本文關(guān)鍵詞：庫京病毒TaqMan熒光RT-PCR檢測方法的建立，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的庫京病毒(Kunjin virus,KUNV)為黃病毒屬病毒,是西尼羅病毒(West Nile virus,WNV)的亞型。由于我國存在其流行的生態(tài)學條件,傳入的風險很大。因此,亟待建立快速、靈敏、高效的TaqMan熒光RT-PCR方法用于國境口岸KUNV的監(jiān)測,防止其傳入。方法從GenBank中檢索KUNV全基因序列,通過MEGA 4軟件進行序列比對和Blast進行保守序列搜索分析,選取E基因片段為模板。利用Beacon Designer 7.0軟件針對模板設計引物和探針,進行TaqMan熒光RT-PCR檢測并優(yōu)化反應條件和引物濃度,退火溫度設定為50、55、60℃,引物終濃度設定為200、400、800nmol/L,探針終濃度設定為100、200、400nmol/L,通過擴增曲線與Ct值分析確定最佳退火溫度、最佳引物及探針終濃度并驗證該方法的敏感性和特異性。結(jié)果通過分析比較,確定KUNV熒光RT-PCR檢測方法最佳退火溫度為55℃,引物終濃度為400nmol/L,探針終濃度為200nmol/L。該方法檢測KUNV核酸的敏感度達1.83×102copies/μl,且與正布尼亞病毒屬拉克羅斯病毒(La Crosse virus,LACV)、雪靴野兔病毒(Snowshoe hare virus,SSHV),甲病毒屬巴馬哈森林病毒(Barmah Forest virus,BFV)、馬雅羅病毒(Mayaro virus,MAYV),黃病毒屬乙腦病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)、黃熱病毒(Yellow fever virus,YFV),東南亞十二節(jié)段RNA病毒屬版納病毒(Banna virus,BAV)均無交叉反應。結(jié)論建立的TaqMan熒光RT-PCR方法靈敏度高、特異性好,適合于KUNV的快速檢測,具有應用價值。
【作者單位】： 承德醫(yī)學院病原生物學教研室;中國檢驗檢疫科學研究院;
【關(guān)鍵詞】： 庫京病毒 TaqMan熒光RT-PCR 檢測 方法
【基金】：質(zhì)檢公益專項(No.201410014)
【分類號】：R373
【正文快照】： ***黃病毒屬庫京病毒(Kunjin virus,KUNV)是一種蚊媒病毒,1960年首次分離自澳大利亞北部的環(huán)紋庫蚊(Culex Annulirostris)。人類感染KUNV后表現(xiàn)為輕度發(fā)熱、頭痛、畏光、皮疹、關(guān)節(jié)痛、肌痛和淋巴結(jié)腫大,偶發(fā)腦炎,癥狀后期出現(xiàn)重度頭痛、脖頸僵硬、口齒不清、精神混亂、共濟失

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張海林,施華芳,米竹青,自登云,龔正達,張云智,黃文麗,李兆祥;云南省景洪市蟲媒病毒調(diào)查分析[J];地方病通報;2000年03期

