本文關(guān)鍵詞：B群腦膜炎奈瑟菌NspA核酸疫苗的免疫活性及保護(hù)作用的初步研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：擴(kuò)增B群腦膜炎奈瑟菌表面蛋白A（NspA）基因，構(gòu)建pcDNA3.1(+)/NspA真核重組載體，通過肌注和滴鼻法免疫雌性BALB/c小鼠，觀察小鼠體內(nèi)產(chǎn)生體液免疫和細(xì)胞免疫應(yīng)答水平，計算疫苗的免疫保護(hù)率，為研究B群腦膜炎奈瑟菌核酸疫苗提供相關(guān)的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：制備去內(nèi)毒素的pcDNA3.1(+)/NspA真核重組載體，通過Lip2000轉(zhuǎn)染試劑在RAW264.7和COS-7細(xì)胞中進(jìn)行轉(zhuǎn)染，采用實(shí)時熒光定量PCR（RT-qPCR）法檢測nspa基因mRNA的轉(zhuǎn)錄水平，通過免疫組化法檢測NspA基因在真核細(xì)胞中的表達(dá)水平。通過肌注和滴鼻的方式免疫3-4周齡的雌性BALB/c小鼠，采用間接ELISA法檢測小鼠血清中產(chǎn)生的特異性IgG和生殖道黏膜灌洗液中sIgA抗體水平， ELISA雙抗體夾心法檢測免疫小鼠脾細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IFN-γ、IL-4的水平，CCK8法檢測脾淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)。構(gòu)建腦膜炎球菌動物感染模型，觀察核酸疫苗對實(shí)驗(yàn)小鼠的免疫保護(hù)率。 結(jié)果： （1）構(gòu)建的pcDNA3.1(+)/NspA真核重組載體經(jīng)公司測序及酶切鑒定結(jié)果正確。 （2） pcDNA3.1(+)/NspA真核重組載體能有效地在真核細(xì)胞中進(jìn)行轉(zhuǎn)錄和表達(dá)。 (3)核酸疫苗通過滴鼻和肌注法免疫小鼠后，能夠刺激小鼠體內(nèi)產(chǎn)生特異性抗NspA的抗體，并且抗體水平隨免疫時間遞增呈上升趨勢： ①在免疫后第6周，滴鼻法的pcDNA3.1(+)/NspA+CpG組的小鼠生殖道灌洗液中特異性sIgA水平明顯高于pcDNA3.1(+)和PBS組（P0.01），pcDNA3.1(+)/NspA+CpG與pcDNA3.1(+)/NspA相比較無顯著性差異（P0.05），pcDNA3.1(+)/NspA+CpG組抗體效價為1:3000；肌注法的pcDNA3.1(+)/NspA+CpG組的小鼠生殖道灌洗液中特異性sIgA水平明顯高于pcDNA3.1(+)和PBS組（P0.01），而pcDNA3.1(+)/NspA+CpG與pcDNA3.1(+)/NspA相比較無顯著性差異（P0.05），pcDNA3.1(+)/NspA+CpG組抗體效價為1:1875； ②在免疫后第6周，滴鼻法的pcDNA3.1(+)/NspA+CpG組的小鼠血清中特異性IgG水平明顯高于pcDNA3.1(+)和PBS組（P0.01），而pcDNA3.1(+)/NspA+CpG與pcDNA3.1(+)/NspA相比較無顯著性差異（P0.05），pcDNA3.1(+)/NspA+CpG組抗體效價為1:3750；肌注法的pcDNA3.1(+)/NspA+CpG組的小鼠血清中特異性IgG水平明顯高于pcDNA3.1(+)和PBS組（P0.01），而pcDNA3.1(+)/NspA+CpG與pcDNA3.1(+)/NspA相比較無顯著性差異（P0.05），pcDNA3.1(+)/NspA+CpG組抗體效價為1:5000； ③經(jīng)滴鼻和肌注免疫的pcDNA3.1(+)/NspA+CpG組小鼠脾淋巴細(xì)胞上清液中的IL-4、IFN-γ含量明顯高于pcDNA3.1(+)和PBS組（P0.01），而pcDNA3.1(+)/NspA+CpG與pcDNA3.1(+)/NspA相比較無顯著性差異（P0.05）； ④肌注法的pcDNA3.1(+)/NspA+CpG組的脾淋巴細(xì)胞刺激指數(shù)（SI，1.45±0.03）顯著高于、PBS（0.30±0.01）與pcDNA3.1（+）組（0.44±0.02），，（P0.05）；滴鼻法pcDNA3.1(+)/NspA+CpG組的S（I1.55±0.06）明顯高于PBS（0.34±0.05）與pcDNA3.1（+）組（0.51±0.04），（P0.05）；而肌注法、滴鼻法的pcDNA3.1(+)/NspA+CpG與pcDNA3.1(+)/NspA組相比較無顯著性差異（P0.05）； (4)核酸疫苗的免疫保護(hù)效果：①肌注法： pcDNA3.1(+)/NspA+CpG、pcDNA3.1(+)/NspA組在72h內(nèi)的存活率分別為90%、80%；pcDNA3.1(+)組和PBS組24h內(nèi)的存活率分別為30%和20%，48h內(nèi)的存活率均為0；②滴鼻法：pcDNA3.1(+)/NspA+CpG、pcDNA3.1(+)/NspA組在72h內(nèi)的存活率分別為80%、70%，pcDNA3.1(+)組和PBS組24h內(nèi)的存活率分別為30%和20%，48h內(nèi)的存活率均為0。 結(jié)論： （1）核酸疫苗pcDNA3.1(+)/NspA可誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生較強(qiáng)的特異性體液免疫和細(xì)胞免疫應(yīng)答； （2）核酸疫苗對B群腦膜炎球菌感染的實(shí)驗(yàn)小鼠具有一定的免疫保護(hù)作用，肌注途徑的免疫保護(hù)作用優(yōu)于滴鼻途徑； （3）佐劑CpG對NspA核酸疫苗的免疫活性和保護(hù)效果的增強(qiáng)作用不明顯。
【關(guān)鍵詞】：B群腦膜炎奈瑟菌 奈瑟菌表面蛋白A（NspA） 核酸疫苗 免疫活性 免疫保護(hù)
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R392
【目錄】：

• 常用英文縮寫4-6
• 中文摘要6-9
• ABSTRACT9-12
• 前言12-14
• 實(shí)驗(yàn)材料14-16
• 實(shí)驗(yàn)方法16-28
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果28-41
• 討論41-44
• 結(jié)論44-45
• 參考文獻(xiàn)45-48
• 附錄48-52
• 文獻(xiàn)綜述52-61
• 參考文獻(xiàn)58-61
• 研究成果及發(fā)表論文61-62
• 致謝62

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

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  本文關(guān)鍵詞：B群腦膜炎奈瑟菌NspA核酸疫苗的免疫活性及保護(hù)作用的初步研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：410620