本文關(guān)鍵詞：乙型腦炎病毒NS1’蛋白對(duì)病毒毒力的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：乙型腦炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)及其同血清群病毒在復(fù)制過(guò)程中存在核糖體-1移碼表達(dá)NS1’蛋白的現(xiàn)象,但NS1’蛋白的功能目前仍不明確,核糖體移碼在病毒復(fù)制過(guò)程中發(fā)揮的作用也沒(méi)有清晰的認(rèn)識(shí)。本研究通過(guò)分析乙型腦炎病毒基因組中核糖體移碼序列,在對(duì)NS2A基因?qū)嵤┩x突變基礎(chǔ)上,設(shè)計(jì)8對(duì)引物,通過(guò)PCR突變方法改變核糖體移碼結(jié)構(gòu)域移碼效率或者病毒NS1’蛋白編碼框長(zhǎng)度。利用獲得的突變毒株,測(cè)定分析不同突變對(duì)病毒NS1’蛋白表達(dá)情況、病毒復(fù)制能力和病毒毒力的影響。 實(shí)驗(yàn)中分別將PCR突變片段替換JEV感染性克隆pJEHEN中相應(yīng)片段,獲得了8株突變?nèi)L(zhǎng)克隆。經(jīng)體外轉(zhuǎn)錄合成RNA,再以RNA轉(zhuǎn)染BHK-21細(xì)胞,拯救出8株突變病毒vJETA、vJECT、 vJETC、vJESTC、vJESGA、vJE2R、vJET1和vJET2。通過(guò)RT-PCR擴(kuò)增突變病毒中含突變位點(diǎn)的基因組片段,測(cè)序證實(shí)了vJETA株于3558bp處存在T-A突變；vJECT株于3555bp處存在C-T突變；、rfETC株于3561bp存在T-C突變；vJESTC株于3573bp處存在T-C突變；vJESGA株于3600bp處存在G-A突變；vJE2R株于3607bp-3609bp存在CGC-AGG突變；vJETl株于3690bp處存在T-A突變；vJET2株于3690bp和3819bp處存在T-A突變,突變堿基均位于各相應(yīng)毒株設(shè)計(jì)突變位點(diǎn)。將突變病毒vJETA、vJECT、vJETC、vJESTC、vJESGA、vJE2R、vJET1和vJET2感染Vero細(xì)胞后,Western Blot檢測(cè)顯示,vJETC株、vJECT株和vJESTC株能檢測(cè)到NS1蛋白和NS1’蛋白的表達(dá)；vJETA株和vJESGA株未能檢測(cè)到NS1’蛋白的表達(dá),只能檢測(cè)到NS1蛋白的表達(dá)；vJE2R株、vJET1株和vJET2株均能檢測(cè)到NS1蛋白的表達(dá),同時(shí)vJE2R株能表達(dá)編碼框縮短即蛋白分子量減小的NS1’蛋白,也能檢測(cè)到vJET1株與vJET2株分別表達(dá)NS1’蛋白編碼框不同程度延伸即蛋白分子量不同程度增加的NS1’蛋白。突變對(duì)病毒復(fù)制能力也造成了不同程度的影響,與親本病毒vTHen相比,JE2R株與vJESGA株病毒復(fù)制能力與vTHen株基本一致,vJETC株與vJESTC株病毒復(fù)制能力有所下降；而突變毒株vJECT, vJETA, vJET1和VJET2與對(duì)照毒株相比,復(fù)制能力明顯降低。但突變毒株復(fù)制能力與NS1’蛋白表達(dá)情況沒(méi)有直接聯(lián)系。通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),突變對(duì)病毒的毒力也造成了不同程度的影響。神經(jīng)毒力試驗(yàn)中,vJE2R株與vJESGSA株與對(duì)照毒株相比基本一致,vJESTC株與vJETC株神經(jīng)毒力有所下降,vJETA株、vJECT株、vJET1株和vJET2株神經(jīng)毒力明顯下降。神經(jīng)侵襲力試驗(yàn)中,vJESGA株、vJE2R株和vJETC株與對(duì)照毒株相比基本一致,vJETA株、vJECT株、vJESTC株、vJET1株和vJET2株神經(jīng)侵襲力明顯下降。但突變毒株神經(jīng)毒力和神經(jīng)侵襲力與NS1’蛋白表達(dá)情況沒(méi)有直接聯(lián)系。 通過(guò)獲得實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以發(fā)現(xiàn),針對(duì)核糖體移碼結(jié)構(gòu)域進(jìn)行突變操作能夠影響NS1’蛋白的表達(dá)狀況,但病毒的復(fù)制能力和毒力的改變與NS1’蛋白的表達(dá)情況并不存在直接聯(lián)系,因此認(rèn)為NS1’蛋白不具備直接影響病毒復(fù)制能力和毒力的功能。
【關(guān)鍵詞】：乙型腦炎病毒 NS1’蛋白 突變 毒力
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：S852.65;R373
【目錄】：

• 摘要6-7
• Abstract7-9
• 第一章 引言9-16
• 1.1 乙型腦炎病毒簡(jiǎn)介9-11
• 1.2 乙型腦炎病毒分子生物學(xué)簡(jiǎn)介11-13
• 1.3 NS1蛋白與NS1’蛋白的研究進(jìn)展13-15
• 1.4 研究目的與意義15-16
• 第二章 不同NS1’蛋白表達(dá)情況的JEV突變病毒的構(gòu)建與鑒定16-25
• 2.1 材料與方法16-21
• 2.2 結(jié)果21-23
• 2.3 討論23-25
• 第三章 核糖體移碼結(jié)構(gòu)域不同突變對(duì)乙型腦炎病毒體外生長(zhǎng)特性的影響25-32
• 3.1 材料與方法25-26
• 3.2 結(jié)果26-29
• 3.3 討論29-32
• 第四章 核糖體移碼結(jié)構(gòu)域不同突變對(duì)乙型腦炎病毒毒力的影響32-35
• 4.1 材料與方法32-33
• 4.2 結(jié)果33
• 4.3 討論33-35
• 第五章 全文結(jié)論35-36
• 參考文獻(xiàn)36-43
• 致謝43-44
• 作者簡(jiǎn)介44
• 碩士期間發(fā)表論文44

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 劉欣玉;俞永新;岳廣智;楊立宏;賈麗麗;董關(guān)木;;一株強(qiáng)神經(jīng)毒力乙腦病毒株的生物學(xué)及其分子特征[J];病毒學(xué)報(bào);2010年04期

2 鄭浩;童光志;;乙型腦炎病毒NS1'蛋白移碼序列的鑒定[J];中國(guó)動(dòng)物傳染病學(xué)報(bào);2012年01期

  本文關(guān)鍵詞：乙型腦炎病毒NS1’蛋白對(duì)病毒毒力的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：416511