本文關(guān)鍵詞：一種簡便的皮層神經(jīng)元原代培養(yǎng)方法的建立及其培養(yǎng)結(jié)果分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的建立一種簡便的皮層神經(jīng)元原代培養(yǎng)方法,并鑒定其培養(yǎng)效果。方法取出生24 h內(nèi)的SD大鼠大腦皮層組織,采用胰酶消化法獲取神經(jīng)元細(xì)胞懸液,用10%FBS+DMEM高糖培養(yǎng)基接種在經(jīng)多聚賴氨酸包被的培養(yǎng)板中,4 h后全量換用Neurobasal+2%B27+0.5 mmol/L谷氨酰胺培養(yǎng)液。培養(yǎng)后采用倒置相差顯微鏡觀察神經(jīng)元形態(tài)變化,連續(xù)觀察8天。神經(jīng)元培養(yǎng)7~8天進(jìn)行免疫熒光染色,于激光共聚焦顯微鏡下對神經(jīng)元進(jìn)行鑒定,計(jì)算神經(jīng)元密度和純度。結(jié)果皮層神經(jīng)元接種時(shí)體積小,透亮,呈圓形,單個(gè)散在分布。接種后有少量細(xì)胞開始貼壁,2 h左右貼壁較多,少量細(xì)胞伸出短小的突起;4 h左右已基本貼壁,大量細(xì)胞伸出突起,周圍光暈明顯;培養(yǎng)3天時(shí)神經(jīng)元突起明顯伸長,相互交織,細(xì)胞透亮,立體感強(qiáng),呈圓形、橢圓形、梭形;培養(yǎng)5~6天時(shí)神經(jīng)元體積增大,突起交織成網(wǎng)狀;培養(yǎng)7~8天時(shí),神經(jīng)元細(xì)胞體飽滿,細(xì)胞質(zhì)透亮,細(xì)胞核大而明顯,細(xì)胞體周圍折光性強(qiáng),立體感好,突起交織成致密的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)。經(jīng)免疫熒光染色后鑒定,分離培養(yǎng)的是神經(jīng)元,密度1.5×106個(gè)/m L,純度90%。結(jié)論成功建立了一種操作簡便的皮層神經(jīng)元培養(yǎng)方法,該方法培養(yǎng)的神經(jīng)元純度高、密度大,可為今后的相關(guān)學(xué)科研究提供良好的細(xì)胞模型。
【作者單位】： 石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院;石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 皮層神經(jīng)元 原代培養(yǎng) Neurobasal B 細(xì)胞模型 新生大鼠
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81360185) 新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)博士基金資助項(xiàng)目(2011BB016)
【分類號】：R329.2
【正文快照】： 2石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院)神經(jīng)元具有高度分化、很少分裂的特點(diǎn),從神經(jīng)突起到成熟神經(jīng)組織分離出神經(jīng)元的過程中,神經(jīng)元會受到不同程度的損傷,因此神經(jīng)元體外原代培養(yǎng)是一項(xiàng)對實(shí)驗(yàn)要求較高、難度較大的培養(yǎng)技術(shù)。目前神經(jīng)元原代培養(yǎng)方法很多,傳統(tǒng)方法取材于胎鼠,主要是因?yàn)樘ナ笈咛?

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 楊傳豪;趙冬;劉祺;姬云翔;李令建;許暉;戴晶;何學(xué)君;蔡云鵬;王業(yè)忠;;新生大鼠皮層神經(jīng)元體外無血清原代培養(yǎng)[J];重慶醫(yī)學(xué);2014年29期

2 王瑞霞;蔣亮亮;馬國詔;付慶喜;李甲龍;閆鵬;張鏞;;左旋丁基苯酞對Aβ_(1-42)誘導(dǎo)的體外原代培養(yǎng)神經(jīng)元損傷的影響[J];山東醫(yī)藥;2011年41期

【二級參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 王圓圓;張文斌;龔曉兵;郭國慶;陳靜;辛莉;沈偉哉;原林;;大鼠海馬神經(jīng)元neurobasal無血清的原代培養(yǎng)方法[J];暨南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2008年06期

2 周明;聶菁;呂誠;胡小令;;一種大鼠海馬神經(jīng)元的原代培養(yǎng)方法[J];南昌大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2010年03期

3 張鏞;劉振芳;付慶喜;張曉;;腦缺血和NBP預(yù)處理對腦缺血沙鼠NGB和mit-Na~+,K~+-ATP酶活性的影響[J];山東醫(yī)藥;2007年01期

