本文關(guān)鍵詞：犬賈第鞭毛蟲PDI-4基因的表達(dá)及定位，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的克隆、表達(dá)二硫鍵異構(gòu)酶4基因,并研究其在犬賈第鞭毛蟲滋養(yǎng)體中的定位。方法根據(jù)GenBank登陸的賈第鞭毛蟲二硫鍵異構(gòu)酶4基因(gPDI-4)(登錄號XM_001710176)序列,通過分析序列,設(shè)計合成一對gPDI-4引物。以犬賈第鞭毛蟲滋養(yǎng)體總RNA為模板,采用反轉(zhuǎn)錄PCR的方法擴增PDI-4基因并克隆至pMD-18T載體,構(gòu)建pMD-gPDI-4載體,再把目的基因亞克隆至pET-28a載體,構(gòu)建表達(dá)載體pET-gPDI-4,轉(zhuǎn)化入大腸埃希菌表達(dá)菌DE3中,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后用SDS-PAGE分析表達(dá)情況。同時用組氨酸(His)結(jié)合樹脂柱純化PDI-4蛋白。用純化的PDI-4蛋白免疫小鼠,之后收集血清作為一抗,通過免疫熒光法檢測PDI-4在賈第鞭毛蟲滋養(yǎng)體中的定位。結(jié)果反轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)擴增出大小為1 065bp的PDI-4基因,構(gòu)建的pET-gPDI-4能高效表達(dá)gPDI-4蛋白,SDS-PAGE顯示表達(dá)蛋白分子質(zhì)量為36ku。免疫熒光試驗顯示賈第鞭毛蟲PDI-4蛋白除定位于細(xì)胞表面、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和腹部吸盤外,主要存在于腹部鞭毛。結(jié)論成功克隆、表達(dá)了犬賈第鞭毛蟲PDI-4基因,并確定其主要在腹鞭毛表達(dá)。
【作者單位】： 吉林大學(xué)動物醫(yī)學(xué)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 犬賈第鞭毛蟲 蛋白二硫鍵異構(gòu)酶 滋養(yǎng)體 免疫熒光定位 腹鞭毛
【基金】：國家自然科學(xué)基金項目(No.31101804,30970322)
【分類號】：R383.14
【正文快照】： ***賈第鞭毛蟲是一種原生動物,能感染人類和其他哺乳動物,導(dǎo)致腸道疾病-賈第鞭毛蟲病[1,2]。在一個生命周期中,賈第鞭毛蟲分滋養(yǎng)體和包囊兩種形式存在。滋養(yǎng)體具有復(fù)制和能動性,定殖于宿主的十二指腸,而包囊有一個致密的蜂窩壁,在外界具有較強的抵抗能力,且具有傳染性。目前關(guān)

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