本文關(guān)鍵詞：人β-COP-shRNA慢病毒載體構(gòu)建及干擾效應(yīng)檢測(cè)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的采用常規(guī)轉(zhuǎn)染試劑難以將人β-COP-shRNA轉(zhuǎn)染至THP-1細(xì)胞。構(gòu)建人β-COP特異性的shRNA慢病毒載體,并測(cè)定其對(duì)靶基因β-COP的抑制效應(yīng)。方法設(shè)計(jì)合成針對(duì)人β-COP基因靶點(diǎn)特異的4對(duì)shRNA寡聚單鏈DNA,插入p GMLV-SC1載體中,構(gòu)建慢病毒重組載體。將重組載體和包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染HEK 293T細(xì)胞,包裝產(chǎn)生慢病毒并測(cè)定滴度。用慢病毒感染THP-1細(xì)胞,定量PCR和Western blot檢測(cè)干擾載體對(duì)β-COP基因的干擾效果。結(jié)果測(cè)序證實(shí),β-COP基因的shRNA寡聚核苷酸序列已插入慢病毒載體,轉(zhuǎn)染HEK 293T細(xì)胞,經(jīng)包裝得到4種慢病毒,病毒滴度為1×109TU/m L。定量PCR分析顯示,4種β-COP-shRNA慢病毒感染的THP-1細(xì)胞中β-COP基因mRNA表達(dá)量分別為0.831±0.065、0.675±0.079、0.260±0.050、0.497±0.067,較對(duì)照(1.000±0.000)明顯升高(P0.01);其抑制率分別為16.9%、32.5%、74.0%和50.3%。Western blot結(jié)果表明,4種干擾載體均可抑制β-COP蛋白表達(dá),其中β-COP-shRNA 3的沉默效率為76.4%。結(jié)論成功構(gòu)建了人β-COP-shRNA干擾載體,證實(shí)了干擾載體對(duì)靶基因有較好的沉默效果。
【作者單位】： 廣東醫(yī)學(xué)院生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室;深圳市龍崗區(qū)人民醫(yī)院檢驗(yàn)科;
【關(guān)鍵詞】： 人β-COP shRNA干擾載體 脂質(zhì)代謝
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81170267) 廣東省自然科學(xué)基金(S2011010002984) 東莞市高等院�？蒲袡C(jī)構(gòu)科技計(jì)劃項(xiàng)目(2012108102037)
【分類(lèi)號(hào)】：R373
【正文快照】： 0引言脂質(zhì)代謝紊亂可引起動(dòng)脈粥樣硬化、冠心病、肥胖癥、糖尿病及脂肪肝等多種代謝相關(guān)性疾病,嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康[1]。高密度脂蛋白(high density lipo-protein,HDL)能逆向轉(zhuǎn)運(yùn)膽固醇,改善脂質(zhì)代謝異常[2-3]。研究發(fā)現(xiàn),HDL促進(jìn)脂質(zhì)分泌是受體介導(dǎo)的胞吐過(guò)程[4-5],高密度載脂蛋

【參考文獻(xiàn)】

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1 王強(qiáng);杭濤;徐云;程訓(xùn)民;張啟高;宮劍濱;王t，

本文編號(hào)：463386