本文關(guān)鍵詞：庫(kù)京病毒TaqMan熒光RT-PCR檢測(cè)方法的建立，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的庫(kù)京病毒(Kunjin virus,KUNV)為黃病毒屬病毒,是西尼羅病毒(West Nile virus,WNV)的亞型。由于我國(guó)存在其流行的生態(tài)學(xué)條件,傳入的風(fēng)險(xiǎn)很大。因此,亟待建立快速、靈敏、高效的TaqMan熒光RT-PCR方法用于國(guó)境口岸KUNV的監(jiān)測(cè),防止其傳入。方法從GenBank中檢索KUNV全基因序列,通過(guò)MEGA 4軟件進(jìn)行序列比對(duì)和Blast進(jìn)行保守序列搜索分析,選取E基因片段為模板。利用Beacon Designer 7.0軟件針對(duì)模板設(shè)計(jì)引物和探針,進(jìn)行TaqMan熒光RT-PCR檢測(cè)并優(yōu)化反應(yīng)條件和引物濃度,退火溫度設(shè)定為50、55、60℃,引物終濃度設(shè)定為200、400、800nmol/L,探針終濃度設(shè)定為100、200、400nmol/L,通過(guò)擴(kuò)增曲線與Ct值分析確定最佳退火溫度、最佳引物及探針終濃度并驗(yàn)證該方法的敏感性和特異性。結(jié)果通過(guò)分析比較,確定KUNV熒光RT-PCR檢測(cè)方法最佳退火溫度為55℃,引物終濃度為400nmol/L,探針終濃度為200nmol/L。該方法檢測(cè)KUNV核酸的敏感度達(dá)1.83×102copies/μl,且與正布尼亞病毒屬拉克羅斯病毒(La Crosse virus,LACV)、雪靴野兔病毒(Snowshoe hare virus,SSHV),甲病毒屬巴馬哈森林病毒(Barmah Forest virus,BFV)、馬雅羅病毒(Mayaro virus,MAYV),黃病毒屬乙腦病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)、黃熱病毒(Yellow fever virus,YFV),東南亞十二節(jié)段RNA病毒屬版納病毒(Banna virus,BAV)均無(wú)交叉反應(yīng)。結(jié)論建立的TaqMan熒光RT-PCR方法靈敏度高、特異性好,適合于KUNV的快速檢測(cè),具有應(yīng)用價(jià)值。
【作者單位】： 承德醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)教研室;中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院;
【關(guān)鍵詞】： 庫(kù)京病毒 TaqMan熒光RT-PCR 檢測(cè) 方法
【基金】：質(zhì)檢公益專項(xiàng)(No.201410014)
【分類號(hào)】：R373
【正文快照】： ***黃病毒屬庫(kù)京病毒(Kunjin virus,KUNV)是一種蚊媒病毒,1960年首次分離自澳大利亞北部的環(huán)紋庫(kù)蚊(Culex Annulirostris)。人類感染KUNV后表現(xiàn)為輕度發(fā)熱、頭痛、畏光、皮疹、關(guān)節(jié)痛、肌痛和淋巴結(jié)腫大,偶發(fā)腦炎,癥狀后期出現(xiàn)重度頭痛、脖頸僵硬、口齒不清、精神混亂、共濟(jì)失

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 張海林,施華芳,米竹青,自登云,龔正達(dá),張?jiān)浦?黃文麗,李兆祥;云南省景洪市蟲(chóng)媒病毒調(diào)查分析[J];地方病通報(bào);2000年03期

2 蔡怡珊;張述鏗;范建華;高博;陳春誠(chéng);;庫(kù)寧病毒病[J];口岸衛(wèi)生控制;2007年05期

3 馬素媛;王英;艾國(guó)平;;我國(guó)主要蚊種及常用滅蚊劑的應(yīng)用[J];中國(guó)熱帶醫(yī)學(xué);2012年08期

4 馮云;張海林;;重要蟲(chóng)媒病毒傳播媒介的研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)動(dòng)物防制;2008年03期