4 ;The active principle region of Buyang Huanwu decoction induced differentiation of bone marrow-derived mesenchymal stem cells into neural-like cells Superior effects over original formula of Buyang Huanwu decoction[J];Neural Regeneration Research;2012年04期

5 王英,車宇,苗建亭,李柱一,王者晉;新生大鼠海馬神經(jīng)元原代培養(yǎng)方法的研究[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2003年02期

6 胡丹波,李舜偉;慢性間斷性缺氧后一氧化氮和誘導(dǎo)型一氧化氮合酶的表達(dá)及維生素E和左旋丁基苯酞對其影響[J];中國神經(jīng)科學(xué)雜志;2004年02期

7 董高翔,馮亦璞;丁基苯酞對局部腦缺血再灌注大鼠腦線粒體ATPase,抗氧化酶活性和脂質(zhì)過氧化的影響[J];中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào);2002年01期

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王仕軍,范慧民,秦偉,陰正勤;大鼠視皮層神經(jīng)元電學(xué)特性的發(fā)育變化[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2003年08期

2 余爽,徐群淵;胚胎皮層神經(jīng)元的遷移及其相關(guān)分子機(jī)制[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2005年08期

3 吳小未,汪萌芽;人離體新皮層神經(jīng)元的神經(jīng)生物學(xué)特性[J];生理科學(xué)進(jìn)展;1998年01期

4 譚浩;王正國;朱佩芳;尹志勇;劉大維;張良;;鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶活性與皮層神經(jīng)元軸突生長的相關(guān)性研究[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2007年14期

5 張召峰;韓嬋娟;劉利華;;基于單個(gè)丘腦皮層神經(jīng)元的房室模型計(jì)算與優(yōu)化[J];科學(xué)技術(shù)與工程;2009年10期

6 王中峰,薛春生,肖家思,閆淑枝,萬子兵;大鼠皮層神經(jīng)元膜片鉗單通道記錄模型[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);1997年03期

7 張偉偉;周辰;齊翠;鮑朝飛;景軍展;張麗瑤;韓素娥;;白介素1β時(shí)間依賴性地抑制大鼠皮層神經(jīng)元鉀電流[J];生物物理學(xué)報(bào);2009年06期

8 劉青松，何湘平，，劉傳繢;乙酰膽堿對培養(yǎng)大鼠皮層神經(jīng)元興奮性及抑制性突觸電流的相反作用[J];生理學(xué)報(bào);1996年04期

9 余爽,徐群淵;胚胎皮層神經(jīng)元的發(fā)育及其相關(guān)分子機(jī)制[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2005年08期

10 陳郁初,段蕙芬;獼猴前額葉皮層神經(jīng)元在視覺延緩分辨活動中的放電活動[J];生理學(xué)報(bào);1983年01期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 徐穎;李兵;刁云程;;貓視皮層神經(jīng)元對長時(shí)程光流刺激的適應(yīng)特性[A];第九次全國生物物理大會學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2002年

2 楊麗娟;鄔力祥;張松江;黃柏勝;彭志宏;;Calpain抑制劑對體外模擬缺血/再灌損傷皮層神經(jīng)元的保護(hù)作用[A];湖南省首屆生理—藥理科學(xué)青年論壇論文摘要匯編[C];2009年

3 張紅;梅元武;李紅戈;;皮層神經(jīng)元缺血再灌注后內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的實(shí)驗(yàn)研究[A];中國康復(fù)醫(yī)學(xué)會第十一屆全國腦血管病康復(fù)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2008年

4 莽靖;李昕華;徐忠信;;氧糖剝奪預(yù)處理對大鼠原代培養(yǎng)皮層神經(jīng)元凋亡的影響[A];第十一屆全國神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2008年

5 林元相;徐如祥;姜曉丹;康德智;柯以銓;杜謀選;蔡穎謙;秦玲莎;;乙酰半胱氨酸及德巴金預(yù)處理對受氯化亞鐵作用的皮層神經(jīng)元膜電位及過氧化物的影響[A];中國醫(yī)師協(xié)會神經(jīng)外科醫(yī)師分會首屆全國代表大會論文匯編[C];2005年

6 侯威遠(yuǎn);李薇;伍一軍;;有機(jī)磷化合物對原代培養(yǎng)皮層神經(jīng)元毒性作用研究[A];全國生化/工業(yè)與衛(wèi)生毒理學(xué)學(xué)術(shù)會議論文集[C];2010年

7 楊芳;李積勝;楊烽;;不同濃度鋰對原代培養(yǎng)皮層神經(jīng)元的影響[A];中國微量元素科學(xué)研究會學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2004年

