本文關鍵詞：重組結核分枝桿菌ESAT6和CFP10混合抗原及融合抗原診斷結核病的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：結核病是由結核分枝桿菌感染所致的一種慢性傳染病。6kDa早期分泌性抗原靶(ESAT6)和培養(yǎng)濾液蛋白10(CFP10)是結核分枝桿菌表達的特異性蛋白,具有潛在的診斷應用價值。本文利用重組DNA技術表達重組抗原ESAT6和CFP10及其融合抗原CFP10-ESAT6,分析其免疫活性,比較ESAT6和CFP10(?)混合抗原和融合抗原CFP10-ESAT6診斷結核病的能力,為肺結核(Tuberculosis,TB)的診斷提供新的實驗依據。 方法：①采用聚合酶鏈反應自結核分支桿菌標準株基因組DNA中擴增esat6基因,亞克隆至原核表達載體pET-28a(+),構建重組表達質粒pET-28a(+)-esat6,免疫印跡法分析其表達。②分別大量誘導原核表達菌株pET-28a(+)-esat6/BL21、pQE30-cfp10/JM109和pQE30-cfp10-ESAT6/BL21表達重組蛋白ESAT6、CFP10和CFP10-ESAT6融合蛋白,金屬螯合層析予以純化,免疫印跡分析抗原活性；③分別以ESAT6與CFP10的混合抗原和CFP10-ESAT6融合蛋白作為抗原包板,ELISA評價其診斷結核病的能力。 結果：①從結核桿菌基因組DNA擴增esat6基因,經克隆至T-載體后,亞克隆至原核表達載體pET-28a(+),成功構建了重組表達質粒pET-28a(+)-esat6,表達的ESAT6具有良好的反應原性。②重組蛋白ESAT6、CFP10或CFP10-ESAT6融合蛋白獲得大量表達,金屬螯合層析純化獲得了ESAT6、CFP10和CFP10-ESAT6融合蛋白,純化蛋白具有良好的抗原活性。③ESAT6和CFP10混合抗原診斷結核病的靈敏度為85.0%,特異性為95.0%,陽性預測值為94.4%,陰性預測值為86.4%；CFP10-ESAT6融合蛋白診斷結核病的靈敏度為75.0%,特異性為92.5%,陽性預測值為90.9%,陰性預測值為78.7%。 結論：①成功構建了重組表達質粒pET-28a(+)-esat6。②純化的重組蛋白ESAT6、CFP10或CFP10-ESAT6融合蛋白具有良好的抗原活性。③ESAT6和CFP10混合抗原和CFP10-ESAT6(?)蟲合蛋白診斷結核病具有較好的一致性
【關鍵詞】：結核分枝桿菌 ESAT6 CFP10 結核病 診斷
【學位授予單位】：湖南師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R521;R392
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-10
• 1.緒論10-12
• 2.材料與方法12-25
• 3.結果25-32
• 3.1 esat6基因的擴增25
• 3.2 esat6基因的克隆25-26
• 3.3 重組pET-esat6質粒的構建26
• 3.4 重組ESAT-6蛋白的表達與鑒定26-27
• 3.5 重組ESAT-6蛋白的純化與鑒定27-28
• 3.6 重組CFP10蛋白的純化與鑒定28
• 3.7 重組CFP10-ESAT-6融合蛋白的純化與鑒定28-29
• 3.8 ESAT6和CFP10混合抗原的ELISA診斷結核病29-30
• 3.9 CFP10-ESAT6融合抗原ELISA診斷結核病30-31
• 3.10 混合抗原和融合抗原診斷結核病的比較31-32
• 4.討論32-36
• 5.結論36-37
• 參考文獻37-39
• 綜述39-48
• 參考文獻44-48
• 中英文縮略詞對照表48-49
• 附錄49-50
• 致謝50-51

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前9條

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本文編號：454276