本文關(guān)鍵詞：熱激蛋白在艱難梭菌毒素B引起的免疫原性凋亡中的作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：傳統(tǒng)的研究認(rèn)為，凋亡是非免疫原性的甚至是免疫耐受的。但是近年來的研究發(fā)現(xiàn)一些化療藥物殺死的腫瘤細(xì)胞可以在病人的體內(nèi)激起抗腫瘤的免疫反應(yīng)，即該化療藥物引起的凋亡是免疫原性凋亡。本課題組之前的研究發(fā)現(xiàn)，艱難梭菌分泌的艱難梭菌毒素B，可以誘導(dǎo)CT26細(xì)胞發(fā)生免疫原性的凋亡。據(jù)報道，熱激蛋白的膜轉(zhuǎn)位或分泌是免疫原性凋亡的主要特征之一。本課題探討在艱難梭菌毒素B引起的免疫原性凋亡體系中，是否有HSPs的膜轉(zhuǎn)位或分泌，若有HSPs的膜轉(zhuǎn)位或分泌，則研究其在對在抗腫瘤免疫反應(yīng)的影響及其在抗腫瘤免疫反應(yīng)中的作用機(jī)制。 本文首先研究本體系中HSPs的分泌或膜轉(zhuǎn)位。用western blot的方法檢測TcdB處理CT26細(xì)胞后HSPs的胞外分泌情況，用流式細(xì)胞術(shù)分析HSPs是否外翻到細(xì)胞膜上。然后確定HSPs是否貢獻(xiàn)與抗腫瘤免疫反應(yīng)。用動物疫苗模型和體外激活T細(xì)胞的實驗確定HSPs對于凋亡免疫原性是否有影響。若有作用則用DC吞噬、DC成熟、DC遷移實驗來說明HSPs具體在抗腫瘤免疫反應(yīng)中的哪一個步驟中起作用。研究結(jié)果如下： （1）在TcdB引起的免疫原性凋亡體系中，有HSP70和HSP90的胞外分泌但是無HSPs的膜轉(zhuǎn)位。 （2）中和或者抑制HSP70和HSP90的功能后，凋亡的CT26細(xì)胞的免疫原性受到影響。 （3）胞外分泌的HSP70和HSP90在體外可以影響DC的成熟，但是不影響DC的吞噬和遷移。 （4）HSPs可以直接通DC表面的TLR4相互作用，這為找到HSPs促進(jìn)DC成熟的機(jī)制提供了線索。 本研究在新的體系下研究HSPs對于免疫原性凋亡的作用，對于免疫原性凋亡機(jī)理的發(fā)展及基于TcdB的強(qiáng)效抗腫瘤藥物的研發(fā)具有重要意義。
【關(guān)鍵詞】：熱激蛋白 艱難梭菌毒素B 免疫原性凋亡 抗腫瘤免疫反應(yīng) DC成熟
【學(xué)位授予單位】：華南理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R392
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-11
• 中英文對照和縮略詞表11-12
• 第一章 緒論12-21
• 1.1 細(xì)胞凋亡及凋亡免疫原性研究12-15
• 1.1.1 細(xì)胞凋亡概念及其特征12
• 1.1.2 關(guān)于凋亡免疫原性的傳統(tǒng)研究12-13
• 1.1.3 免疫原性凋亡及其特征13-15
• 1.2 癌癥及癌癥治療15-16
• 1.2.1 癌癥疾病現(xiàn)狀15
• 1.2.2 癌癥治療方法15-16
• 1.2.3 免疫原性凋亡與腫瘤治療16
• 1.3 艱難梭菌及其毒素16-18
• 1.3.1 艱難梭菌及其毒素16-17
• 1.3.2 艱難梭菌毒素B的促凋亡特性17-18
• 1.4 HSP及HSP與凋亡免疫原性18-19
• 1.4.1 熱激蛋白簡介18
• 1.4.2 熱激蛋白的免疫學(xué)功能18-19
• 1.5 研究意義和創(chuàng)新點(diǎn)19-20
• 1.6 研究內(nèi)容20
• 1.7 技術(shù)路線20-21
• 第二章 TcdB引起的免疫原性凋亡體系中有HSPs的分泌21-33
• 2.1 引言21
• 2.2 實驗材料21-22
• 2.2.1 細(xì)胞和毒素21
• 2.2.2 主要藥品和試劑21-22
• 2.2.3 實驗設(shè)備和耗材22
• 2.3 實驗方法22-27
• 2.3.1 溶液的配制22-24
• 2.3.2 實驗器皿的無菌處理24
• 2.3.3 細(xì)胞復(fù)蘇24-25
• 2.3.4 細(xì)胞傳代25
• 2.3.5 細(xì)胞凍存25
• 2.3.6 毒素處理細(xì)胞25
• 2.3.7 細(xì)胞樣品及上清樣品收集和處理25-26
• 2.3.8 western blot實驗步驟26-27
