本文關鍵詞：雞白痢沙門菌SpiC蛋白的原核表達及其應用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的進行雞白痢沙門菌Spi C蛋白原核表達并建立以Spi C蛋白為檢測抗原的間接ELISA。方法以雞白痢沙門菌S06004基因組DNA為模板,PCR擴增384 bp的spi C基因。將spi C基因克隆至原核表達載體p ET30a中,構建重組原核表達質(zhì)粒p ET30a-spi C,再轉(zhuǎn)化到表達宿主菌E.coli BL21(DE3)中,異丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導表達,SDS-PAGE和Western blot分析鑒定,純化His-Spi C蛋白,建立Spi C蛋白為檢測抗原的間接ELISA并檢測臨床血清樣品。結(jié)果通過對誘導后重組菌裂解產(chǎn)物進行SDS-PAGE和Western blot分析,重組菌可以表達相對分子質(zhì)量(Mr)約19 200的可溶性重組蛋白His-Spi C。重組蛋白GST-Spi C免疫無特定病原體雞,所獲得的高免血清能識別重組蛋白His-Spi C,表明體外表達的重組蛋白His-Spi C有良好的免疫反應原性。所建立的以重組蛋白His-Spi C介導的間接ELISA有較好的特異性,能夠區(qū)分spi C基因缺失型疫苗候選株免疫與野生菌自然感染。結(jié)論重組蛋白His-Spi C呈可溶性表達,具有良好的免疫原性,以重組蛋白His-Spi C建立的間接ELISA,可以作為區(qū)分感染和免疫動物(DIVA)雞白痢疫苗免疫的鑒定方法。
【作者單位】： 揚州大學:江蘇省人獸共患病學重點實驗室 江蘇省動物重要疫病與人獸共患病防控協(xié)同創(chuàng)新中心;
【關鍵詞】： 雞白痢沙門菌 來杭雞 spiC基因 原核表達 間接ELISA
【基金】：863項目(2011AA10A212) 國家自然科學基金(31230070) 中國博士后基金(2014M551670)
【分類號】：R378
【正文快照】： 雞白痢(pullorum disease,PD)是由雞白痢沙門菌(Salmonella pullorum)引起的一種急性、全身性疾病,也是一種常見傳染病,能引起雛雞高發(fā)病率和高死亡率,是養(yǎng)雞業(yè)中危害嚴重的疾病之一,易造成嚴重經(jīng)濟損失。由于該菌既能水平傳播,又能垂直傳播,這使得雞白痢沙門菌難以預防和控制

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 孫園園;趙鵬;劉駿;王富海;錢科;朱金連;;沙門氏菌檢測方法研究進展[J];中國畜牧獸醫(yī);2011年01期

2 張偉;季艷菊;鄒曉紅;曾惠斯;蒿子楓;;種雞白痢沙門氏菌病的流行現(xiàn)狀與綜合預防控制措施[J];廣西畜牧獸醫(yī);2012年04期

3 姚遠;張帆;郗正林;黃忠陽;匡偉;王冰心;何宗亮;曹偉;李明龍;;我國雞白痢沙門氏菌的流行情況及凈化現(xiàn)狀[J];當代畜牧;2012年10期

4 潘志明,焦新安,劉文博,高崧,倪振亞,張揚,劉學賢,張如寬,劉秀梵;雞白痢沙門氏菌耐藥性的監(jiān)測研究[J];畜牧獸醫(yī)學報;2002年04期

5 劉紅霞;代小偉;朱華;劉先菊;秦川;;檢測H5N1型高致病性禽流感病毒抗體的間接ELISA方法的初步建立[J];中國比較醫(yī)學雜志;2007年12期

6 程相朝;郁川;廖成水;趙戰(zhàn)勤;張春杰;李銀聚;吳庭才;李小康;李正;;減毒雞白痢沙門氏菌ΔcrpC79-13株的構建及其對雛雞的免疫活性[J];中國獸醫(yī)科學;2012年01期

