本文關(guān)鍵詞：伏立諾他對樹突狀細(xì)胞和實驗性自身免疫性腦脊髓炎的調(diào)節(jié)作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：多發(fā)性硬化癥(Multiple Sclerosis, MS)是一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)慢性炎癥性脫髓鞘性疾病,目前臨床上沒有滿意的治療藥物。因此,探索新藥物對于改善MS的治療非常重要。實驗性自身免疫性腦脊髓炎(Experimental Autoimmune Encephalomyelitis, EAE)是MS的動物模型,也是自身免疫炎癥反應(yīng)基礎(chǔ)研究的重要模型。MS和EAE均被證明是CD4陽性T細(xì)胞,主要是TH1和TH17細(xì)胞,介導(dǎo)的自身免疫炎癥性神經(jīng)退行性疾病。樹突狀細(xì)胞(Dendritic Cell, DC)是一種專職的抗原提呈細(xì)胞,在免疫反應(yīng)的起始中起著重要作用。未成熟樹突狀細(xì)胞(immature Dendritic Cell, iDC)的主要功能是抗原提呈,而成熟樹突狀細(xì)胞(mature Dendritic Cell, mDC)主要功能是誘導(dǎo)T細(xì)胞活化。并且DC可根據(jù)不同的信號刺激而對應(yīng)的分泌TH1、TH2、TH17以及Treg細(xì)胞分化相關(guān)的細(xì)胞因子,而這些不同亞型T細(xì)胞極化因子可以誘導(dǎo)初始T細(xì)胞向相應(yīng)的T細(xì)胞亞型極化,進(jìn)而與不同類型疾病相對應(yīng)T細(xì)胞亞型行駛不同的生理功能。基于DC在免疫系統(tǒng)中的重要作用,它可能成為控制自身免疫和炎癥性疾病的潛在治療靶點(diǎn)。伏立諾他(Vorinostat)是一種組蛋白去乙�；�(Histone Deacetylase, HDAC)抑制劑,已被批準(zhǔn)用于臨床治療皮膚T細(xì)胞淋巴瘤,但是伏立諾他對于自身免疫病如MS和其動物模型EAE的研究并不完善,這也是本研究的重點(diǎn)內(nèi)容。 研究目的：體外實驗探究組蛋白去乙酰化酶抑制劑伏立諾他對人CD14陽性單核細(xì)胞來源的DC的分化、成熟、抗原攝取和DC介導(dǎo)的T細(xì)胞增殖的影響,以及對炎癥相關(guān)因子分泌的調(diào)節(jié)作用；體內(nèi)實驗進(jìn)一步探究了伏立諾他對EAE作用和細(xì)胞機(jī)制。本研究為MS等炎癥性疾病探索新的治療途徑。實驗內(nèi)容和方法：體外研究用磁珠分離法從人外周血單核細(xì)胞中分離出CD14陽性單核細(xì)胞,然后誘導(dǎo)向DC分化和成熟,用流式細(xì)胞術(shù)檢測表面標(biāo)記。用流式細(xì)胞術(shù)檢測FITC-dextran攝取的方法檢測iDC抗原攝取能力。用混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)方法檢測mDC刺激T細(xì)胞增殖的能力。并用實時定量PCR檢測細(xì)胞因子的分泌情況。體內(nèi)研究應(yīng)用小鼠注射髓鞘少突膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白(Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein, MOG)誘導(dǎo)EAE,同時應(yīng)用伏立諾他灌胃治療,每天觀察小鼠并做臨床評分。脊髓切片用HE染色、Luxol fast blue染色和免疫組化染色。流式細(xì)胞術(shù)檢測EAE中伏立諾他對脾臟中不同T細(xì)胞亞型的影響,以及對DC的影響。實驗結(jié)果：體外實驗流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果表明伏立諾他降低iDC和mDC表面標(biāo)記CD80、CD83、CD86和HLA-DR的表達(dá),即抑制DC分化和成熟。并且,伏立諾他降低了iDC抗原攝取能力和mDC介導(dǎo)的T細(xì)胞增殖,抑制了DC中TNF-α、IFN-γ、IL-6、IL-12p35和IL-23p40的mRNA表達(dá)水平。體內(nèi)實驗顯示伏立諾他治療可降低EAE的發(fā)病率,推遲發(fā)病時間,降低了臨床評分平均分、總分和最高分。