本文關(guān)鍵詞：定量跨胎盤RNA干擾技術(shù)在模型動物建立的應(yīng)用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的 應(yīng)用跨胎盤RNA干擾技術(shù)抑制胚胎鼠BMP-4基因，，為獲取基因下調(diào)小鼠探索經(jīng)濟高效技術(shù)。2006年O’Shea發(fā)現(xiàn)在小鼠胚胎早期用含單基因質(zhì)粒干擾可以跨過胎盤下調(diào)妊鼠靶基因引起子代鼠相關(guān)組織器官發(fā)育障礙，并產(chǎn)生畸形小鼠。本課題組在前期工作基礎(chǔ)條件下申請NSFC，歷時五年研究定量跨胎盤RNAi技術(shù)。其間，探索影響跨胎盤RNA干擾技術(shù)的條件并首次建立了相關(guān)技術(shù)平臺；應(yīng)用該技術(shù)構(gòu)建先天性疾病模型動物。 方法 構(gòu)建發(fā)育相關(guān)基因BMP-4下調(diào)質(zhì)粒。通過尾靜脈向孕鼠注射Ringer’s液、pSES質(zhì)粒、pSES-SiBMP-4質(zhì)粒。部分孕鼠注射48小時后取出胚胎觀測胚胎發(fā)育變化，并應(yīng)用RT-PCR及Western blotting檢測BMP-4基因mRNA和蛋白質(zhì)；部分孕鼠自然分娩后研究子代鼠生長發(fā)育變化，并用恰當(dāng)?shù)臋z查診斷。 結(jié)果 pSES-SiBMP-4組胚胎BMP-4基因mRNA及蛋白表達較Ringer’s組、pSES組下調(diào)（P＜0.05）。Ringer’s組、pSES組胚胎鼠發(fā)育無明顯異常，pSES-SiBMP-4組胚胎鼠頭部、胃腸道及脊柱發(fā)育異常。新生子代鼠中pSES-SiBMP-4組出現(xiàn)癲癇，腸息肉及先天性巨結(jié)腸。 結(jié)論 早期胚胎鼠跨胎盤定量RNA干擾現(xiàn)實可行，可建立穩(wěn)定的定量跨胎盤RNA干擾技術(shù)平臺。該方法可用來定量研究基因功能，構(gòu)建基因下調(diào)模型動物。 （1）RNAi質(zhì)�？煽邕^早期胎盤調(diào)控子代基因表達，證明效果與質(zhì)粒注入時間窗，質(zhì)粒質(zhì)量-濃度，注射速度相關(guān)。 （2）BMP-4基因?qū)π∈笊窠?jīng)系統(tǒng)（CNSENS）、骨骼系統(tǒng)、循環(huán)系統(tǒng)、消化道和皮膚的生長發(fā)育具關(guān)鍵作用。 （3）qTP-RNAi可定量下調(diào)子代小鼠BMP-4基因，通過對注射條件的調(diào)控定量構(gòu)建不同疾病的轉(zhuǎn)基因動物模型，包括先天性癲癇、結(jié)腸息肉及先天性腸無神經(jīng)節(jié)細胞癥模型。
【關(guān)鍵詞】：定量跨胎盤RNA干擾 BMP-4 小鼠動物模型 基因下調(diào) 發(fā)育
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R-332;R3411
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照5-6
• 摘要6-8
• ABSTRACT8-10
• 總前言10-14
• 第一部分 qTP-RNAi 技術(shù)影響因素探討及對胚胎發(fā)育影響14-34
• 前言14-15
• 1. 材料與方法15-21
• 2. 結(jié)果21-32
• 3. 討論32-33
• 4. 結(jié)論33-34
• 第二部分 qTP-RNAi 技術(shù)構(gòu)建動物模型的實驗研究34-53
• 前言34-36
• 1. 材料與方法36-40
• 2. 結(jié)果40-51
• 3. 討論51-52
• 4. 結(jié)論52-53
• 備注53-54
• 全文總結(jié)54-55
• 附圖55-56
• 參考文獻56-60
• 文獻綜述60-65
• 參考文獻63-65
• 致謝65-67
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文67-69

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

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  本文關(guān)鍵詞：定量跨胎盤RNA干擾技術(shù)在模型動物建立的應(yīng)用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：416451