7 潘志明,焦新安,黃金林,張小榮,孫林,劉文博,甘軍紀,高崧,張如寬,劉秀梵;雞沙門氏菌弱毒凍干苗的研制[J];中國預防獸醫(yī)學報;2001年06期

8 朱春紅;吳娟;張偉娟;陸光富;朱國強;;腸炎沙門氏菌SEFA基因表達和間接ELISA檢測方法的初步建立[J];中國預防獸醫(yī)學報;2010年01期

9 查華;石火英;吉貞穎;陸瑋;楊雪琴;;華東地區(qū)雞白痢沙門氏菌毒力基因的分子流行病學調(diào)查[J];中國預防獸醫(yī)學報;2012年12期

10 耿士忠;郭榮顯;焦新安;潘志明;;雞白痢沙門菌研究進展[J];中國家禽;2014年05期

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉素梅;;沙門氏菌對抗菌藥物的耐藥性研究[J];安徽農(nóng)業(yè)科學;2009年23期

2 朱慧楠;畢可東;劉煥奇;鄒明;;氨芐西林混懸液對雞大腸桿菌病的藥效研究[J];安徽農(nóng)業(yè)科學;2009年33期

3 李睿;劉芳萍;劉立新;曲鵬;徐倩倩;;沙門氏菌耐藥抑制劑止瀉作用與急性毒性研究[J];東北農(nóng)業(yè)大學學報;2008年08期

4 張榮武;;近幾年我國部分地區(qū)雞沙門氏菌的耐藥分析[J];山東畜牧獸醫(yī);2012年05期

5 劉雁軍;牛藝儒;;雙黃連對雞白痢沙門氏菌耐藥性消除作用的影響[J];當代畜牧;2008年04期

6 陳伯祥;;沙門菌病防治概況[J];動物醫(yī)學進展;2007年03期

7 楊曉輝;楊增岐;;陜西關中地區(qū)雞白痢現(xiàn)狀調(diào)查[J];動物醫(yī)學進展;2008年09期

8 楊春明;徐海;;雞白痢沙門菌病的診治[J];動物醫(yī)學進展;2009年10期

9 羅玲;艾地云;楊峻;王紅琳;溫國元;羅青平;張蓉蓉;邵華斌;;鵪鶉沙門菌的分離鑒定[J];動物醫(yī)學進展;2010年03期

10 李衛(wèi);白家媛;蔡雙雙;;雞大腸埃希菌與沙門菌混合感染的病原分離鑒定及藥敏試驗[J];動物醫(yī)學進展;2011年01期

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前8條

1 徐耀輝;我國部分地區(qū)雞群沙門氏菌感染的血清流行病學調(diào)查和抑制性差減雜交法篩選雞白痢沙門氏菌特異性核酸序列[D];揚州大學;2005年

2 李乾學;大腸桿菌超突變子產(chǎn)生的分子基礎及其在耐藥性發(fā)生和轉(zhuǎn)移中的作用[D];吉林大學;2007年

3 王曉泉;不同來源多重耐藥性沙門氏菌分離株的耐藥機制和脈沖場凝膠電泳分析[D];揚州大學;2007年

4 席美麗;食源性革蘭氏陰性腸道病原菌PFGE分型和大腸桿菌耐藥性研究[D];西北農(nóng)林科技大學;2009年

5 朱春紅;腸炎沙門氏菌SEF14菌毛功能探索[D];揚州大學;2010年

6 孫亞偉;多重耐藥泵及其調(diào)控蛋白在鼠傷寒沙門氏菌對氟喹諾酮類耐藥中的作用[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2011年

7 肖西志;食品和飼料中沙門氏菌及動物皮毛中炭疽桿菌快速鑒定方法的研究[D];西北農(nóng)林科技大學;2013年

8 張秀芹;飼料中沙門菌快速檢測方法的建立及其分離株的耐藥性與致病性分析[D];吉林大學;2014年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 沈亞安;多西環(huán)素間接競爭ELISA檢測方法的建立[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2010年

2 葉宇鑫;沙門氏菌分子生物學快速檢測方法研究[D];華南理工大學;2011年

3 馬馳;不同中藥對3種細菌耐藥質(zhì)粒的消除作用研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學;2011年

