本文關(guān)鍵詞：雞白痢沙門菌SpiC蛋白的原核表達(dá)及其應(yīng)用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的進(jìn)行雞白痢沙門菌Spi C蛋白原核表達(dá)并建立以Spi C蛋白為檢測(cè)抗原的間接ELISA。方法以雞白痢沙門菌S06004基因組DNA為模板,PCR擴(kuò)增384 bp的spi C基因。將spi C基因克隆至原核表達(dá)載體p ET30a中,構(gòu)建重組原核表達(dá)質(zhì)粒p ET30a-spi C,再轉(zhuǎn)化到表達(dá)宿主菌E.coli BL21(DE3)中,異丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)表達(dá),SDS-PAGE和Western blot分析鑒定,純化His-Spi C蛋白,建立Spi C蛋白為檢測(cè)抗原的間接ELISA并檢測(cè)臨床血清樣品。結(jié)果通過對(duì)誘導(dǎo)后重組菌裂解產(chǎn)物進(jìn)行SDS-PAGE和Western blot分析,重組菌可以表達(dá)相對(duì)分子質(zhì)量(Mr)約19 200的可溶性重組蛋白His-Spi C。重組蛋白GST-Spi C免疫無特定病原體雞,所獲得的高免血清能識(shí)別重組蛋白His-Spi C,表明體外表達(dá)的重組蛋白His-Spi C有良好的免疫反應(yīng)原性。所建立的以重組蛋白His-Spi C介導(dǎo)的間接ELISA有較好的特異性,能夠區(qū)分spi C基因缺失型疫苗候選株免疫與野生菌自然感染。結(jié)論重組蛋白His-Spi C呈可溶性表達(dá),具有良好的免疫原性,以重組蛋白His-Spi C建立的間接ELISA,可以作為區(qū)分感染和免疫動(dòng)物(DIVA)雞白痢疫苗免疫的鑒定方法。
【作者單位】： 揚(yáng)州大學(xué):江蘇省人獸共患病學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 江蘇省動(dòng)物重要疫病與人獸共患病防控協(xié)同創(chuàng)新中心;
【關(guān)鍵詞】： 雞白痢沙門菌 來杭雞 spiC基因 原核表達(dá) 間接ELISA
【基金】：863項(xiàng)目(2011AA10A212) 國(guó)家自然科學(xué)基金(31230070) 中國(guó)博士后基金(2014M551670)
【分類號(hào)】：R378
【正文快照】： 雞白痢(pullorum disease,PD)是由雞白痢沙門菌(Salmonella pullorum)引起的一種急性、全身性疾病,也是一種常見傳染病,能引起雛雞高發(fā)病率和高死亡率,是養(yǎng)雞業(yè)中危害嚴(yán)重的疾病之一,易造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失。由于該菌既能水平傳播,又能垂直傳播,這使得雞白痢沙門菌難以預(yù)防和控制

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本文編號(hào)：428626