本文關(guān)鍵詞：D-半乳糖致小鼠衰老模型劑量和給藥方式探討，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的觀察不同的注射方式和D-半乳糖給藥劑量對(duì)小鼠的影響,探討構(gòu)建D-gal氧化損傷衰老小鼠模型的方法。 方法SPF級(jí)雄性昆明小鼠200只,體重22±4g,適應(yīng)性喂養(yǎng)9天后按體重隨機(jī)分為10組,每組20只。其中5組經(jīng)頸背部皮下注射(s.c.)給予D-半乳糖(D-gal),分別為100、125、150、200mg/(kg·d)四個(gè)劑量組和生理鹽水(N.S.)對(duì)照組；另外5組經(jīng)腹腔注射(i.p.)給予上述四個(gè)劑量的D-gal和N.S.。各組小鼠按相應(yīng)劑量連續(xù)注射60天,以0.1ml/10g體重(Body weigh, BW)容積給藥,每天稱重一次,按給藥前體重調(diào)整給藥容積。所有小鼠每天給予常規(guī)飼料,自由飲水、攝食。稱取末次體重、采血后處死動(dòng)物,取材進(jìn)行生化、常規(guī)病理檢測(cè),觀察體重、胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、還原型谷胱甘肽(GSH)、單胺氧化酶(MAO)、過氧化氫酶(CAT)、脂褐素(LP)變化,同時(shí)光學(xué)顯微鏡觀察肝、腦組織形態(tài)學(xué)改變。 結(jié)果 (1) s.c.D-gal組終末體重、胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)均小于其對(duì)照組,其中200mg/(kg·d)劑量組胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)分別與其對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；i.p.D-gal組體重、胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)均小于其對(duì)照組,其中150和200mg/(kg·d)劑量組體重與對(duì)照組比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),200mg/(kg·d)劑量組脾臟指數(shù)與其對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 (2) s.c.D-gal組血清SOD活性均低于其對(duì)照組,MDA含量均高于其對(duì)照組,其中200mg/(kg·d)劑量組SOD活性、MDA含量分別與其對(duì)照組比較差異均有有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；i.p.D-gal組血清SOD活性低于其對(duì)照組,MDA含量均高于其對(duì)照組,其中200mg/(kg·d)劑量組SOD活性、MDA含量分別與其對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；且150和200mg/(kg·d)劑量下,s.c.與i.p.組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 (3) s.c.D-gal組肝組織MDA含量均高于其對(duì)照組,GSH含量、SOD活性均低于其對(duì)照組,組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義; i.p.D-gal組肝組織MDA含量均高于其對(duì)照組,GSH含量、SOD活性均低于其對(duì)照組,組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 (4) s.c.D-gal組腦組織LP含量、MAO活性均高于其對(duì)照組,CAT活性均低于其對(duì)照組,其中200mg/(kg·d)劑量組CAT活性分別與100mg/(kg·d)劑量組、對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),200mg/(kg·d)劑量組LP含量分別與100、125、150mg/(kg·d),對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；i.p.D-gal組腦組織LP含量、MAO活性均高于其對(duì)照組,CAT活性均低于其對(duì)照組,其中200mg/(kg·d)劑量組CAT活性顯著升高(P0.05),200mg/(kg·d)劑量組LP含量與100mg/(kg·d)、對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；且100mg/(kg·d)劑量下s.c.與i.p.組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 (5)肝組織形態(tài)學(xué)變化：與其對(duì)照組相比,100mg/(kg·d)D-gal組均可見小鼠肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂,肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞數(shù)目未見明顯減少,肝細(xì)胞體積增大,輕微的水樣變性和脂肪變性,匯管區(qū)纖維組織增生,膽管上皮輕度增生。上述形態(tài)學(xué)改變隨D-gal濃度的遞增而加重,200mg/(kg·d)可見明細(xì)水樣變性,有的呈氣球樣變。同一劑量下s.c.組肝形態(tài)學(xué)改變略輕于i.p.組。 (6)腦組織形態(tài)學(xué)變化：s.c.、i.p.組分別與其對(duì)照組相比,海馬區(qū)出現(xiàn)不同程度的神經(jīng)元缺失、排列疏松、神經(jīng)元腫脹變性、核固縮現(xiàn)象。同一劑量下D-gal i.p.組海馬CA1區(qū)上述形態(tài)學(xué)改變要比D-gal s.c.組明顯。特別是150、200mg/(kg·d)i.p.劑量組小鼠腦海馬組織CA1區(qū)形態(tài)學(xué)改變較對(duì)應(yīng)s.c.組明顯,核固縮嚴(yán)重。 結(jié)論 本實(shí)驗(yàn)條件下,根據(jù)以上結(jié)果,初步結(jié)論如下： 1.150-200mg/kg D-gal可能較適合建立小鼠衰老模型。 2.i.p.比s.c.較容易建立衰老模型。 3.100-200mg/kg D-gal誘導(dǎo)小鼠海馬損傷可能會(huì)比小于100mg/kg更嚴(yán)重。
