本文關(guān)鍵詞：密度梯度離心法同時分離新生大鼠原代心肌細(xì)胞與成纖維細(xì)胞，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：本文旨在探討一種改良的同時分離新生大鼠原代心肌細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的方法,以建立良好的原代心肌細(xì)胞及成纖維細(xì)胞研究模型。無菌狀態(tài)下取Wistar乳鼠(出生不超過2天)心室,用II型膠原酶消化,控制消化時間及次數(shù)、攪拌速度、離心次數(shù)和速度等,結(jié)合Percoll密度梯度離心法分離心肌細(xì)胞及成纖維細(xì)胞,進(jìn)行體外培養(yǎng),觀察細(xì)胞形態(tài),繼而用0.2%臺盼藍(lán)染色檢測細(xì)胞存活率,免疫熒光染色法檢測心肌肌鈣蛋白I(cardiac troponin I,c Tn I)、波形蛋白(Vimentin)及α平滑肌肌動蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表達(dá),分別用于鑒定心肌細(xì)胞和成纖維細(xì)胞純度。結(jié)果顯示,本方法5次分離的心肌細(xì)胞平均存活率達(dá)92%,純度達(dá)95%以上,細(xì)胞生長狀態(tài)良好,可見貼壁自發(fā)搏動;成纖維細(xì)胞平均存活率達(dá)96%,純度達(dá)94%。本方法能同時獲得新生大鼠原代心肌細(xì)胞和成纖維細(xì)胞,具有很高的產(chǎn)量、存活率及純度,且操作簡便,耗時短,重復(fù)性好,是一種較為理想的原代細(xì)胞分離、培養(yǎng)方法,可滿足各種后續(xù)實(shí)驗(yàn)要求。
【作者單位】： 抗體藥物河南省工程實(shí)驗(yàn)室河南省抗體藥物國際聯(lián)合實(shí)驗(yàn)室河南大學(xué)醫(yī)學(xué)院細(xì)胞與分子免疫重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;鄭州大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 心肌細(xì)胞 成纖維細(xì)胞 原代培養(yǎng) 新生大鼠 Percoll分離
【基金】：supported by the Joint Funds of the National Natural Science Foundation of China and Henan Province,China(No.U1404801)
【分類號】：R329.2
【正文快照】： This work was supported by the Joint Funds of the National Natural Science Foundation of China and Henan Province,China(No.U1404801).心臟是維持人體生命活動正常進(jìn)行的主要器官之一,心血管系統(tǒng)疾病如冠心病、心律失常、心肌缺血-再灌注損傷等是人類健康的嚴(yán)重威脅[

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本文編號：463645