本文關鍵詞：輻射誘發(fā)基因組不穩(wěn)定性肝細胞Ran基因過表達和RNAi模型的構建，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的構建基因組不穩(wěn)定細胞Ran基因過表達和RNAi模型,為進一步研究該基因在輻射誘發(fā)基因組不穩(wěn)定的功能提供研究工具。方法根據(jù)Ran基因信息,以慢病毒載體GV218設計合成2種重組質粒,分別包含Ran基因全長序列以及陰性對照序列;以慢病毒載體GV248設計合成2重組質粒,分別包含Ran基因的小干擾序列以及用于干擾對照的陰性序列。利用Western blot和qPCR進行過表達和RNAi重組質粒表達的檢測;通過轉染293T細胞進行慢病毒的包裝;利用qPCR和熒光法分別進行滴度的檢測;再用包裝好的慢病毒感染輻射誘導基因組不穩(wěn)定性HL-7702肝細胞,利用qPCR檢測Ran基因表達量。結果測序結果表明重組質粒構建成功,并能夠有效轉染293T。過表達病毒滴度為2.0×108 TU/mL;RNAi病毒滴度為3.0×108 TU/mL。過表達慢病毒能有效地上調Ran基因的表達,過表達效率為85%。RNAi干擾慢病毒能夠有效抑制Ran基因的表達,抑制效率為73%。結論成功構建基因組不穩(wěn)定肝細胞Ran基因過表達和RNAi模型,為進一步研究Ran基因在輻射誘發(fā)基因組不穩(wěn)定細胞中的功能提供了有效的研究工具。
【作者單位】： 中國輻射防護研究院;
【關鍵詞】： Ran基因 過表達 RNA干擾 慢病毒載體
【基金】：中國核工業(yè)集團公司青年科技創(chuàng)新團隊項目
【分類號】：R3416
【正文快照】： !Ran(Ras-related nuclear protein)是原癌基因家族Ras相關的GTP酶(GTPase),參與一系列周期事件的調控,以確保細胞周期順利進行[1]。有研究顯示GTPase Ran能夠直接抑制復制起始因子[2-3],防止細胞在同一個周期內重復復制,進而維持基因組的穩(wěn)定性。電離輻射能夠誘發(fā)基因組不穩(wěn)

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本文編號：450847