2 蔡怡珊;張述鏗;范建華;高博;陳春誠;;庫寧病毒病[J];口岸衛(wèi)生控制;2007年05期

3 馬素媛;王英;艾國平;;我國主要蚊種及常用滅蚊劑的應用[J];中國熱帶醫(yī)學;2012年08期

4 馮云;張海林;;重要蟲媒病毒傳播媒介的研究進展[J];醫(yī)學動物防制;2008年03期

5 魏榮 ,王志亮;西尼羅河熱及我國防控該病傳入的對策探討[J];中國動物保健;2003年07期

6 俞永新;;蟲媒病毒病的全球分布和重現(xiàn)概況[J];中華實驗和臨床病毒學雜志;2005年04期

7 岳仁蘋;龔正達;;我國蚊類多樣性研究概況[J];中國病原生物學雜志;2009年04期

8 梁國棟;;我國新分離蟲媒病毒及其傳播媒介[J];中國媒介生物學及控制雜志;2010年03期

9 胡群;馬思杰;孫肖紅;李永東;;黃病毒屬病毒CODEHOP RT-PCR檢測方法的建立[J];中國病原生物學雜志;2013年10期

10 鄭學禮;;我國蚊媒研究概況[J];中國病原生物學雜志;2014年02期

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉欣玉;俞永新;岳廣智;楊立宏;賈麗麗;董關(guān)木;;一株強神經(jīng)毒力乙腦病毒株的生物學及其分子特征[J];病毒學報;2010年04期

2 姜曉林;王顯軍;李建東;丁淑軍;張全福;曲靖;張碩;李川;蕪為;姜梅;梁米芳;畢振強;李德新;;家養(yǎng)動物體表蜱中發(fā)熱伴血小板減少綜合征布尼亞病毒分離及鑒定[J];病毒學報;2012年03期

3 黃文麗,張海林,侯宗柳,米竹青,自登云;云南省西雙版納發(fā)熱病人血清蟲媒病毒抗體調(diào)查[J];地方病通報;2001年02期

4 張娟;張海林;梁國棟;;全球重要蟲媒病毒流行狀況[J];疾病預防控制通報;2011年01期

5 章域震,張海林,楊衛(wèi)紅,張云智,米竹青,袁慶虹;云南省瀾滄江下游地區(qū)人、鼠血清三種蚊媒病毒抗體調(diào)查[J];大理醫(yī)學院學報;2001年04期

6 陳佳木;李亞倫;李平航;周天喜;吳青;蔡亨忠;張建慶;黃恩炯;;福州口岸入境船舶上首次發(fā)現(xiàn)埃及伊蚊及其攜帶的病原體[J];中國國境衛(wèi)生檢疫雜志;2009年03期

7 姜義霖;宋鋒林;李長升;李寧;杜海方;李建訓;樊德海;;大連口岸蚊媒調(diào)查及流行性乙型腦炎病毒自然感染情況研究[J];中國國境衛(wèi)生檢疫雜志;2009年05期

8 羅琳;劉傳鴿;胡龍飛;;國境口岸蚊媒病毒檢測研究進展[J];中國國境衛(wèi)生檢疫雜志;2012年03期

9 李翔;戚立松;戴明;俞智勇;楊學明;;船舶外來醫(yī)學媒介生物傳入風險分析初探[J];中國國境衛(wèi)生檢疫雜志;2012年04期

10 鄭夔;丁國允;李小波;師永霞;蘇錦坤;黃吉城;;6種蟲媒病毒微孔膜芯片檢測方法的研制與應用[J];華南預防醫(yī)學;2012年05期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 李茂光;俞永新;劉欣玉;徐宏山;賈麗麗;王志偉;董關(guān)木;;SA14-14-2株乙型腦炎減毒活疫苗細胞免疫持久性研究[A];2010年中國藥學大會暨第十屆中國藥師周論文集[C];2010年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李文娟;青藏高原（青海�。┪孟x和蚊傳蟲媒病毒及其與當?shù)丶膊￡P(guān)系的研究[D];山東大學;2011年

2 李志峰;廣州及周邊地區(qū)蝙蝠攜帶SARS（樣）冠狀病毒、狂犬病毒和禽流感病毒的初步流行病學調(diào)查[D];第一軍醫(yī)大學;2006年

3 翟友剛;我國甘肅和陜西省蟲媒病毒調(diào)查與病毒分子生物學特征研究[D];中國疾病預防控制中心;2008年

4 涂增;蟲媒登革病毒（Mosquito-borne dengue viruses）基因組進化與分子診斷的研究[D];西南大學;2009年

5 潘曉玲;乙型腦炎病毒全基因組分子進化及基因重組研究[D];中國疾病預防控制中心;2009年

6 呂志;新疆蚊傳蟲媒病毒調(diào)查[D];中國疾病預防控制中心;2009年

7 王靜林;云南�。ㄖ芯捓校┻吘车貐^(qū)蟲媒病毒調(diào)查及病毒分子特征研究[D];中國疾病預防控制中心;2010年

8 林方;六種蟲媒病毒蛋白芯片檢測方法的建立[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院;2012年

