本文關鍵詞：表達鼠源IL-10嗜酸乳桿菌的構建及其對大鼠IBD的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：益生菌源于希臘語“對生命有益的細菌”，通常定植于人體腸道、生殖系統(tǒng)中，通過改善宿主的微生態(tài)平衡從而達到一定的益生效果。研究發(fā)現(xiàn)益生菌緊密地與腸道粘膜上皮細胞結合，通過其本身的分泌物能夠提高人體的內(nèi)源性防御能力，同時通過與有害菌競爭腸上皮細胞來阻止有害菌的入侵和定植。當腸道中定植的嗜酸乳桿菌的數(shù)量達到一定水平時，通過其分泌的乳酸能改善和調(diào)節(jié)腸道的微生物菌群平衡，從而增強機體的抗菌能力，減少癌癥的發(fā)生率；根據(jù)其在生長代謝過程中所產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物以及與環(huán)境中其他菌群的競爭作用，對大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌以及炭疽桿菌等致病菌具有較好的拮抗作用。IL-10主要由Th2細胞、巨噬細胞和活化的B細胞產(chǎn)生，不僅具有較強的抗炎能力，它能抑制IFN-γ以及促炎因子的產(chǎn)生和釋放，同時還能誘導外周耐受和免疫抑制。 炎癥性腸�。↖BD）呈世界性分布，同時也嚴重危害著我國人民的健康，且近年來其發(fā)病率呈逐年上升趨勢。大多數(shù)研究認為IBD是由多種因素相互作用所致的一種自身免疫性疾病，主要包括免疫、環(huán)境以及遺傳等因素。所有致病因素中免疫在IBD的發(fā)生發(fā)展過程中起著極其重要的作用。大量研究資料表明：其發(fā)病過程是包括各種細胞因子在內(nèi)的自身免疫異常，最終導致組織損傷。Th1/Th2免疫應答失衡是引起IBD發(fā)病的主要原因之一，致炎因子與抗炎因子失衡在IBD發(fā)病中起著重要的作用。IFN-γ是主要由Th1細胞產(chǎn)生的致炎細胞因子，具有廣泛的免疫調(diào)節(jié)作用，在細胞因子網(wǎng)絡調(diào)節(jié)中起重要作用。 本研究為構建表達鼠源IL-10的重組嗜酸乳桿菌，采用PCR技術克隆嗜酸乳桿菌信號肽序列與大鼠IL-10基因序列，連接后克隆到乳酸菌表達型穿梭載體pMG36e的序列中，得到重組質(zhì)粒pMG36e-sp-IL10，電穿孔轉化至嗜酸乳桿菌LA-5。挑選轉化后的耐藥菌落在含紅霉素的MRS培養(yǎng)基中培養(yǎng)，抽提菌落DNA，進行PCR并測序，鑒定大鼠IL-10基因是否整合到嗜酸乳桿菌LA-5的基因組中，SDS-PAGE電泳鑒定及Western blot檢測重組蛋白表達情況。結果證實，大鼠IL-10基因整合到嗜酸乳桿菌的基因組中；重組嗜酸乳桿菌產(chǎn)生的目的蛋白部分分泌到培養(yǎng)上清。說明，大鼠IL-10在重組嗜酸乳桿菌LA-5中得以表達并分泌。 本研究又在成功建立大鼠炎癥性腸�。↖BD）模型之后，，將重組嗜酸乳桿菌應用于大鼠炎癥性腸病模型，應用熒光定量PCR檢測相關因子IL-10、IFN-γ的濃度變化。為進一步探討IBD的發(fā)生發(fā)展，以及它與益生菌和IL-10之間的關系提供了實驗依據(jù)，為IBD的治療提供新思路。
【關鍵詞】：大鼠 嗜酸乳桿菌 IL-10 IBD
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：S856;R371
【目錄】：

• 前言4-6
• 中文摘要6-8
• ABSTRACT8-10
• 英文縮略詞表10-13
• 引言13-15
• 第一篇 文獻綜述15-30
• 第1章 嗜酸乳桿菌的研究進展15-20
• 1.1 嗜酸乳桿菌的生物學特征15
• 1.2 嗜酸乳桿菌的分離和鑒定15-16
• 1.3 嗜酸乳桿菌的生理功能16-18
• 1.4 嗜酸乳桿菌的應用18-20
• 第2章 IL-10 的研究進展20-27
• 2.1 IL-10 的生物學特點20-23
• 2.2 IL-10 的生理功能23-26
• 2.3 展望26-27
• 第3章 益生菌、IL-10 與 IBD 關系27-30
• 3.1 IBD27-28
• 3.2 益生菌、IL-10 與 IBD28-29
• 3.3 展望29-30
• 第二篇 研究內(nèi)容30-66
• 第1章 表達鼠源 IL-10 嗜酸乳桿菌克隆載體的構建及鑒定30-46
• 1.1 材料與方法30-38
• 1.2 結果38-41
• 1.3 討論41-45
• 1.4 小結45-46
• 第2章 重組質(zhì)粒 pMG36e-sp-IL10 在嗜酸乳桿菌LA-5 中的表達檢測46-52
• 2.1 材料與方法46-49
• 2.2 結果49-50
• 2.2.1 含紅霉素的 MRS 固體培養(yǎng)基中嗜酸乳桿菌 LA-5 的生長情況49
• 2.2.2 鑒定49
• 2.2.3 SDS-PAGE 電泳鑒定及 Western blot 檢測重組蛋白表達情況49-50
• 2.3 討論50-51
• 2.4 小結51-52
• 第3章 大鼠炎癥性腸病動物模型的建立52-56
• 3.1 實驗方法52-53
• 3.2 結果53-54
• 3.3 討論54
• 3.4 小結54-56
• 第4章 重組嗜酸乳桿菌對大鼠 IBD 的影響56-66
• 4.1 材料與方法56-58
• 4.2 結果58-63
• 4.3 討論63-64
• 4.4 小結64-66
• 結論66-67
• 參考文獻67-74
• 導師簡介74-76
• 作者簡介及科研成果76-77
• 致謝77

【參考文獻】

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  本文關鍵詞：表達鼠源IL-10嗜酸乳桿菌的構建及其對大鼠IBD的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：426370