本文關(guān)鍵詞：成纖維細(xì)胞生長因子-2對成骨細(xì)胞礦化的影響及其機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：在骨形成過程中，成骨細(xì)胞分泌大量的生長因子如成纖維細(xì)胞生長因子-2、類胰島素生長因子-1以及轉(zhuǎn)化生長因子-β等，通過自分泌或旁分泌的方式調(diào)控成骨細(xì)胞的生長、分化和礦化。其中，成纖維細(xì)胞生長因子-2（Fibroblast growth factor-2，F(xiàn)GF2）在成骨以及骨枷形成中發(fā)揮重要的作用。研究表明，，F(xiàn)GF2對成骨細(xì)胞分化和礦化的影響是分階段性的；并且FGF2長期作用于成骨細(xì)胞可明顯抑制其礦化。研究表明FGF2可通過改變PPi/Pi調(diào)控蛋白的表達(dá)抑制成骨細(xì)胞的礦化，但是FGF2影響成骨細(xì)胞礦化的機(jī)制仍不清楚，尤其是其胞外機(jī)制的研究還尚未報(bào)道。 基質(zhì)小泡（Matrix Vesicles，MVs）是一類直徑為30-400nm的、由膜包被的小囊泡，通過出芽的方式由具有礦化能力的細(xì)胞如成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞等分泌到細(xì)胞外基質(zhì)中；MVs通過其富含的多種功能蛋白質(zhì)在細(xì)胞外基質(zhì)中吸收鈣離子和磷離子,形成羥基磷灰石（hydroxyapatite，HA）,羥基磷灰石在MVs中繼續(xù)生長，直至刺破MVs膜，定位于膠原上，啟動礦化。除了在生理性礦化中的重要作用外，MVs在病理性礦化類疾病的發(fā)生和發(fā)展中也起著非常重要的作用；如MVs的功能增強(qiáng)是動脈粥樣硬化發(fā)生的重要病理機(jī)制。盡管MVs在礦化過程中起重要作用，但是目前對MVs功能的調(diào)控機(jī)制仍知之甚少。 目的：本研究旨在探究FGF2對成骨細(xì)胞礦化的影響，并對其胞外機(jī)制進(jìn)行研究。 方法：（1）采用含有抗壞血酸和β-磷酸甘油的礦化誘導(dǎo)液促進(jìn)Saos-2細(xì)胞成骨分化及礦化，建立細(xì)胞礦化模型。（2）將Saos-2細(xì)胞分為正常對照組、礦化誘導(dǎo)組和FGF2組，礦化誘導(dǎo)組在培養(yǎng)液中加入50ug/ml抗壞血酸和7.5mMβ-磷酸甘油的誘導(dǎo)培養(yǎng)液50ng/ml的FGF2進(jìn)行培養(yǎng)。三組細(xì)胞在培養(yǎng)第3、6、9天分別進(jìn)行礦化相關(guān)基因ALP, Runx2和ColIa1的表達(dá)量檢測，并進(jìn)行礦化結(jié)節(jié)定性、定量檢測。（3）用ExoQuickTM試劑方法提取正常對照組、礦化誘導(dǎo)組和FGF2組Saos-2細(xì)胞的細(xì)胞外分泌物。然后，用電子顯微鏡檢測分泌物形態(tài)，用western blot的方法檢測基質(zhì)小泡表面標(biāo)志物CD63和CD9的表達(dá)情況。（4）用p-NPP檢測基質(zhì)小泡的ALP活性，然后將提取后的MVs在礦化緩沖溶液（SCL）中孵育12h, MVs可繼續(xù)吸收鈣離子形成羥基磷灰石。鈣離子檢測試劑盒檢測三組MVs孵育完之后的鈣離子濃度，以檢測MVs的體外礦化能力。 結(jié)果：（1）茜素紅染色結(jié)果顯示礦化誘導(dǎo)組發(fā)生明顯礦化，產(chǎn)生大量礦化結(jié)節(jié)，對照組只有少量礦化；礦化結(jié)節(jié)定量結(jié)果顯示誘導(dǎo)組產(chǎn)生的礦化結(jié)節(jié)是正常對照組的5倍左右，說明我們成功構(gòu)建了Saos-2的體外礦化模型。（2）FGF2明顯抑制了Saos-2細(xì)胞礦化標(biāo)志標(biāo)志基因ALP, Runx2和CoIa1的表達(dá)，并且減弱了細(xì)胞的礦化；證明FGF2對Saos-2細(xì)胞的成骨分化和礦化具有明顯的抑制作用。（3）電鏡觀察發(fā)現(xiàn)采用ExoQuickTM試劑提取三組Saos-2細(xì)胞分泌物直徑均在30-400nm之間，為膜包被小泡；Western Blot結(jié)果檢測發(fā)現(xiàn)三組小泡均表達(dá)基質(zhì)小泡標(biāo)志蛋白CD63和CD9，成功提取了基質(zhì)小泡。（4）ALP活性分析顯示，F(xiàn)GF2組的ALP活性低于礦化誘導(dǎo)組；各組MVs孵育之后，鈣離子濃度測定顯示，F(xiàn)GF2組鈣離子濃度明顯低于礦化誘導(dǎo)組，F(xiàn)GF2明顯抑制了基質(zhì)小泡體外礦化能力。 結(jié)論：成纖維細(xì)胞生長因子-2長期作用于Saos-2細(xì)胞可明顯抑制其礦化，并可通過抑制基質(zhì)小泡的功能發(fā)揮其抑制作用。
【關(guān)鍵詞】：成纖維細(xì)胞生長因子-2 Saos-2細(xì)胞 礦化 基質(zhì)小泡
【學(xué)位授予單位】：濟(jì)南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 摘要8-10
• ABSTRACT10-13
• 主要符號表13-14
• 前言14-19
• 1 成骨細(xì)胞礦化14-15
• 1.1 概述14
• 1.2 生長因子與成骨細(xì)胞礦化14-15
• 2 成纖維細(xì)胞生長因子-215-16
• 2.1 概述15
• 2.2 FGF2 與成骨細(xì)胞礦化15-16
• 3 基質(zhì)小泡16-19
• 3.1 基質(zhì)小泡定義16-17
• 3.2 基質(zhì)小泡介導(dǎo)的礦化機(jī)制17
• 3.3 基質(zhì)小泡功能蛋白質(zhì)17-18
• 3.4 生長因子與基質(zhì)小泡18-19
• 第一章 Saos-2 細(xì)胞礦化誘導(dǎo)模型的建立19-24
• 1 材料與方法19-22
• 1.1 材料19-20
• 1.2 方法20-22
• 2 結(jié)果22
• 3 討論22-24
• 第二章 FGF2 對 Saos-2 細(xì)胞礦化的影響24-31
• 1 材料與方法24-29
• 1.1 材料24-25
• 1.2 方法25-29
• 2 結(jié)果29-30
• 3 討論30-31
• 第三章 基質(zhì)小泡的提取和驗(yàn)證31-38
• 1 材料與方法31-36
• 1.1 材料31-33
• 1.2 方法33-36
• 2 結(jié)果36-37
• 3 討論37-38
• 第四章 基質(zhì)小泡功能分析38-45
• 1 材料與方法38-42
• 1.1 材料38-40
• 1.2 方法40-42
• 2 結(jié)果42-43
• 3 討論43-45
• 參考文獻(xiàn)45-52
• 附錄52-54
• 綜述54-73
• Reference67-73
• 在校期間發(fā)表論文73-74
• 致謝74

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本文編號：440269