9 孫恩成;西尼羅病毒NS1蛋白對乙型腦炎病毒交叉保護作用研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學院;2012年

10 鄭雅勻;我國山西、河南蟲媒病毒調(diào)查及西藏新分離環(huán)狀病毒分子進化遺傳分析[D];山東大學;2014年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張萃;浙江寧波鎮(zhèn)海工業(yè)園區(qū)昆蟲多樣性研究[D];華東師范大學;2011年

2 蔡緒禹;10種致腦炎病毒的基因芯片檢測方法建立[D];中國農(nóng)業(yè)科學院;2011年

3 龔道方;云南元江—紅河流域乙型腦炎媒介蚊蟲群落特征研究[D];大理學院;2010年

4 鄧掌;云南省病毒性腦炎和不明原因發(fā)熱病人病毒病因研究[D];大理學院;2010年

5 謝暉;云南中緬邊境孟連和瀾滄縣登革熱流行狀況調(diào)查[D];大理學院;2011年

6 周傳玲;山東棗莊地區(qū)乙型腦炎流行狀況調(diào)查[D];大理學院;2011年

7 陳維欣;山東省蚊蟲及蚊傳蟲媒病毒分布研究[D];山東大學;2011年

8 楊艷菊;西尼羅河病毒E蛋白結(jié)構(gòu)域Ⅲ的原核表達及其特異性單克隆抗體的研制[D];揚州大學;2006年

9 余向華;蚊媒傳染病流行特征及氣象影響因素研究[D];浙江大學;2007年

10 朱曉光;主要蟲媒病毒基因芯片檢測方法的建立[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院;2007年

【二級參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 徐普庭,王逸民,左建民,林靜雯,徐丕模;從云南省無名熱病人和腦炎病人分離到新環(huán)狀病毒[J];病毒學報;1990年01期

2 徐普庭,王逸民,左建民,車英,彭紅,黃兆惠,湯國寧,徐丕模;云南省豬牛體內(nèi)發(fā)現(xiàn)人源同型新環(huán)狀病毒[J];病毒學報;1990年04期

3 侯宗柳,自登云,黃文麗,俞永新,王志偉,龔正達,劉麗華,呂秀華,雷亞民,紀躍生;首次從云南卵形硬蜱中分離到抗原性與森林腦炎病毒相似的兩株病毒[J];病毒學報;1991年01期

4 張海林,張云智,米竹青;白紋伊蚊和埃及伊蚊經(jīng)卵傳遞基孔肯雅病毒的研究[J];病毒學報;1993年03期

5 張海林，米竹青，張云智;白紋伊蚊垂直傳播乙型腦炎病毒的研究[J];病毒學報;1996年01期

6 呂新軍,付士紅,楊益良,何海懷,張桂筠,陳相偉,梁國棟;我國分離的XJ-90260病毒鑒定為西方馬腦炎病毒[J];病毒學報;2001年04期

7 王鳳田;呂志;王靜林;付士紅;張海林;王志玉;梁國棟;;中國分離巴泰病毒基因組全編碼區(qū)序列測定和分析[J];病毒學報;2009年02期

8 孫肖紅;孟維珊;付士紅;馮云;翟友剛;王靜林;王煥琴;呂新軍;梁國棟;;中國首次分離到Kadipiro病毒[J];病毒學報;2009年03期

9 張云智,張海林,龔正達,米竹青,章域震,楊衛(wèi)紅,周紅寧;云南省瀾滄江下游地區(qū)蚊蟲群落及地理生態(tài)位的研究[J];地方病通報;2001年01期

