本文關(guān)鍵詞：弓形蟲ROP2酵母雙雜交誘餌表達(dá)載體構(gòu)建及毒性和自激活活性檢測，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的為篩選弓形蟲分泌毒性因子-棒狀體蛋白2(ROP2)在終末宿主細(xì)胞內(nèi)的互作因子,構(gòu)建ROP2的酵母雙雜交誘餌表達(dá)載體,并檢測其表達(dá)蛋白對酵母菌生長的毒性作用及自激活活性。方法根據(jù)ROP2蛋白的特性選取1~561氨基酸、25~241氨基酸、242~561氨基酸作為目的片段,PCR擴(kuò)增弓形蟲基因組獲得3片段,定向克隆到酵母表達(dá)載體pGBKT 7上,經(jīng)測序正確后,將其轉(zhuǎn)化到酵母菌Y187感受態(tài)細(xì)胞,在缺陷性培養(yǎng)基上觀察3個誘餌表達(dá)載體在Y187中的表達(dá)情況,檢測誘餌載體有無毒性作用和自激活功能。結(jié)果成功擴(kuò)增出ROP2基因的3個目的片段,并將其克隆到誘餌表達(dá)載體pGBKT7中,經(jīng)測序及酶切鑒定結(jié)果正確,轉(zhuǎn)化到酵母Y187細(xì)胞中的誘餌表達(dá)載體無毒性和自激活作用。結(jié)論成功獲得了對宿主酵母細(xì)胞無毒性且未自主激活活性的誘餌表達(dá)載體pG-BKT7-ROP2_(1-561)、pGBKT7-ROP2_(242-561)、pGBKT7-ROP2_(25-241),可作為酵母雙雜合系統(tǒng)中的"誘餌",為下一步利用酵母雙雜交系統(tǒng)篩選ROP2在終末宿主細(xì)胞內(nèi)的相互作用蛋白創(chuàng)造了條件。
【作者單位】： 山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院山東省寄生蟲病防治研究所;
【關(guān)鍵詞】： 弓形蟲 棒狀體蛋白 誘餌表達(dá)載體 毒性 自激活活性
【基金】：山東省三院聯(lián)合基金項目(No.2014ZRC03100) 國家自然科學(xué)青年基金(No.31300617) 山東省醫(yī)藥衛(wèi)生科技發(fā)展計劃項目(No.WSO370) 山東省優(yōu)秀中青年科學(xué)家科研獎勵基金(博士基金)(No.BS2013SW015)
【分類號】：R382.5
【正文快照】： 弓形蟲病是一種全球性分布、危害嚴(yán)重的人畜共患寄生蟲病,我國已有30個省發(fā)現(xiàn)人畜感染病例[1]。人類普遍易感,全世界感染率為30%;孕婦感染可造成胎兒死胎、畸形、流產(chǎn)和弱智,免疫缺陷病人感染,可引發(fā)全身性的急性弓形蟲病,癥狀伴高燒、寒顫、腹瀉甚至死亡,且病死率高[2]。弓形

【參考文獻(xiàn)】

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3 孔t

本文編號：412034