8 周晉;孟然;李麗敏;楊寶峰;賈建平;吉訓(xùn)明;;第四部分 神經(jīng)節(jié)苷酯對染砷人腦皮層神經(jīng)元的保護(hù)作用[A];第10屆全國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會議論文摘要匯編[C];2005年

9 莽靖;邢影;李昕華;徐忠信;;大鼠皮層神經(jīng)元和星型膠質(zhì)細(xì)胞原代培養(yǎng)及氧糖剝奪缺血模型的建立[A];第十一屆全國神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2008年

10 陸永利;孫鈿;周敏;楊紅衛(wèi);;大鼠前額葉皮層神經(jīng)元的急性分離及應(yīng)用[A];2011全國老年癡呆與衰老相關(guān)疾病學(xué)術(shù)會議第三屆山東省神經(jīng)內(nèi)科醫(yī)師（學(xué)術(shù)）論壇論文匯編[C];2011年

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 胡德榮;痛苦的記憶可“刪除”[N];健康報(bào);2005年

2 記者 姜澎 實(shí)習(xí)生 章佩鑾;小鼠輕松“刪除”痛苦記憶[N];文匯報(bào);2005年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張荻;多巴胺對大鼠體外培養(yǎng)視皮層神經(jīng)元γ-氨基丁酸激活電流作用的研究[D];中南大學(xué);2008年

2 張忠勝;大鼠皮層神經(jīng)元內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)凋亡的實(shí)驗(yàn)研究[D];華中科技大學(xué);2013年

3 李石;皮層神經(jīng)元缺氧損傷與鈉泵功能相關(guān)性研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2007年

4 秦偉;雙眼形覺剝奪影響大鼠視皮層神經(jīng)元突觸可塑性的機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2003年

5 郝瑞;正常發(fā)育大鼠視皮層神經(jīng)元特點(diǎn)及突觸輸入模式對其影響的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2010年

6 劉偉;氧化應(yīng)激抑制IGF-1神經(jīng)保護(hù)作用機(jī)制及對策的研究[D];華中科技大學(xué);2009年

7 李靈敏;Humanin對Aβ_（31-35）引起的大鼠皮層神經(jīng)元凋亡的保護(hù)作用及其機(jī)制研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2006年

8 里健;無鎂損傷和苯巴比妥干預(yù)對發(fā)育皮層神經(jīng)元GABA_AR亞單位表達(dá)的影響[D];中南大學(xué);2010年

9 李建立;神經(jīng)甾體對氯胺酮所致發(fā)育期皮層神經(jīng)元凋亡的影響及機(jī)制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2014年

10 楊麗娟;雌激素對腦缺血再灌注損傷神經(jīng)元的保護(hù)作用及機(jī)制探討[D];中南大學(xué);2012年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李婷;JIP3調(diào)節(jié)皮層神經(jīng)元放射狀遷移的研究[D];山東大學(xué);2015年

2 石煥英;S-烯丙基半胱氨酸激活Nrf2-ARE信號通路對缺血性腦卒中的保護(hù)作用研究[D];山東大學(xué);2015年

3 孫立庚;電磁輻射對原代皮層神經(jīng)元不同鈣離子通道影響的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

4 許艷艷;殼寡糖對皮層神經(jīng)元缺糖損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究[D];南通大學(xué);2010年

5 黃燕;大鼠皮層神經(jīng)元和骨骼肌細(xì)胞電生理特性的比較[D];泰山醫(yī)學(xué)院;2008年

6 劉雙雙;白細(xì)胞介素-2對皮層神經(jīng)元存活和形態(tài)的影響[D];浙江大學(xué);2007年

7 張皓;生后早期豐富環(huán)境誘導(dǎo)大鼠聽皮層神經(jīng)元聽空間方向選擇可塑性[D];華東師范大學(xué);2009年

8 喬平云;腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子對皮層神經(jīng)元的保護(hù)作用及其機(jī)制[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2010年

9 陳麗敏;人參皂甙Rg1對β淀粉樣蛋白介導(dǎo)的皮層神經(jīng)元凋亡的保護(hù)作用及其機(jī)制[D];福建醫(yī)科大學(xué);2002年

10 孫萍;茶多酚拮抗岡田酸誘導(dǎo)的皮層神經(jīng)元神經(jīng)毒的作用觀察[D];山西醫(yī)科大學(xué);2009年

  本文關(guān)鍵詞：一種簡便的皮層神經(jīng)元原代培養(yǎng)方法的建立及其培養(yǎng)結(jié)果分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：420739