5 魏榮 ,王志亮;西尼羅河熱及我國(guó)防控該病傳入的對(duì)策探討[J];中國(guó)動(dòng)物保健;2003年07期

6 俞永新;;蟲(chóng)媒病毒病的全球分布和重現(xiàn)概況[J];中華實(shí)驗(yàn)和臨床病毒學(xué)雜志;2005年04期

7 岳仁蘋(píng);龔正達(dá);;我國(guó)蚊類多樣性研究概況[J];中國(guó)病原生物學(xué)雜志;2009年04期

8 梁國(guó)棟;;我國(guó)新分離蟲(chóng)媒病毒及其傳播媒介[J];中國(guó)媒介生物學(xué)及控制雜志;2010年03期

9 胡群;馬思杰;孫肖紅;李永東;;黃病毒屬病毒CODEHOP RT-PCR檢測(cè)方法的建立[J];中國(guó)病原生物學(xué)雜志;2013年10期

10 鄭學(xué)禮;;我國(guó)蚊媒研究概況[J];中國(guó)病原生物學(xué)雜志;2014年02期

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 劉欣玉;俞永新;岳廣智;楊立宏;賈麗麗;董關(guān)木;;一株強(qiáng)神經(jīng)毒力乙腦病毒株的生物學(xué)及其分子特征[J];病毒學(xué)報(bào);2010年04期

2 姜曉林;王顯軍;李建東;丁淑軍;張全福;曲靖;張碩;李川;蕪為;姜梅;梁米芳;畢振強(qiáng);李德新;;家養(yǎng)動(dòng)物體表蜱中發(fā)熱伴血小板減少綜合征布尼亞病毒分離及鑒定[J];病毒學(xué)報(bào);2012年03期

3 黃文麗,張海林,侯宗柳,米竹青,自登云;云南省西雙版納發(fā)熱病人血清蟲(chóng)媒病毒抗體調(diào)查[J];地方病通報(bào);2001年02期

4 張娟;張海林;梁國(guó)棟;;全球重要蟲(chóng)媒病毒流行狀況[J];疾病預(yù)防控制通報(bào);2011年01期

5 章域震,張海林,楊衛(wèi)紅,張?jiān)浦?米竹青,袁慶虹;云南省瀾滄江下游地區(qū)人、鼠血清三種蚊媒病毒抗體調(diào)查[J];大理醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2001年04期

6 陳佳木;李亞倫;李平航;周天喜;吳青;蔡亨忠;張建慶;黃恩炯;;福州口岸入境船舶上首次發(fā)現(xiàn)埃及伊蚊及其攜帶的病原體[J];中國(guó)國(guó)境衛(wèi)生檢疫雜志;2009年03期

7 姜義霖;宋鋒林;李長(zhǎng)升;李寧;杜海方;李建訓(xùn);樊德海;;大連口岸蚊媒調(diào)查及流行性乙型腦炎病毒自然感染情況研究[J];中國(guó)國(guó)境衛(wèi)生檢疫雜志;2009年05期

8 羅琳;劉傳鴿;胡龍飛;;國(guó)境口岸蚊媒病毒檢測(cè)研究進(jìn)展[J];中國(guó)國(guó)境衛(wèi)生檢疫雜志;2012年03期

9 李翔;戚立松;戴明;俞智勇;楊學(xué)明;;船舶外來(lái)醫(yī)學(xué)媒介生物傳入風(fēng)險(xiǎn)分析初探[J];中國(guó)國(guó)境衛(wèi)生檢疫雜志;2012年04期

10 鄭夔;丁國(guó)允;李小波;師永霞;蘇錦坤;黃吉城;;6種蟲(chóng)媒病毒微孔膜芯片檢測(cè)方法的研制與應(yīng)用[J];華南預(yù)防醫(yī)學(xué);2012年05期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 李茂光;俞永新;劉欣玉;徐宏山;賈麗麗;王志偉;董關(guān)木;;SA14-14-2株乙型腦炎減毒活疫苗細(xì)胞免疫持久性研究[A];2010年中國(guó)藥學(xué)大會(huì)暨第十屆中國(guó)藥師周論文集[C];2010年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 李文娟;青藏高原（青海�。┪孟x(chóng)和蚊傳蟲(chóng)媒病毒及其與當(dāng)?shù)丶膊￡P(guān)系的研究[D];山東大學(xué);2011年

2 李志峰;廣州及周邊地區(qū)蝙蝠攜帶SARS（樣）冠狀病毒、狂犬病毒和禽流感病毒的初步流行病學(xué)調(diào)查[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2006年