10 馮崇慧;新疆維吾爾自治區(qū)1966～1990年克里米亞-剛果出血熱病毒分離記錄[J];地方病通報;2004年S1期

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 霍紅;李業(yè)南;薛遙;郭立平;王曉磊;步志高;華榮虹;;豬流行性乙型腦炎病毒TaqMan熒光定量PCR方法的建立[J];中國預防獸醫(yī)學報;2014年07期

2 季新成;史茜;郭春娟;王科珂;冉多良;;牛病毒性腹瀉病毒內(nèi)標雙重TaqMan熒光RT-PCR方法的建立及初步應用[J];中國預防獸醫(yī)學報;2014年08期

3 鄭衛(wèi)東,鄭懷競,楊澤,從冠寧;通用TaqMan探針技術(shù)在apoE基因3937T/C單核苷酸多態(tài)性檢測中的應用[J];臨床檢驗雜志;2004年03期

4 崔銀秋;張全超;謝承志;周慧;;新型TaqMan-MB熒光探針測定古DNA模板含量[J];吉林大學學報(醫(yī)學版);2007年01期

5 周倫江;王隆柏;方桂友;魏宏;車勇良;陳如敬;莊向生;;變異型豬繁殖與呼吸綜合征病毒TaqMan熒光定量RT-PCR方法的建立與初步應用[J];中國獸醫(yī)學報;2010年08期

6 劉毅;吳志明;閆若潛;趙明軍;王東方;趙雪麗;劉梅芬;程俊貞;薛曉;李寧;;犬細小病毒TaqMan MGB熒光定量PCR檢測方法的建立及應用[J];中國畜牧獸醫(yī);2014年06期

7 栗冬梅;宋秀平;王君;劉起勇;;TaqMan-MGB探針檢測文森巴爾通體博格霍夫亞種實時熒光定量PCR方法的建立及應用[J];微生物學報;2013年09期

8 萬春和;程龍飛;邵周伍林;劉思國;黃瑜;張云;;鴨疫里默氏桿菌TaqMan熒光定量PCR檢測方法的建立[J];中國預防獸醫(yī)學報;2014年06期

9 曹偉偉;郭抗抗;許信剛;寧蓬勃;劉偉;程敏;董玲娟;徐磊;高婉俊;任敏;;豬圓環(huán)病毒Ⅱ型TaqMan實時熒光定量PCR檢測方法的建立與應用[J];西北農(nóng)林科技大學學報(自然科學版);2013年01期

10 翟新驗,盧勝明,劉鈞;實時TaqMan PCR技術(shù)在獸醫(yī)學中的應用[J];實驗動物科學與管理;2002年02期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 弋英;陳繼明;王志亮;;TaqMan檢測技術(shù)——未來的病毒病常規(guī)檢測手段[A];中國畜牧獸醫(yī)學會家畜傳染病學分會成立20周年慶典暨第十次學術(shù)研討會論文集（上）[C];2003年

2 Yachun Su;Shanshan Wang;Jinlong Guo;Bantong Xue;Liping Xu;Youxiong Que;;A TaqMan real-time PCR assay for detection and quantification of Sporisorium scitamineum in sugarcane[A];中國作物學會2013年學術(shù)年會論文摘要集[C];2013年

3 Songhong Wei;Theo van der Lee;Richard van Hoof;Marga van Gent-Pelzer;Els verstappen;Cees Waalwijk;Zhiheng Liu;;Quantitative detection of Fusarium graminearum and its chemotypes by TaqMan PCR[A];中國菌物學會第六屆會員代表大會（2014年學術(shù)年會）暨貴州省食用菌產(chǎn)業(yè)發(fā)展高峰論壇會議摘要[C];2014年

4 袁秀芳;劉鄧;徐麗華;王一成;;豬傳染性胃腸炎病毒和豬流行性腹瀉病毒多重TaqMan實時熒光定量RT-PCR檢測方法的建立及其初步應用[A];中國畜牧獸醫(yī)學會家畜傳染病學分會第七屆全國會員代表大會暨第十三次學術(shù)研討會論文集（下冊）[C];2009年