4 張小榮;以減毒沙門氏菌運送的H5亞型禽流感病毒DNA疫苗及其免疫生物學特性[D];揚州大學;2003年

5 李灶平;食品中大腸埃希氏、沙門氏菌耐藥性與整合子的關系研究[D];四川大學;2004年

6 孫裕光;雞白痢沙門氏桿菌的分離鑒定及滅活菌苗的研制[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2005年

7 任春玲;中藥添加劑對有機肉雞健康與土壤環(huán)境的影響[D];中國農(nóng)業(yè)大學;2005年

8 鐘傳德;我國部分省市雛鴨致病性沙門氏菌分離鑒定、耐藥譜調(diào)查及攜帶質(zhì)粒特性的初步研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學;2006年

9 陳伯祥;含硒型牛副傷寒活疫苗應用研究[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學;2005年

10 壽軍;重慶豬源大腸桿菌多重耐藥性與Ⅰ型整合子的相關性研究[D];西南大學;2007年

【二級參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陳毅歆;羅海峰;葛勝祥;郭永利;彭耿;王嘉;陳鴻霖;張軍;管軼;夏寧邵;;高致病性H5亞型禽流行性感冒病毒血凝素單克隆抗體的制備與初步應用[J];病毒學報;2005年06期

2 吳馮波,王衍真,韓世泉,賀佑豐,侯惠仁;免疫分析固相技術(Ⅱ)[J];標記免疫分析與臨床;1999年01期

3 趙宏坤;陳金龍;王春民;李棟剛;;種雞垂直傳播細菌病的發(fā)生與防控[J];山東畜牧獸醫(yī);2008年12期

4 戴國俊，張如寬，徐未平，王志躍;雞白痢對種雞及其后代生產(chǎn)性能的影響[J];當代畜牧;1994年02期

5 涂玉蓉;陳建紅;任濤;張濟培;司興奎;牛森;;雞白痢沙門菌和雞傷寒沙門菌PCR-RFLP鑒別[J];動物醫(yī)學進展;2011年06期

6 雷風;應用Dot—ELISA法檢測魚粉中的沙門氏菌[J];飼料工業(yè);2004年08期

7 孔繁德;陳瓊;彭海濱;陸承平;;斑點免疫金滲濾法檢測沙門菌的研究與應用[J];中國國境衛(wèi)生檢疫雜志;2006年04期

8 周廷宣;;后備種雞血清中沙門氏菌病抗體的檢測[J];中國畜牧獸醫(yī);2007年09期

9 吳萍萍;潘玲;毛火云;黃成斌;;種雞雞白痢血清學調(diào)查[J];中國畜牧獸醫(yī);2008年12期

10 許會會;雷連成;謝芳;杜濤峰;韓文瑜;;沙門氏菌PCR檢測方法的建立[J];中國畜牧獸醫(yī);2010年04期

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張勝軍,劉娜,駱稽酉,王柏青,吳鐵林;九九一禽畜寶防治雛雞雞白痢效果觀察[J];中國微生態(tài)學雜志;2000年05期

2 陳松彪;李靜;尚珂;郁川;張春杰;程相朝;李銀聚;趙戰(zhàn)勤;;雞白痢沙門菌C79-13ΔcrpΔasd平衡致死系統(tǒng)的構建及其生物學特性的研究[J];中國免疫學雜志;2014年08期

3 ;[J];;年期

4 ;[J];;年期

5 ;[J];;年期

6 ;[J];;年期

7 ;[J];;年期

8 ;[J];;年期

9 ;[J];;年期

10 ;[J];;年期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 寧承東;吳建歡;;三黃種雞核心群雞白痢控制的主要措施[A];第二屆中國黃羽肉雞行業(yè)發(fā)展大會會刊[C];2010年

2 涂玉蓉;陳建紅;張濟培;牛森;任濤;;68株雞白痢沙門菌藥物敏感性測定與分析[A];中國畜牧獸醫(yī)學會禽病學分會第十五次學術研討會論文集[C];2010年

