發(fā)布時(shí)間：2017-06-19 13:15

  本文關(guān)鍵詞：豬骨髓極小胚胎樣干細(xì)胞的分離、鑒定及生物學(xué)特性探究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的： 建立豬骨髓極小胚胎樣干細(xì)胞(very small embryonic-like stem cells,VSELs)的體外分離與擴(kuò)增方法,探索優(yōu)化分選VSELs的流程,提高分選效率,明確VSELs的生物學(xué)特性,為干細(xì)胞轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)奠定堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。 方法： 分別采用Ficoll淋巴細(xì)胞分離液及紅細(xì)胞裂解液從豬骨髓中分離單個(gè)核細(xì)胞,運(yùn)用相關(guān)特異性熒光標(biāo)記抗體CD45, Lin及CXCR4進(jìn)行標(biāo)記,流式細(xì)胞儀分選豬骨髓VSELs,并比較兩種方法的優(yōu)劣,對(duì)細(xì)胞表型及VSELs獲得量進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。優(yōu)化分選：將紅細(xì)胞裂解液處理獲得的豬骨髓單個(gè)核細(xì)胞用特異性抗體CD45標(biāo)記,再次標(biāo)記磁珠后用免疫磁珠分選器陰選,陰選后的細(xì)胞體外條件培養(yǎng)擴(kuò)增,收集培養(yǎng)擴(kuò)增的細(xì)胞進(jìn)一步標(biāo)記熒光標(biāo)記抗體Lin及CXCR4,進(jìn)入流式分選獲得VSELs,進(jìn)而在條件培養(yǎng)基中擴(kuò)增培養(yǎng),光學(xué)顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)特征并繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線圖,透射電鏡下觀察VSELs的超微結(jié)構(gòu)特征,并采用免疫熒光染色和堿性磷酸酶染色的方法鑒定多潛能干細(xì)胞標(biāo)志的表達(dá)。同時(shí)將豬骨髓單個(gè)核細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)擴(kuò)增,光學(xué)顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)特征并繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線圖。 結(jié)果： 豬骨髓VSELs約占骨髓單個(gè)核細(xì)胞的的0.03%-0.06%,經(jīng)紅細(xì)胞裂解液處理后流式分選獲得VSELs數(shù)量?jī)?yōu)于Ficoll淋巴細(xì)胞分離液處理,采用優(yōu)化分選的方法,可從豬骨髓中分離到更多貼壁生長(zhǎng)的VSELs,與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞相比,這些細(xì)胞體積小、形態(tài)均一,體外不易擴(kuò)增,透射電鏡下觀察可見VSELs細(xì)胞核大,以常染色質(zhì)為主,細(xì)胞質(zhì)少,核質(zhì)比高,細(xì)胞器少,且能夠表達(dá)多潛能抗原標(biāo)志SSEA-1、Oct-4、Nanog和Sox-2,同時(shí)堿性磷酸酶染色陽(yáng)性,豬骨髓單個(gè)核細(xì)胞體外培養(yǎng)擴(kuò)增獲得骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。 結(jié)論： 豬骨髓中存在VSELs,在體外很難擴(kuò)增,可能為豬骨髓MSCs前體細(xì)胞,這種細(xì)胞具有胚胎干細(xì)胞(embryonic-like stem cells, ESCs)的生物學(xué)特性,能夠表達(dá)ESCs特異性抗原標(biāo)志。因此,極小胚胎樣干細(xì)胞有望成為干細(xì)胞研究和再生醫(yī)學(xué)理想的種子細(xì)胞。
【關(guān)鍵詞】：極小胚胎樣干細(xì)胞 骨髓 豬 分離培養(yǎng)
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R329.2
【目錄】：

• 附件3-4
• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 符號(hào)說明9-11
• 前言11-13
• 1. 材料與方法13-20
• 2. 結(jié)果20-22
• 3. 討論22-26
• 4. 結(jié)論26-28
• 附圖表28-37
• 參考文獻(xiàn)37-42
• 綜述42-51
• 參考文獻(xiàn)47-51
• 致謝51-53
• 碩士在讀期間發(fā)表文章53-54

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 耿珊;張琛;劉俊;劉典鋒;周s

本文編號(hào)：462626