5 高志強;宋立;張鶴曉;寧宜寶;喬彩霞;楊承槐;吳丹;谷強;;豬鏈球菌通用及2型TaqMan熒光PCR檢測技術(shù)建立與應用[A];京津冀畜牧獸醫(yī)科技創(chuàng)新交流會暨新思想、新觀點、新方法論壇論文集[C];2008年

6 李文濤;李文潔;劉淑清;汪洋;楊昆;鄒浩勇;何啟蓋;;豬圓環(huán)病毒2型TaqMan熒光定量PCR檢測方法的建立[A];中國畜牧獸醫(yī)學會2010年學術(shù)年會——第二屆中國獸醫(yī)臨床大會論文集(上冊)[C];2010年

7 楊苗;Cheng An-chun;Wang Ming-shu;Xing Hong-yi;;Development and Application of a One-step Real-time TaqMan RT-PCR Assay for Detection of Duck Hepatitis Virus Type 1[A];第五屆中國畜牧科技論壇論文集[C];2011年

8 拜廷陽;趙德明;吳志明;閆若潛;趙明軍;劉梅芬;;豬巨細胞病毒TaqMan熒光定量PCR檢測方法的建立與應用[A];中國畜牧獸醫(yī)學會家畜傳染病學分會第八屆全國會員代表大會暨第十五次學術(shù)研討會論文集[C];2013年

9 路斌;袁秀芳;徐麗華;李軍星;王一成;;一步法TaqMan~汶探針實時熒光定量RT-PCR快速檢測豬繁殖與呼吸綜合征方法的建立及初步應用[A];中國畜牧獸醫(yī)學會家畜傳染病學分會第八屆全國會員代表大會暨第十五次學術(shù)研討會論文集[C];2013年

10 劉陽;史子學;魏建超;邵東華;王皓婷;賈園;高小琪;王宗堯;晏文君;張書蕭;劉哲;王水明;王志亮;馬志永;;埃博拉病毒Z/S亞型一步法TaqMan MGB熒光定量RT-PCR檢測方法的建立[A];中國畜牧獸醫(yī)學會獸醫(yī)公共衛(wèi)生學分會第三次學術(shù)研討會論文集[C];2012年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王玄珂;豬流行性腹瀉病毒TaqMan熒光定量RT-PCR檢測方法的建立及其初步應用[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2013年

2 霍紅;流行性乙型腦炎病毒TaqMan熒光定量PCR檢測方法的建立及應用[D];中國農(nóng)業(yè)科學院;2014年

3 肖文;豬傳染性胃腸炎病毒TaqMan熒光定量RT-PCR方法的建立及初步應用[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2011年

4 丁維民;TaqMan-MGB探針雙重熒光定量PCR方法絕對定量MDV-Ⅰ和HVT[D];安徽農(nóng)業(yè)大學;2009年

5 李霞;CAEV TaqMan PCR檢測及重組SU蛋白的真核表達[D];天津大學;2012年

6 官家明;美洲型及歐洲型PRRSV多重TaqMan熒光定量RT-PCR鑒別檢測方法的建立及應用[D];廣西大學;2014年

7 呂品;狐源CDV H、F、N基因序列分析及其TaqMan熒光定量RT-PCR診斷方法的建立[D];山東農(nóng)業(yè)大學;2008年

8 方桂友;TaqMan熒光定量PCR檢測PRRSV(FJ06株)在人工感染豬體內(nèi)分布規(guī)律[D];福建農(nóng)林大學;2009年

9 王韜;應用TaqMan-MGB探針實時定量PCR技術(shù)檢測豬KIT基因型的研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學;2010年

10 王海波;重要致病性弧菌TaqMan實時PCR檢測方法的建立[D];山東大學;2009年

  本文關(guān)鍵詞：庫京病毒TaqMan熒光RT-PCR檢測方法的建立，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：450884