本文關(guān)鍵詞：輻射誘發(fā)基因組不穩(wěn)定性肝細(xì)胞Ran基因過(guò)表達(dá)和RNAi模型的構(gòu)建，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的構(gòu)建基因組不穩(wěn)定細(xì)胞Ran基因過(guò)表達(dá)和RNAi模型,為進(jìn)一步研究該基因在輻射誘發(fā)基因組不穩(wěn)定的功能提供研究工具。方法根據(jù)Ran基因信息,以慢病毒載體GV218設(shè)計(jì)合成2種重組質(zhì)粒,分別包含Ran基因全長(zhǎng)序列以及陰性對(duì)照序列;以慢病毒載體GV248設(shè)計(jì)合成2重組質(zhì)粒,分別包含Ran基因的小干擾序列以及用于干擾對(duì)照的陰性序列。利用Western blot和qPCR進(jìn)行過(guò)表達(dá)和RNAi重組質(zhì)粒表達(dá)的檢測(cè);通過(guò)轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞進(jìn)行慢病毒的包裝;利用qPCR和熒光法分別進(jìn)行滴度的檢測(cè);再用包裝好的慢病毒感染輻射誘導(dǎo)基因組不穩(wěn)定性HL-7702肝細(xì)胞,利用qPCR檢測(cè)Ran基因表達(dá)量。結(jié)果測(cè)序結(jié)果表明重組質(zhì)粒構(gòu)建成功,并能夠有效轉(zhuǎn)染293T。過(guò)表達(dá)病毒滴度為2.0×108 TU/mL;RNAi病毒滴度為3.0×108 TU/mL。過(guò)表達(dá)慢病毒能有效地上調(diào)Ran基因的表達(dá),過(guò)表達(dá)效率為85%。RNAi干擾慢病毒能夠有效抑制Ran基因的表達(dá),抑制效率為73%。結(jié)論成功構(gòu)建基因組不穩(wěn)定肝細(xì)胞Ran基因過(guò)表達(dá)和RNAi模型,為進(jìn)一步研究Ran基因在輻射誘發(fā)基因組不穩(wěn)定細(xì)胞中的功能提供了有效的研究工具。
【作者單位】： 中國(guó)輻射防護(hù)研究院;
【關(guān)鍵詞】： Ran基因 過(guò)表達(dá) RNA干擾 慢病毒載體
【基金】：中國(guó)核工業(yè)集團(tuán)公司青年科技創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目
【分類(lèi)號(hào)】：R3416
【正文快照】： !Ran(Ras-related nuclear protein)是原癌基因家族Ras相關(guān)的GTP酶(GTPase),參與一系列周期事件的調(diào)控,以確保細(xì)胞周期順利進(jìn)行[1]。有研究顯示GTPase Ran能夠直接抑制復(fù)制起始因子[2-3],防止細(xì)胞在同一個(gè)周期內(nèi)重復(fù)復(fù)制,進(jìn)而維持基因組的穩(wěn)定性。電離輻射能夠誘發(fā)基因組不穩(wěn)

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：450847