本文關(guān)鍵詞：金黃色葡萄球菌IsdB表位蛋白與HBc蛋白融合表達，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:采用大腸桿菌表達HBc-IsdB50-285融合蛋白,探討其在原核表達系統(tǒng)中的表達效果。方法:設(shè)計并克隆HBc-IsdB50-285融合基因片段,構(gòu)建表達質(zhì)粒pET-28-HBc-IsdB50-285,并轉(zhuǎn)化入E.coli BL21,異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)蛋白表達。SDS-PAGE分析蛋白可溶性及相對分子質(zhì)量;BCA法測蛋白濃度;采用免疫接種法檢測重組蛋白的免疫活性。40只小鼠隨機分為rIsdB+adjuvant組、HBc-IsdB50-285+adjuvant組、HBcIsdB50-285組和PBS組,每組10只,間接ELISA法檢測小鼠特異性IgG效價值,采用金黃色葡萄球菌Newman株對免疫后小鼠攻毒,檢測各組小鼠重組蛋白免疫保護效果。結(jié)果:表達質(zhì)粒pET-28-HBc-IsdB50-285經(jīng)測序及酶切鑒定證明構(gòu)建正確;SDS-PAGE分析,重組蛋白以部分可溶形式存在于培養(yǎng)上清中,相對分子質(zhì)量約為44 000,親和純化后蛋白質(zhì)水平為1.0g·L-1。ELISA檢測,使用rIsdB蛋白包被酶標(biāo)板,HBc-IsdB50-285+adjuvan組小鼠血清特異性抗體滴度的效價值低于rIsdB+adjuvant組(P0.01);使用HBc-IsdB50-285蛋白包被酶標(biāo)板,HBc-IsdB50-285+adjuvant組的小鼠血清特異性抗體滴度的效價值高于rIsdB+adjuvant和HBc-IsdB50-285組。攻毒實驗,HBc-IsdB50-285+adjuvant組小鼠對金黃色葡萄球菌免疫保護率低于rIsdB+adjuvant組,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);且其與HBc-IsdB50-285未添加佐劑組比較差異也無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);與PBS組比較,HBc-IsdB50-285+adjuvant組小鼠對金黃色葡萄球免疫保護率升高(P0.01),HBc-IsdB50-285組小鼠對金黃色葡萄球菌攻毒保護率亦升高(P0.05)。結(jié)論:HBc-IsdB50-285原核表達載體構(gòu)建成功;在大腸桿菌中成功表達具有較好生物活性的HBc-IsdB50-285融合蛋白。
【作者單位】： 內(nèi)蒙古民族大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室;內(nèi)蒙古民族大學(xué)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)與免疫學(xué)教研室;吉林省集安益盛藥業(yè)股份有限公司;
【關(guān)鍵詞】： 金黃色葡萄球菌 乙型肝炎病毒核心蛋白 鐵調(diào)節(jié)表面決定因子B 表位
【基金】：內(nèi)蒙古自治區(qū)科技廳自然科學(xué)基金資助課題(2011BS0401) 內(nèi)蒙古民族大學(xué)博士科研啟動基金資助課題(BS280)
【分類號】：R378.1;Q78
【正文快照】： 金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)是一種廣泛存在人和動物體內(nèi)的革蘭陽性球菌,可以在皮膚、泌尿生殖道、消化道和呼吸道引起化膿性感染,嚴重者可以引起全身性膿毒血癥[1]。金黃色葡萄球菌在漫長的進化過程中,出現(xiàn)了大量的耐藥株,以耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MR

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本文編號：449724