• 2.3.9 流式細(xì)胞儀檢測HSPs外翻27
• 2.4 實驗結(jié)果與討論27-32
• 2.4.1 TcdB在全細(xì)胞水平不引起HSPs表達(dá)的變化27-28
• 2.4.2 TcdB引起HSP70，HSP90 的胞外分泌28-29
• 2.4.3 TcdB的濃度不影響HSP70，HSP90 的分泌29-30
• 2.4.4 HSP70 與HSP90 的后繼分泌能力30-31
• 2.4.5 TcdB不引起HSP70，HSP90 外翻到膜上31-32
• 2.5 本章小結(jié)32-33
• 第三章 HSPs影響凋亡CT26 細(xì)胞的免疫原性33-42
• 3.1 引言33
• 3.2 實驗材料33-34
• 3.2.1 細(xì)胞、毒素及小鼠33
• 3.2.2 主要的藥品和試劑33-34
• 3.2.3 主要實驗設(shè)備及耗材34
• 3.3 實驗方法34-39
• 3.3.1 溶液的配制34-35
• 3.3.2 實驗器皿的無菌處理35
• 3.3.3 細(xì)胞的復(fù)蘇35
• 3.3.4 細(xì)胞傳代35
• 3.3.5 細(xì)胞凍存35
• 3.3.6 動物的隨機(jī)編號35-36
• 3.3.7 免疫小鼠的抗原準(zhǔn)備及腹股溝注射小鼠36-37
• 3.3.8 活細(xì)胞準(zhǔn)備及背部皮下注射37
• 3.3.9 腫瘤體積測定37
• 3.3.10 DC細(xì)胞的分離37-38
• 3.3.11 脾細(xì)胞的制備38
• 3.3.12 腫瘤與DC共孵育體外激活T細(xì)胞38
• 3.3.13 Elisa檢測38-39
• 3.4 實驗結(jié)果與討論39-41
• 3.4.1 HSP70 和HSP90 影響TcdB處理的腫瘤細(xì)胞的免疫原性39-40
• 3.4.2 HSPs對于體外腫瘤與DC共孵育激活T細(xì)胞起作用40-41
• 3.5 本章小結(jié)41-42
• 第四章 HSPs影響DC成熟42-53
• 4.1 引言42
• 4.2 實驗材料42-44
• 4.2.1 細(xì)胞和毒素及小鼠42
• 4.2.2 主要的藥品和試劑42-43
• 4.2.3 實驗設(shè)備與材料43-44
• 4.3 實驗方法44-46
• 4.3.1 溶液的配制44
• 4.3.2 實驗材料和器皿的無菌處理44
• 4.3.3 細(xì)胞復(fù)蘇44
• 4.3.4 細(xì)胞傳代44
• 4.3.5 細(xì)胞凍存44-45
• 4.3.6 DC細(xì)胞的分離45
• 4.3.7 DC吞噬實驗樣品準(zhǔn)備及流式操作45
• 4.3.8 DC成熟實驗樣品準(zhǔn)備及流式操作45
• 4.3.9 DC遷移實驗樣品準(zhǔn)備及免疫熒光染色45-46
• 4.3.10 免疫共沉淀46
• 4.4 實驗結(jié)果和討論46-51
• 4.4.1 HSPs不影響DC的吞噬46-47
• 4.4.2 HSPS影響DC的成熟47-50
• 4.4.3 HSPs不影響DC遷移50
• 4.4.4 HSP70 能與DC表面的TLR4 相互作用50-51
• 4.5 本章小結(jié)51-53
• 結(jié)論與展望53-55
• 結(jié)論53
• 展望53-55
• 參考文獻(xiàn)55-60
• 攻讀碩士學(xué)位期間取得的研究成果60-61
• 致謝61-62
• 附件62

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 閆勝祥 ,苑華萍;試論腫瘤治療方法[J];中國醫(yī)師雜志;2002年S1期

2 魏于全,田聆;腫瘤免疫與腫瘤免疫治療中一些新的思考[J];上海免疫學(xué)雜志;2001年05期

3 陳敏;曹延粉;李杉;孫麗華;劉婷婷;王菊芳;;重組艱難梭菌毒素B對小鼠結(jié)腸癌CT26細(xì)胞的誘導(dǎo)凋亡作用[J];微生物學(xué)通報;2009年06期

4 張立煌;王青青;;惡性腫瘤免疫治療的現(xiàn)狀及展望[J];浙江大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2010年04期

  本文關(guān)鍵詞：熱激蛋白在艱難梭菌毒素B引起的免疫原性凋亡中的作用研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：418653