本文關(guān)鍵詞：嗜肺軍團(tuán)菌巨噬細(xì)胞感染增強(qiáng)蛋白的表達(dá)和純化及其在血清學(xué)診斷中的應(yīng)用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的表達(dá)和純化出嗜肺軍團(tuán)菌巨噬細(xì)胞感染增強(qiáng)(MIP)蛋白,研究其在軍團(tuán)菌肺炎血清學(xué)診斷中應(yīng)用價(jià)值。方法將已構(gòu)建成功的重組質(zhì)粒pET-mip轉(zhuǎn)化E.coli BL21感受態(tài)細(xì)胞,誘導(dǎo)MIP蛋白表達(dá),運(yùn)用SDS-PAGE分析和親和層析法純化。用DRG軍團(tuán)菌IgG/IgM/IgA的ELISA檢測(cè)試劑盒篩出40份陽(yáng)性血清和30份陰性血清,用純化的MIP蛋白建立間接ELISA,同時(shí)與RD的ELISA IgG、IgM、IgA試劑盒分別檢測(cè)已篩選血清中的IgG、IgM、IgA抗體,然后對(duì)這兩種方法進(jìn)行比較,通過(guò)敏感性、特異性以及不同檢測(cè)結(jié)果的一致性,來(lái)評(píng)價(jià)該方法的應(yīng)用價(jià)值。結(jié)果誘導(dǎo)相對(duì)分子質(zhì)量(Mr)大約40 000的MIP融合蛋白在E.coli BL21中表達(dá)并純化。純化蛋白建立的間接ELISA分別檢測(cè)篩選血清中IgG、IgM、IgA抗體與國(guó)外ELISA試劑盒(RD)進(jìn)行比較,IgG抗體的靈敏度88.5%,特異度95.5%,一致性Kappa值0.846(P0.05),ROC曲線下面積0.927。IgM抗體的靈敏度89.3%,特異度97.6%,一致性Kappa值0.88(P0.05),ROC曲線下面積0.947。IgA抗體的靈敏度90%,特異度95.2%,一致性Kappa值0.856(P0.05),ROC曲線下面積0.931。結(jié)論成功誘導(dǎo)了嗜肺軍團(tuán)菌MIP蛋白穩(wěn)定表達(dá)并純化,運(yùn)用MIP作為包被抗原的軍團(tuán)菌肺炎的血清學(xué)診斷方法具有較高的診斷價(jià)值。
【作者單位】： 寧夏醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)與免疫學(xué)系;生育力保持省部級(jí)共建教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 嗜肺軍團(tuán)菌 巨噬細(xì)胞感染增強(qiáng)蛋白 蛋白表達(dá) 血清學(xué)診斷
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(30860264) 寧夏自然科學(xué)基金(NZ0992)
【分類號(hào)】：R446.1
【正文快照】： 軍團(tuán)病是一種急性呼吸道傳染病,主要通過(guò)氣溶膠傳播,該病缺乏典型的癥狀和體征,治療延遲或治療方法不當(dāng)病死率較高。因此特異、敏感、快速的檢測(cè)方法對(duì)該病的防治非常重要。軍團(tuán)病確診的“金標(biāo)準(zhǔn)”仍是培養(yǎng)出致病菌,但陽(yáng)性率低,很難滿足臨床的需求[1]。PCR技術(shù)有較高的敏感性

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本文編號(hào)：417411