3 翟友剛;我國(guó)甘肅和陜西省蟲(chóng)媒病毒調(diào)查與病毒分子生物學(xué)特征研究[D];中國(guó)疾病預(yù)防控制中心;2008年

4 涂增;蟲(chóng)媒登革病毒（Mosquito-borne dengue viruses）基因組進(jìn)化與分子診斷的研究[D];西南大學(xué);2009年

5 潘曉玲;乙型腦炎病毒全基因組分子進(jìn)化及基因重組研究[D];中國(guó)疾病預(yù)防控制中心;2009年

6 呂志;新疆蚊傳蟲(chóng)媒病毒調(diào)查[D];中國(guó)疾病預(yù)防控制中心;2009年

7 王靜林;云南�。ㄖ芯捓校┻吘车貐^(qū)蟲(chóng)媒病毒調(diào)查及病毒分子特征研究[D];中國(guó)疾病預(yù)防控制中心;2010年

8 林方;六種蟲(chóng)媒病毒蛋白芯片檢測(cè)方法的建立[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2012年

9 孫恩成;西尼羅病毒NS1蛋白對(duì)乙型腦炎病毒交叉保護(hù)作用研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2012年

10 鄭雅勻;我國(guó)山西、河南蟲(chóng)媒病毒調(diào)查及西藏新分離環(huán)狀病毒分子進(jìn)化遺傳分析[D];山東大學(xué);2014年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 張萃;浙江寧波鎮(zhèn)海工業(yè)園區(qū)昆蟲(chóng)多樣性研究[D];華東師范大學(xué);2011年

2 蔡緒禹;10種致腦炎病毒的基因芯片檢測(cè)方法建立[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2011年

3 龔道方;云南元江—紅河流域乙型腦炎媒介蚊蟲(chóng)群落特征研究[D];大理學(xué)院;2010年

4 鄧掌;云南省病毒性腦炎和不明原因發(fā)熱病人病毒病因研究[D];大理學(xué)院;2010年

5 謝暉;云南中緬邊境孟連和瀾滄縣登革熱流行狀況調(diào)查[D];大理學(xué)院;2011年

6 周傳玲;山東棗莊地區(qū)乙型腦炎流行狀況調(diào)查[D];大理學(xué)院;2011年

7 陳維欣;山東省蚊蟲(chóng)及蚊傳蟲(chóng)媒病毒分布研究[D];山東大學(xué);2011年

8 楊艷菊;西尼羅河病毒E蛋白結(jié)構(gòu)域Ⅲ的原核表達(dá)及其特異性單克隆抗體的研制[D];揚(yáng)州大學(xué);2006年

9 余向華;蚊媒傳染病流行特征及氣象影響因素研究[D];浙江大學(xué);2007年

10 朱曉光;主要蟲(chóng)媒病毒基因芯片檢測(cè)方法的建立[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2007年

【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 徐普庭,王逸民,左建民,林靜雯,徐丕模;從云南省無(wú)名熱病人和腦炎病人分離到新環(huán)狀病毒[J];病毒學(xué)報(bào);1990年01期

2 徐普庭,王逸民,左建民,車英,彭紅,黃兆惠,湯國(guó)寧,徐丕模;云南省豬牛體內(nèi)發(fā)現(xiàn)人源同型新環(huán)狀病毒[J];病毒學(xué)報(bào);1990年04期

3 侯宗柳,自登云,黃文麗,俞永新,王志偉,龔正達(dá),劉麗華,呂秀華,雷亞民,紀(jì)躍生;首次從云南卵形硬蜱中分離到抗原性與森林腦炎病毒相似的兩株病毒[J];病毒學(xué)報(bào);1991年01期

4 張海林,張?jiān)浦?米竹青;白紋伊蚊和埃及伊蚊經(jīng)卵傳遞基孔肯雅病毒的研究[J];病毒學(xué)報(bào);1993年03期

5 張海林，米竹青，張?jiān)浦?白紋伊蚊垂直傳播乙型腦炎病毒的研究[J];病毒學(xué)報(bào);1996年01期

6 呂新軍,付士紅,楊益良,何海懷,張桂筠,陳相偉,梁國(guó)棟;我國(guó)分離的XJ-90260病毒鑒定為西方馬腦炎病毒[J];病毒學(xué)報(bào);2001年04期

