本文關鍵詞：耐甲氧西林金黃色葡萄球菌臨床分離株的分子分型及耐藥性分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是院內感染的主要病原菌之一，也是社區(qū)中引起皮膚和軟組織感染的常見原因。1961年Jevons在英國發(fā)現(xiàn)首例耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus，MRSA)感染后，MRSA便以驚人的速度在世界范圍內蔓延，20世紀70年代后期已遍布世界各個角落，80年代末成為全球性病原微生物。在世界各地，曾多次出現(xiàn)醫(yī)院內MRSA感染的暴發(fā)和流行，且一旦發(fā)生，往往迅速傳播，較難控制，導致發(fā)病率及病死率居高不下，給醫(yī)院和社會帶來沉重的負擔。 MRSA是醫(yī)院感染的重要病原菌，在醫(yī)院獲得感染的MRSA被稱為醫(yī)院獲得性MRSA(hospital-acquired MRSA，HA-MRSA)，通常通過接觸傳播，感染年齡較大、免疫力低下、皮膚有傷口或于體外有管道相通的患者，健康人很少受到感染。然而近年來的研究顯示，一種新型的MRSA引起感染的比例呈逐年上升趨勢，這種新近流行的MRSA最早發(fā)現(xiàn)于1997年的美國紐約，其后多發(fā)生于社區(qū)環(huán)境中，通常感染無相關危險因素的健康群體，被稱為社區(qū)獲得性MRSA(community-acquired MRSA，CA-MRSA)。 MRSA是金葡菌獲得了具有高度多態(tài)性的外源性葡萄球菌染色體盒(staphylococcalcassette chromosome mec，SCCmec)后形成的，HA-MRSA多攜帶I、II、III型SCCmec移動元件，這幾型元件較大，可攜帶多種耐藥基因，臨床上表現(xiàn)為多重耐藥。相對而言，IV和V型SCCmec元件多在CA-MRSA菌株之間傳播，元件片段較小，除mecA基因外較少攜帶其他耐藥基因。 目前，在全球范圍內，HA-MRSA主要由一些具有特定遺傳背景的克隆組成。在歐洲，德國、比利時主要為Iberian和Southern Germany克隆，英國為EMRSA-16克隆。在亞洲，韓國、日本主要為New York/Japan克隆，而在印度及我國臺灣等地主要為Brazilian/Hungarian克隆流行。CA-MRSA同樣存在一些主要的克隆。USA300是在世界范圍內，尤其是在美國流行最為廣泛的克隆，荷蘭主要為USA1000和USA300克隆，英國主要為EMRSA-15克隆，韓國以USA700克隆為主，我國香港主要為USA1100和USAl000克隆。這些情況表明MRSA的流行具有地理上的獨特性。 控制MRSA流行的重要策略在于明確其流行環(huán)節(jié)、切斷傳播途徑、終止耐藥菌株在人群中的傳播。因而，檢測MRSA流行株的分子特征及耐藥譜對于鑒別菌株間的親緣關系、有效控制MRSA感染意義重大。本研究對2009年2月至2012年5月從北京、上海、重慶、廣州、沈陽、烏魯木齊等6座城市的9所教學醫(yī)院收集的517株金黃色葡萄球菌進行檢測研究，鑒定出MRSA菌株，再綜合運用MRSA分子分型方法，對所有MRSA菌株進行分型分析。所得結果不僅可以豐富我國MRSA的分子流行病學資料，為MRSA感染的監(jiān)控提供實驗依據，并為我國其他地區(qū)MRSA感染和流行的檢測提供借鑒。同時對MRSA菌株的抗生素耐藥譜進行測定和分析，探討耐藥譜與菌株分子分型之間的關系，為研究MRSA的耐藥機制提供依據，進一步對指導臨床抗生素的合理應用，減少抗生素的浪費，從根本上控制MRSA的感染和暴發(fā)流行有重要意義。主要研究內容和結果包括以下三個部分： 1. MRSA的分子鑒定：應用mecA-femB雙重PCR確認MRSA。檢出MRSA309株，檢出率59.8%（309/517）。 2. MRSA分子分型研究：①SCCmec基因分型：用PCR方法擴增mec復合物及ccr復合物各基因組分，產物經電泳成像后判斷其片段大小和組成，明確SCCmec基因型。結果309株MRSA菌株中SCCmec III型178株、占57.6%，SCCmec II型68株、占22.0%，SCCmec IV型27株、占8.7%，SCCmec I型19株、占6.2%，SCCmec V型13株、占4.2%，未分型MRSA4株、占1.3%；②葡萄球菌A蛋白基因多態(tài)性分析(spa)：PCR方法擴增葡萄球菌的表面蛋白SPA基因的X區(qū)，并進行核苷酸測序，將測序結果與數據庫(http://www.ridom.de/spaserver)中公布的堿基重復序列進行比較，根據排列方式及重復次數確定MRSA的spa型別。結果309株MRSA菌可分為31個spa基因型，其中優(yōu)勢型別為t030型（90株，占29.1%）、t002型(49株,占15.9%)、t037型（48株，15.5%），另外發(fā)現(xiàn)新的spa基因型7株；③多位點序列分型(MLST)：以金葡菌的7個管家基因(arc,aroE, glpF, gmk, pta, tpi and yqiL)的PCR擴增片段序列分析為基礎，產物經純化后進行雙向測序，直接將結果提交數據庫(http://saureus.mlst.net/)進行比較，比較每個多態(tài)性位點的等位基因，獲得序列號(ST)，與已知的MRSA流行株進行比較和分析。309株MRSA菌可分為15個ST型，優(yōu)勢型別為ST239型(159株，，51.5%）、ST5型(78株,占25.2%)、ST59型(33株，10.7%)，另外發(fā)現(xiàn)新的ST型4株；④脈沖場凝膠電泳分型(PFGE)：新鮮培養(yǎng)的MRSA包埋于瓊脂中，經過破壁、原位消化、酶切、電泳、染色和紫外成像后，所得結果用軟件BioNumerics version6.6(Applied Maths)進行聚類分析。結果309株MRSA分為23個聚類組，依次命名為A-W型。包括17個大聚類組、6個小聚類組以及37個偶發(fā)株。其中E型、I型、L型和M型為主要型別，分別占9.7%(30/309)、10.0%(31/309)、12.9%(40/309)和7.8%(24/309)；⑤殺白細胞毒素(PVL)毒力基因檢測：PCR方法擴增特征基因。76株MRSA擴增條帶顯示pvl基因陽性，陽性率為24.6%。 3. MRSA的藥敏試驗：采用BioFosun微生物鑒定藥敏分析儀檢測MRSA對17種抗生素的敏感性。結果顯示對β-內酰胺類抗生素的耐藥率最高，如對苯唑西林的耐藥率為97.6%，對青霉素的耐藥率為100%，對氨芐西林的耐藥率為99.4%。同時，對多種非β-內酰胺類抗生素也有較高的耐藥率，如對慶大霉素的耐藥率為77.3%，對環(huán)丙沙星的耐藥率為80.2%，對克林霉素的耐藥率為80.9%，對紅霉素的耐藥率為86.2%以及對左氧氟沙星的耐藥率為81.7%。如果將某一菌株對3種以上非β-內酰胺類抗生素耐藥定義為多重耐藥菌株，則檢測的結果顯示74.8%(231/309)的MRSA株是多重耐藥菌株。 綜上所述，分子流行病學檢測顯示我國MRSA并非以單一克隆占優(yōu)勢，主要由3種克隆(ST239-MRSA-III-t030、ST5-MRSA-II-t002和ST239-MRSA-III-t037)構成，并且呈交替流行趨勢。除了上述流行優(yōu)勢克隆外，另外發(fā)現(xiàn)6個小規(guī)模的克隆在中國局部地區(qū)流行，如在重慶流行的ST239-MRSA-III-t138(3.6%,11/309)，在廣州流行的ST45-MRSA-III-t1081(3.6%,11/309)和ST59-MRSA-I-t437(2.6%,8/309)，主要在沈陽流行的ST5-MRSA-II-t570(46.4%,13/28)，以及在重慶和廣州流行的ST59-MRSA-IV-t437(3.6%,11/309)和ST59-MRSA-V-t437(1.6%,5/309)。本研究結果同時提示不同地區(qū)的MRSA優(yōu)勢流行克隆對抗生素的耐藥譜(定義耐藥率大于70%的非β-內酰胺類抗生素組成不同型別MRSA耐藥譜)不盡相同，北京、廣州和烏魯木齊流行的ST239-MRSA-III-t030克隆有耐藥譜GEN/CIP/RIF/LVX，重慶的流行克隆ST239-MRSA-III-t037和上海的流行克隆ST5-MRSA-II-t002有相同的耐藥譜GEN/CIP/CLI/ERY/TET/LVX/SXT，沈陽的流行克隆ST5-MRSA-II-t570有耐藥譜GEN/CIP/CLI/ERY/TET/LVX。MRSA流行的地理特性和對抗生素的多重耐藥提示對MRSA長期的進化和耐藥問題需要進行長期的多中心聯(lián)合的動態(tài)研究，以便為MRSA的防控提供重要參考依據。
【關鍵詞】：耐甲氧西林金黃色葡萄球菌 分子分型 藥敏試驗 耐藥譜
【學位授予單位】：第三軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R378.11;R446.5
【目錄】：