3 陳建紅;張濟培;司興奎;歐耀棠;張素濃;黃可恒;;雞白痢沙門菌不同成分誘導小雞免疫應答的探討[A];中國畜牧獸醫(yī)學會禽病學分會第十五次學術研討會論文集[C];2010年

4 陳建紅;張濟培;司興奎;簡志光;張秋姜;黃可恒;;小雞雞白痢抗體水平與抗感染關系的研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學會禽病學分會第十五次學術研討會論文集[C];2010年

5 寧家寶;牛森;張濟培;勞雪芬;王彩玲;;68株雞白痢沙門菌的最小抑菌濃度的測定[A];中國畜牧獸醫(yī)學會禽病學分會第十六次學術研討會論文集[C];2012年

6 龔建森;劉學賢;徐步;王鑫;俞燕;劉加圣;;雞白痢沙門菌凍干菌種的長期保存試驗[A];中國畜牧獸醫(yī)學會家禽學分會第九次代表會議暨第十六次全國家禽學術討論會論文集[C];2013年

7 王淑云;;邢臺市種雞場雞白痢的檢測與凈化措施[A];2009新華杯迎國慶60周年畜牧獸醫(yī)科技論文集[C];2009年

8 牛森;陳建紅;張濟培;涂玉蓉;黃可恒;張秋姜;;種雞場雞白痢血清學調(diào)查[A];中國畜牧獸醫(yī)學會禽病學分會第十五次學術研討會論文集[C];2010年

9 曹春梅;焦新安;潘志明;黃金林;張曉明;劉秀梵;;斑點免疫金滲濾法快速檢測雞白痢/雞傷寒沙門氏菌抗體的應用研究[A];人畜共患傳染病防治研究新成果匯編[C];2004年

10 牛森;陳建紅;盧玉葵;羅滿林;;雞白痢沙門菌感染規(guī)律研究系列報告之二——雞白痢沙門菌4種感染途徑的致病性[A];中國畜牧獸醫(yī)學會禽病學分會第十六次學術研討會論文集[C];2012年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 俞宗仁;乳酸防治雞白痢[N];河南科技報;2005年

2 沈慧;種雞場如何預防雞白痢[N];農(nóng)民日報;2005年

3 陳增君;乳酸菌液治雞白痢[N];山西科技報;2001年

4 王凱;洋蔥治雞白痢[N];河南科技報;2000年

5 山西恒豐強動物藥業(yè)有限公司技術支持部 王華聽;成雞白痢莫大意[N];中國畜牧獸醫(yī)報;2006年

6 宜陽縣畜牧局 張俊芳 李江波 方社挽;雞白痢的防控措施[N];河南科技報;2008年

7 江蘇省農(nóng)科院獸醫(yī)所 劉宇卓;雞白痢[N];江蘇農(nóng)業(yè)科技報;2004年

8 任丘市畜牧水產(chǎn)局 李瑞典 劉艷芬;注意防治雞白痢[N];河北科技報;2009年

9 李金統(tǒng);雞白痢、傷寒、副傷寒如何診治[N];中國畜牧報;2002年

10 呂紀增;洋蔥巧治雞白痢[N];農(nóng)民日報;2006年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 方麗君;選擇性捕獲雞白痢沙門菌在巨噬細胞內(nèi)的轉(zhuǎn)錄序列[D];揚州大學;2010年

2 胡春梅;雞白痢雞傷寒沙門氏菌酶免疫傳感器的研究[D];浙江工商大學;2013年

3 李楠;雞源蛭弧菌的分離、生物學特性研究及對雞白痢的治療試驗[D];四川農(nóng)業(yè)大學;2005年

4 楊林;沙門菌多重PCR檢測方法的建立及雞白痢沙門菌aroA缺失株的構建[D];揚州大學;2014年

5 劉男男;雞白痢沙門菌S06004ΔspiC突變株的構建及其免疫生物學特性初步研究[D];揚州大學;2012年

6 徐家芳;三種雞白痢—雞傷寒多價染色抗原的比較和雞場沙門氏菌的分離與鑒定[D];廣西大學;2013年

  本文關鍵詞：雞白痢沙門菌SpiC蛋白的原核表達及其應用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：428626