7 王鳳田;呂志;王靜林;付士紅;張海林;王志玉;梁國(guó)棟;;中國(guó)分離巴泰病毒基因組全編碼區(qū)序列測(cè)定和分析[J];病毒學(xué)報(bào);2009年02期

8 孫肖紅;孟維珊;付士紅;馮云;翟友剛;王靜林;王煥琴;呂新軍;梁國(guó)棟;;中國(guó)首次分離到Kadipiro病毒[J];病毒學(xué)報(bào);2009年03期

9 張?jiān)浦?張海林,龔正達(dá),米竹青,章域震,楊衛(wèi)紅,周紅寧;云南省瀾滄江下游地區(qū)蚊蟲(chóng)群落及地理生態(tài)位的研究[J];地方病通報(bào);2001年01期

10 馮崇慧;新疆維吾爾自治區(qū)1966～1990年克里米亞-剛果出血熱病毒分離記錄[J];地方病通報(bào);2004年S1期

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 霍紅;李業(yè)南;薛遙;郭立平;王曉磊;步志高;華榮虹;;豬流行性乙型腦炎病毒TaqMan熒光定量PCR方法的建立[J];中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào);2014年07期

2 季新成;史茜;郭春娟;王科珂;冉多良;;牛病毒性腹瀉病毒內(nèi)標(biāo)雙重TaqMan熒光RT-PCR方法的建立及初步應(yīng)用[J];中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào);2014年08期

3 鄭衛(wèi)東,鄭懷競(jìng),楊澤,從冠寧;通用TaqMan探針技術(shù)在apoE基因3937T/C單核苷酸多態(tài)性檢測(cè)中的應(yīng)用[J];臨床檢驗(yàn)雜志;2004年03期

4 崔銀秋;張全超;謝承志;周慧;;新型TaqMan-MB熒光探針測(cè)定古DNA模板含量[J];吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2007年01期

5 周倫江;王隆柏;方桂友;魏宏;車勇良;陳如敬;莊向生;;變異型豬繁殖與呼吸綜合征病毒TaqMan熒光定量RT-PCR方法的建立與初步應(yīng)用[J];中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào);2010年08期

6 劉毅;吳志明;閆若潛;趙明軍;王東方;趙雪麗;劉梅芬;程俊貞;薛曉;李寧;;犬細(xì)小病毒TaqMan MGB熒光定量PCR檢測(cè)方法的建立及應(yīng)用[J];中國(guó)畜牧獸醫(yī);2014年06期

7 栗冬梅;宋秀平;王君;劉起勇;;TaqMan-MGB探針檢測(cè)文森巴爾通體博格霍夫亞種實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法的建立及應(yīng)用[J];微生物學(xué)報(bào);2013年09期

8 萬(wàn)春和;程龍飛;邵周伍林;劉思國(guó);黃瑜;張?jiān)?;鴨疫里默氏桿菌TaqMan熒光定量PCR檢測(cè)方法的建立[J];中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào);2014年06期

9 曹偉偉;郭抗抗;許信剛;寧蓬勃;劉偉;程敏;董玲娟;徐磊;高婉俊;任敏;;豬圓環(huán)病毒Ⅱ型TaqMan實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法的建立與應(yīng)用[J];西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2013年01期

10 翟新驗(yàn),盧勝明,劉鈞;實(shí)時(shí)TaqMan PCR技術(shù)在獸醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用[J];實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)與管理;2002年02期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 弋英;陳繼明;王志亮;;TaqMan檢測(cè)技術(shù)——未來(lái)的病毒病常規(guī)檢測(cè)手段[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜傳染病學(xué)分會(huì)成立20周年慶典暨第十次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（上）[C];2003年

2 Yachun Su;Shanshan Wang;Jinlong Guo;Bantong Xue;Liping Xu;Youxiong Que;;A TaqMan real-time PCR assay for detection and quantification of Sporisorium scitamineum in sugarcane[A];中國(guó)作物學(xué)會(huì)2013年學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要集[C];2013年

3 Songhong Wei;Theo van der Lee;Richard van Hoof;Marga van Gent-Pelzer;Els verstappen;Cees Waalwijk;Zhiheng Liu;;Quantitative detection of Fusarium graminearum and its chemotypes by TaqMan PCR[A];中國(guó)菌物學(xué)會(huì)第六屆會(huì)員代表大會(huì)（2014年學(xué)術(shù)年會(huì)）暨貴州省食用菌產(chǎn)業(yè)發(fā)展高峰論壇會(huì)議摘要[C];2014年