• 縮略語表4-7
• Abstract7-11
• 摘要11-14
• 第一章 前言14-19
• 1.1 選題緣由14
• 1.2 研究背景14-16
• 1.3 研究意義16-17
• 1.4 研究內容17
• 1.5 研究方法17-19
• 第二章 金葡菌臨床分離株的收集、培養(yǎng)及 MRSA 的鑒定19-27
• 2.1 材料與方法19-24
• 2.2 結果24-25
• 2.3 討論25-27
• 第三章 MRSA 的分子分型27-52
• 3.1 材料與方法27-39
• 3.2 結果39-46
• 3.3 討論46-52
• 第四章 MRSA 臨床分離株的耐藥性分析52-59
• 4.1 材料和方法53-54
• 4.2 結果54-56
• 4.3 討論56-59
• 全文總結59-61
• 參考文獻61-68
• 文獻綜述68-79
• 參考文獻77-79
• 攻讀學位期間的研究成果與參與的課題79-80
• 致謝80

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前1條

1 李家泰,AllanJ Weinstein,楊敏,中國細菌耐藥監(jiān)測研究組;中國細菌耐藥監(jiān)測研究[J];中華醫(yī)學雜志;2001年01期

  本文關鍵詞：耐甲氧西林金黃色葡萄球菌臨床分離株的分子分型及耐藥性分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：440410