本文關(guān)鍵詞：BPI-LL37抗菌融合蛋白質(zhì)表達(dá)載體的構(gòu)建與功能鑒定，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的構(gòu)建殺菌/通透性增加蛋白和LL37抗菌蛋白的融合蛋白(BPI-LL37)表達(dá)載體,獲得針對膿毒癥治療的多效抗菌融合蛋白,為膿毒癥治療提供新的措施。方法通過PCR方法從殺菌/通透性增加蛋白(bactericidal/permeability-increasing protein,BPI)和LL37基因的c DNA中擴(kuò)增并修飾獲得需要的r BPI21和LL37活性片斷,構(gòu)建r BPI21-LL37/LL37-r BPI21融合蛋白的表達(dá)載體,構(gòu)建的表達(dá)載體(p LVX-Tight-Puro)上的BPI和LL37基因之間通過柔性片段(GGSGG)連接。之后使用Poly JetTM體外DNA轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染人肺腺癌細(xì)胞A549。通過Western blot檢測真核細(xì)胞A549表達(dá)融合蛋白的水平,通過抑菌試驗(yàn)驗(yàn)證此融合蛋白的分泌與抗菌能力。結(jié)果經(jīng)限制內(nèi)酶切酶切、DNA電泳和DNA測序證明融合蛋白表達(dá)載體(p LVX-Tight-Puro-BPI-LL-37)構(gòu)建成功;Western blot檢測結(jié)果表明融合蛋白r BPI21-LL37/LL37-r BPI21能被真核細(xì)胞A549細(xì)胞表達(dá),融合蛋白大小介于25~30×103;抑菌試驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證此融合蛋白具有抑制細(xì)菌生長的生物學(xué)效應(yīng)。結(jié)論構(gòu)建的兩種r BPI21-LL37/LL37-r BPI21表達(dá)載體能夠成功轉(zhuǎn)染入人的體細(xì)胞,并表達(dá)和分泌具有抗菌活性的融合蛋白,該融合蛋白有潛力成為治療膿毒癥的新藥。
【作者單位】： 第三軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所第一研究室 創(chuàng)傷、燒傷與復(fù)合傷國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;第三軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院細(xì)胞治療中心;第三軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院ICU;
【關(guān)鍵詞】： 抗菌蛋白 融合蛋白 殺菌/通透性增加蛋白 LL 抗菌 膿毒癥
【基金】：國家自然基金面上項(xiàng)目(81372059,81372027) 國家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展規(guī)劃項(xiàng)目(2012GB518105) 重慶市基礎(chǔ)與前沿研究計(jì)劃院士專項(xiàng)項(xiàng)目(CSTC2014JCYJYS0003) 重慶市應(yīng)用開發(fā)(重點(diǎn))項(xiàng)目(CSTC2014YYKFB10006)~~
【分類號(hào)】：R392
【正文快照】： 慶,第三軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所第一研究室,創(chuàng)傷、燒傷與復(fù)合傷國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室1,細(xì)胞治療中心2,ICU3)膿毒癥是以因感染誘發(fā)的全身炎癥反應(yīng)綜合征為表現(xiàn)的一組臨床綜合征,其發(fā)病率高,死亡率高,發(fā)病率占人口的3%,一旦病情進(jìn)展至嚴(yán)重膿毒癥或膿毒性休克,其病死率高達(dá)30%~

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本文編號(hào)：420701