4 袁秀芳;劉鄧;徐麗華;王一成;;豬傳染性胃腸炎病毒和豬流行性腹瀉病毒多重TaqMan實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測(cè)方法的建立及其初步應(yīng)用[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜傳染病學(xué)分會(huì)第七屆全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨第十三次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（下冊(cè)）[C];2009年

5 高志強(qiáng);宋立;張鶴曉;寧宜寶;喬彩霞;楊承槐;吳丹;谷強(qiáng);;豬鏈球菌通用及2型TaqMan熒光PCR檢測(cè)技術(shù)建立與應(yīng)用[A];京津冀畜牧獸醫(yī)科技創(chuàng)新交流會(huì)暨新思想、新觀點(diǎn)、新方法論壇論文集[C];2008年

6 李文濤;李文潔;劉淑清;汪洋;楊昆;鄒浩勇;何啟蓋;;豬圓環(huán)病毒2型TaqMan熒光定量PCR檢測(cè)方法的建立[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)2010年學(xué)術(shù)年會(huì)——第二屆中國(guó)獸醫(yī)臨床大會(huì)論文集(上冊(cè))[C];2010年

7 楊苗;Cheng An-chun;Wang Ming-shu;Xing Hong-yi;;Development and Application of a One-step Real-time TaqMan RT-PCR Assay for Detection of Duck Hepatitis Virus Type 1[A];第五屆中國(guó)畜牧科技論壇論文集[C];2011年

8 拜廷陽(yáng);趙德明;吳志明;閆若潛;趙明軍;劉梅芬;;豬巨細(xì)胞病毒TaqMan熒光定量PCR檢測(cè)方法的建立與應(yīng)用[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜傳染病學(xué)分會(huì)第八屆全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨第十五次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2013年

9 路斌;袁秀芳;徐麗華;李軍星;王一成;;一步法TaqMan~汶探針實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR快速檢測(cè)豬繁殖與呼吸綜合征方法的建立及初步應(yīng)用[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜傳染病學(xué)分會(huì)第八屆全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨第十五次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2013年

10 劉陽(yáng);史子學(xué);魏建超;邵東華;王皓婷;賈園;高小琪;王宗堯;晏文君;張書(shū)蕭;劉哲;王水明;王志亮;馬志永;;埃博拉病毒Z/S亞型一步法TaqMan MGB熒光定量RT-PCR檢測(cè)方法的建立[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)公共衛(wèi)生學(xué)分會(huì)第三次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2012年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 王玄珂;豬流行性腹瀉病毒TaqMan熒光定量RT-PCR檢測(cè)方法的建立及其初步應(yīng)用[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

2 霍紅;流行性乙型腦炎病毒TaqMan熒光定量PCR檢測(cè)方法的建立及應(yīng)用[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2014年

3 肖文;豬傳染性胃腸炎病毒TaqMan熒光定量RT-PCR方法的建立及初步應(yīng)用[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

4 丁維民;TaqMan-MGB探針雙重?zé)晒舛縋CR方法絕對(duì)定量MDV-Ⅰ和HVT[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

5 李霞;CAEV TaqMan PCR檢測(cè)及重組SU蛋白的真核表達(dá)[D];天津大學(xué);2012年

6 官家明;美洲型及歐洲型PRRSV多重TaqMan熒光定量RT-PCR鑒別檢測(cè)方法的建立及應(yīng)用[D];廣西大學(xué);2014年

7 呂品;狐源CDV H、F、N基因序列分析及其TaqMan熒光定量RT-PCR診斷方法的建立[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

8 方桂友;TaqMan熒光定量PCR檢測(cè)PRRSV(FJ06株)在人工感染豬體內(nèi)分布規(guī)律[D];福建農(nóng)林大學(xué);2009年

9 王韜;應(yīng)用TaqMan-MGB探針實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)檢測(cè)豬KIT基因型的研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

10 王海波;重要致病性弧菌TaqMan實(shí)時(shí)PCR檢測(cè)方法的建立[D];山東大學(xué);2009年

  本文關(guān)鍵詞：庫(kù)京病毒TaqMan熒光RT-PCR檢測(cè)方法的建立，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：450884