HE和Luxol fast blue染色結(jié)果顯示,伏立諾他緩解小鼠脊髓中炎癥細(xì)胞浸潤和脫髓鞘情況。脊髓石蠟切片免疫組化結(jié)果顯示伏立諾他抑制T細(xì)胞和巨噬細(xì)胞浸潤。而且,伏立諾他抑制EAE中TH1和TH17細(xì)胞,降低了DC表面標(biāo)記表達(dá)。體內(nèi)實驗結(jié)果與體外伏立諾他抑制人CD14陽性單核細(xì)胞來源的DC的實驗結(jié)果一致。 總之,伏立諾他可抑制人CD14陽性單核細(xì)胞來源的DC分化、成熟和抗原攝取及抗原提呈功能。伏立諾他可抑制中樞神經(jīng)系統(tǒng)的自身免疫炎癥反應(yīng),體內(nèi)抑制DC、病理性TH1和TH17細(xì)胞,緩解EAE的發(fā)生和發(fā)展。伏立諾他對EAE具有治療作用。本論文為應(yīng)用HDAC抑制劑伏立諾他治療MS等炎癥相關(guān)疾病奠定了理論基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：組蛋白去乙酰化酶抑制劑 伏立諾他 多發(fā)性硬化癥 實驗性自身免疫性腦脊髓炎 樹突狀細(xì)胞 T細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R392;R744.51
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-8
• 目錄8-10
• ~.略語/符號說明10-11
• 前言11-18
• 研究現(xiàn)狀、成果11-17
• 研究目的、方法17-18
• 1 研究對象和方法18-33
• 1.1 主要實驗材料、試劑與儀器設(shè)備18-20
• 1.2 試劑配制20-21
• 1.3 實驗方法21-33
• 1.3.1 人CD14陽性細(xì)胞的分離和純化21-22
• 1.3.2 DC分化和成熟22-23
• 1.3.3 DC表面標(biāo)記表達(dá)分析23-24
• 1.3.4 iDC內(nèi)吞作用分析24
• 1.3.5 混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)分析24-25
• 1.3.6 實時定量PCR25-26
• 1.3.7 EAE誘導(dǎo)、臨床評分和治療作用分析26-28
• 1.3.8 脊髓組織的石蠟切片制備及組化染色28-29
• 1.3.9 胞內(nèi)細(xì)胞因子染色29-30
• 1.3.10 脾臟內(nèi)DC比例的檢測30-31
• 1.3.11 小鼠DC2.4細(xì)胞實驗研究31-32
• 1.3.12 統(tǒng)計學(xué)分析32-33
• 2 結(jié)果33-49
• 2.1 伏立諾他抑制人單核細(xì)胞向DC分化33-34
• 2.2 伏立諾他抑制iDC的內(nèi)吞功能34-35
• 2.3 伏立諾他抑制DC成熟35-37
• 2.4 伏立諾他抑制mDC誘導(dǎo)同種異體T細(xì)胞增殖37
• 2.5 伏立諾他抑制DC表達(dá)TH1和TH17細(xì)胞極化細(xì)胞因子37-39
• 2.6 伏立諾他緩解EAE臨床發(fā)生和發(fā)展39-42
• 2.7 伏立諾他改善EAE鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥和脫髓鞘程度42-44
• 2.8 伏立諾他減少EAE鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)T細(xì)胞和巨噬細(xì)胞浸潤44-45
• 2.9 伏立諾他減少脊髓TH1和TH17細(xì)胞浸潤45-46
• 2.10 伏立諾他體內(nèi)抑制EAE脾臟中DC46-48
• 2.11 伏立諾他抑制小鼠髓系DC2.4細(xì)胞功能48-49
• 3 討論49-53
• 結(jié)論53-54
• 參考文獻(xiàn)54-59
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明59-61
• 綜述61-74
• 綜述參考文獻(xiàn)69-74
• 致謝74

【相似文獻(xiàn)】

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本文編號：430517