本文關(guān)鍵詞：弓形蟲GRA6基因的重組、表達(dá)及鑒定，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的構(gòu)建弓形蟲致密顆粒蛋白6(GRA6)基因重組質(zhì)粒并在大腸埃希菌中進(jìn)行表達(dá)。方法根據(jù)弓形蟲GRA6基因序列設(shè)計(jì)并合成引物,用PCR方法從弓形蟲基因組DNA中擴(kuò)增GRA6基因片段,擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1.0%瓊脂糖凝膠電泳鑒定后,再克隆到pGEX-4T載體中,重組質(zhì)粒經(jīng)限制性內(nèi)切酶BamHI、EcoRI酶切鑒定并測序后,將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸埃希菌BL21后并用IPTG誘導(dǎo)表達(dá),產(chǎn)物經(jīng)SDS-PAGE分析并純化,以Western blot分析其反應(yīng)原性。結(jié)果以弓形蟲DNA為模板擴(kuò)增GRA6基因片段,經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳鑒定擴(kuò)增產(chǎn)物大小為693bp,與理論值相符;重組質(zhì)粒經(jīng)酶切鑒定構(gòu)建成功,測序結(jié)果與GenBank上弓形蟲RH株GRA6序列AF239283.1同源性100%;重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化菌經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后表達(dá)的GRA6融合蛋白分子質(zhì)量單位約為52ku,與GST-GRA6的理論分子質(zhì)量相符,該融合蛋白可被GST標(biāo)簽抗體識(shí)別。結(jié)論成功重組了弓形蟲GRA6基因,表達(dá)蛋白具有反應(yīng)原性,為弓形蟲診斷抗原試劑盒的制備奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院山東省寄生蟲病防治研究所;濟(jì)南大學(xué)山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 弓形蟲 致密顆粒蛋白 基因克隆 融合蛋白 蛋白純化
【基金】：山東省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.2009C03083) 山東省醫(yī)藥衛(wèi)生科技計(jì)劃項(xiàng)目(No.2011HW049,2014WS0330)
【分類號(hào)】：R382.5
【正文快照】： 弓形蟲是一種寄生于有核細(xì)胞內(nèi)的原蟲,它在速殖子期侵入宿主細(xì)胞并不斷增殖,從而溶解破壞細(xì)胞,導(dǎo)致嚴(yán)重的人獸共患病-弓形蟲病,對(duì)于人類健康和畜牧業(yè)的發(fā)展造成了巨大的威脅[1]。弓形蟲病臨床癥狀復(fù)雜多樣,給準(zhǔn)確、快速診斷帶來極大不便,因此尋找一種能快速檢測弓形蟲感染的方

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【相似文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：弓形蟲GRA6基因的重組、表達(dá)及鑒定，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：430726