【關(guān)鍵詞】：皮下注射 腹腔注射 D-半乳糖 小鼠 衰老模型
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R-332
【目錄】：

• 主要英文縮略詞5-6
• 摘要6-9
• ABSTRACT9-13
• 前言13-15
• 1 材料與方法15-25
• 1.1 主要試劑與儀15-16
• 1.1.1 主要試劑15
• 1.1.2 主要儀器15-16
• 1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及飼養(yǎng)條件16-17
• 1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物處理17-19
• 1.3.1 動(dòng)物分組、建模17-18
• 1.3.1.1 D-gal溶液的配制17
• 1.3.1.2 實(shí)驗(yàn)分組和設(shè)計(jì)17-18
• 1.3.2 樣本采集與處理18-19
• 1.3.2.1 肝腦病理切片制作18
• 1.3.2.2 生化指標(biāo)測(cè)定取材18-19
• 1.4 指標(biāo)測(cè)定19-25
• 1.4.1 體重測(cè)定19
• 1.4.2 胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)測(cè)定19
• 1.4.3 血清MDA含量、SOD活性測(cè)定19-20
• 1.4.3.1 血清的制備19
• 1.4.3.2 血清MDA含量測(cè)定19
• 1.4.3.3 血清SOD活性測(cè)定19
• 1.4.3.4 結(jié)果表示19-20
• 1.4.4 肝總蛋白、MDA、GSH含量和SOD活性測(cè)定20-21
• 1.4.4.1 肝勻漿液的制備20
• 1.4.4.2 肝上清液的制備20
• 1.4.4.3 肝總蛋白含量測(cè)定20
• 1.4.4.4 肝MDA含量測(cè)定20
• 1.4.4.5 肝GSH含量測(cè)定20
• 1.4.4.6 肝SOD活性測(cè)定20-21
• 1.4.4.7 結(jié)果表示21
• 1.4.5 腦總蛋白、LP含量和CAT、MAO活性測(cè)定21-23
• 1.4.5.1 腦勻漿液的制備21
• 1.4.5.2 腦上清液的制備21
• 1.4.5.3 腦水相液的制備21
• 1.4.5.4 硫酸奎寧熒光標(biāo)準(zhǔn)液的配制21
• 1.4.5.5 腦總蛋白含量測(cè)定21-22
• 1.4.5.6 LP含量測(cè)定22
• 1.4.5.7 腦CAT活性測(cè)定22-23
• 1.4.5.8 腦MAO活性測(cè)定23
• 1.4.5.9 結(jié)果表示23
• 1.4.6 肝、腦形態(tài)學(xué)改變23-25
• 1.4.6.1 主要試劑的配制23
• 1.4.6.2 肝腦病理切片的制作過程23-25
• 2 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理25
• 3 結(jié)果25-39
• 3.1 皮下和腹腔注射D-gal衰老模型小鼠生長(zhǎng)發(fā)育分析25-29
• 3.1.1 小鼠一般表現(xiàn)25
• 3.1.2 小鼠體重增長(zhǎng)情況25-28
• 3.1.2.1 s.c.D-gal對(duì)小鼠體重的影響25-26
• 3.1.2.2 i.p.D-gal對(duì)小鼠體重的影響26-27
• 3.1.2.3 實(shí)驗(yàn)終末,同D-gal劑量下s.c.和i.p.對(duì)小鼠體重的影響27-28
• 3.1.3 D-gal劑量和注射方式對(duì)小鼠胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)的影響28-29
• 3.2 皮下和腹腔注射D-半乳糖衰老模型小鼠某些生化指標(biāo)分析29-36
• 3.2.1 D-gal劑量和注射方式對(duì)MDA含量的影響29-30
• 3.2.2 D-gal劑量和注射方式對(duì)SOD活性的影響30-32
• 3.2.3 D-gal劑量和注射方式對(duì)小鼠肝GSH含量的影響32-33
• 3.2.4 D-gal劑量和注射方式對(duì)小鼠腦LP含量的影響33-34
• 3.2.5 D-gal劑量和注射方式對(duì)小鼠腦組織CAT活性的影響34-35
• 3.2.6 D-gal劑量和注射方式對(duì)小鼠腦組織MAO活性的影響35-36
• 3.3 D-半乳糖衰老小鼠模型肝腦形態(tài)學(xué)改變描述性分析36-39
• 4 討論39-48
• 4.1 各組小鼠體重的觀察39-40
• 4.2 各組小鼠胸腺、脾臟指數(shù)的觀察40
• 4.3 各組小鼠氧化損傷、抗氧化能力的觀察40-45
• 4.4 形態(tài)學(xué)改變的觀察45-48
• 5 結(jié)論48-49
• 參考文獻(xiàn)49-56
• 附錄56-58
• 文獻(xiàn)綜述58-76
• 參考文獻(xiàn)69-76
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄76-77
• 致謝77

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