(xiàn)13-16
• 第一部分 利用桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞系統(tǒng)表達(dá) MICA08 重組蛋白16-40
• 引言16
• 材料與方法16-30
• 結(jié)果30-35
• 討論35-38
• 參考文獻(xiàn)38-40
• 第二部分 抗 MICA 特異性抗體的檢測及在移植腎功能減退中的價值40-54
• 引言40
• 資料與方法40-46
• 結(jié)果46-50
• 討論50-52
• 參考文獻(xiàn)52-54
• 第三部分 國際協(xié)作組特異性 MICA 抗體的結(jié)果分析及預(yù)示的臨床應(yīng)用價值54-62
• 引言54
• 資料與方法54-55
• 結(jié)果55-58
• 討論58-60
• 參考文獻(xiàn)60-62
• 全文總結(jié)62-63
• 綜述63-72
• 參考文獻(xiàn)69-72
• 公開發(fā)表的論文72-73
• 致謝73-74

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：465457