發(fā)布時間：2017-06-02 19:07

  本文關(guān)鍵詞：應(yīng)用裸鼠乳腺癌移植瘤模型探討CIK細(xì)胞的腫瘤靶向性及安全性，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：采用健康人外周血分離制備細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(cytokine-induced killer cells, CIK);以人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-435接種BALB/cNude裸鼠建立動物模型,分析將體外培養(yǎng)的CIK細(xì)胞回輸裸鼠體內(nèi)后對其腫瘤的靶向性及其時間分布特點(diǎn)。 方法：1.Ficoll密度梯度離心法從健康人外周血中分離制備CIK細(xì)胞。2.熒光雙染法及流式細(xì)胞技術(shù)檢測鑒定CIK細(xì)胞的免疫表型。3.應(yīng)用MTT實(shí)驗(yàn)、Transwell遷移實(shí)驗(yàn)[’]觀察CIK細(xì)胞對人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-435的體外殺傷作用和腫瘤趨向遷移作用。4.建立裸鼠移植瘤模型,通過尾靜脈輸注熒光染料DiI標(biāo)記的CIK細(xì)胞,采用小動物活體成像系統(tǒng)動態(tài)觀察CIK細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)對腫瘤組織是否有趨向遷移作用。5.分別在第6h、24h、48h、7天、14天處死裸鼠后,取肺、肝、胃、腎、脾以及腫瘤組織制成石蠟切片,HE染色光鏡下觀察不同組織的病理表現(xiàn),熒光顯微鏡下觀察不同組織中是否有熒光標(biāo)記的CIK細(xì)胞表達(dá),TUNEL凋亡實(shí)驗(yàn)檢測腫瘤組織中的細(xì)胞凋亡率。 結(jié)果：1.人外周血單個核細(xì)胞經(jīng)不同細(xì)胞因子體外培養(yǎng)后,誘導(dǎo)分化的CIK細(xì)胞在培養(yǎng)第3天快速增殖,14天時達(dá)到高峰,增值倍數(shù)達(dá)到50倍以上。熒光雙染結(jié)果顯示鏡下觀察CIK細(xì)胞CD3+CD56+T細(xì)胞的比例達(dá)到50%以上,流式細(xì)胞技術(shù)檢測結(jié)果CIK細(xì)胞CD3+CD56+T細(xì)胞的比例占63.34%。 2.MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明將效應(yīng)細(xì)胞、靶細(xì)胞以10：1、20：1、40：1比例作用48h后,CIK細(xì)胞對MDA-MB-435細(xì)胞的殺傷率分別為(32.20±2.15)%、(51.16±2.64)%、(72.16%±4.11)%。外周血單個核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMC)對MDA-MB-435細(xì)胞的殺傷率則分別為(10.08±2.23)%、(16.13±3.12)%、(21.34±2.75)%。CIK細(xì)胞對MDA-MB-435細(xì)胞的殺傷率均比PBMC對MDA-MB-435細(xì)胞的殺傷率高。 3. Transwell侵襲小室實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,CIK細(xì)胞對MDA-MB-435細(xì)胞的趨化遷移能力隨著腫瘤細(xì)胞上清液濃度的增高而增加,與對照組相比具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。 4.注射人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-435一周后裸鼠全部成瘤,尾靜脈輸注DiI標(biāo)記的CIK細(xì)胞,經(jīng)小動物活體成像儀連續(xù)監(jiān)測,6h可在肺部、下肢大動脈附近觀察到紅色發(fā)光信號；24h可在肺、腹部區(qū)域、腫瘤組織周邊監(jiān)測到紅色發(fā)光信號,強(qiáng)度較第6h明顯增強(qiáng),其中腹部區(qū)域分布最多；48h后檢測,可在腫瘤組織及其邊緣,肺部見紅色發(fā)光信號,信號強(qiáng)度持續(xù)穩(wěn)定；第7天檢測紅色發(fā)光信號主要集中于腫瘤組織及其周邊,強(qiáng)度較之前明顯減弱；第14天檢測,腫瘤組織周邊發(fā)光信號強(qiáng)度顯著減弱。 5.腫瘤組織石蠟切片,HE染色光鏡下僅在腫瘤組織中可見到淋巴細(xì)胞成巢分布在腫瘤細(xì)胞邊緣,且可見部分區(qū)域細(xì)胞凋亡壞死,并有炎細(xì)胞浸潤,其中第48h的腫瘤組織中淋巴細(xì)胞分布區(qū)域最廣,壞死凋亡區(qū)域最多,其余組織未見明顯病理變化,或僅有少量出血。免疫組化結(jié)果顯示腫瘤組織中淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志CD3+, CD56+, CD45RO+,均為CIK細(xì)胞免疫表型。熒光顯微鏡下觀察可在腫瘤組織中的淋巴細(xì)胞分布區(qū)域見到紅色熒光信號,為DiI標(biāo)記的CIK細(xì)胞,且第48h的腫瘤組織中熒光信號區(qū)域分布最廣,強(qiáng)度最高。 6. TUNEL凋亡實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明相比未注射CIK細(xì)胞的對照組,注射CIK細(xì)胞組腫瘤組織中細(xì)胞凋亡率較高,具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。 結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)室分離制備獲得的CIK細(xì)胞在體外對腫瘤細(xì)胞具有殺傷、趨化遷移能力,體內(nèi)在裸鼠移植瘤模型中表現(xiàn)出對腫瘤的靶向性趨化作用,并且具有一定的時間分布特點(diǎn),此外對體內(nèi)正常臟器、組織沒有明顯副作用,因此CIK細(xì)胞可在腫瘤的靶向治療中作為一種新型有效安全的細(xì)胞載體發(fā)揮更顯著的殺瘤作用。
【關(guān)鍵詞】：CIK細(xì)胞 裸鼠腫瘤移植 腫瘤靶向性
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R737.9;R-332
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• ABSTRACT7-10
• 中英文縮略詞表10-11
• 前言11-13
• 材料與方法13-18
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果18-37
• 討論37-44
• 結(jié)論44-45
• 參考文獻(xiàn)45-48
• 附錄48-65
• 文獻(xiàn)綜述65-72
• 參考文獻(xiàn)68-72
• 在校期間待刊文章72-73
• 致謝73

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 郝明志;林海瀾;陳強(qiáng);葉韻斌;陳起忠;陳明水;;肝動脈栓塞化療聯(lián)合CIK細(xì)胞免疫療法治療肝癌的臨床對照研究(英文)[J];癌癥;2010年02期

2 安秀梅;岳欣;李慧;張澎;于津浦;任秀寶;;應(yīng)用結(jié)腸癌動物模型探討CIK細(xì)胞的抗腫瘤活性和體內(nèi)分布特點(diǎn)[J];中國中西醫(yī)結(jié)合外科雜志;2008年03期

3 趙明;吳沛宏;曾益新;夏建川;張福君;冼勵堅;張毓平;周琨;范衛(wèi)君;張亮;高飛;周啟明;;經(jīng)肝動脈栓塞化療序貫聯(lián)合射頻消融和細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞治療肝細(xì)胞癌的隨機(jī)研究[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;2006年26期

  本文關(guān)鍵詞：應(yīng)用裸鼠乳腺癌移植瘤模型探討CIK細(xì)胞的腫瘤靶向性及安全性，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：416247