本文關(guān)鍵詞：AAPH誘導(dǎo)氧化應(yīng)激對(duì)胚胎成骨的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究已證明氧化應(yīng)激與胚胎發(fā)育不良有著密切聯(lián)系,骨骼系統(tǒng)的發(fā)育是胚胎發(fā)育的一個(gè)重要環(huán)節(jié),然而關(guān)于氧化應(yīng)激與胚胎骨骼發(fā)育的關(guān)系研究還報(bào)道尚少。在前期研究中我們發(fā)現(xiàn)高劑量自由基誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激會(huì)導(dǎo)致胚胎肢芽發(fā)育畸形,本文將進(jìn)一步深入探討氧化應(yīng)激對(duì)胚胎骨生成的影響與作用機(jī)制。首先,我們給予雞胚不同濃度的AAPH(0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0μmol/egg)建立氧化應(yīng)激雞胚模型。給予AAPH處理后,雞胚孵育至12.5天,測(cè)定相關(guān)指標(biāo),確定建立慢性氧化應(yīng)激雞胚模型的最佳劑量。結(jié)果顯示,雞胚的死亡率和畸形率隨著AAPH濃度的增加而增加,AAPH對(duì)雞胚的半數(shù)致死劑量為4.8μmol/egg。不同濃度的AAPH(0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0μmol/egg)均能造成雞胚氧化應(yīng)激,例如骨骺軟骨細(xì)胞ROS生成速率增高,線粒體膜電位降低。我們確定0.5μmol/egg的AAPH作為建立慢性氧化應(yīng)激雞胚模型的劑量,在此劑量下雞胚長(zhǎng)骨長(zhǎng)度較正常組相比顯著性縮短。其次,我們以AAPH(0.5μmol/egg)建立的氧化應(yīng)激雞胚模型為基礎(chǔ),探討氧化應(yīng)激對(duì)胚胎軟骨內(nèi)成骨的影響,為此依次進(jìn)行了以下實(shí)驗(yàn):(1)連續(xù)取16.5、17.5、18.5天雞胚長(zhǎng)骨進(jìn)行阿利新藍(lán)茜素紅雙染,測(cè)量脛骨和股骨長(zhǎng)度,檢測(cè)氧化應(yīng)激對(duì)雞胚長(zhǎng)骨生長(zhǎng)速度的影響。結(jié)果顯示,AAPH誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激能顯著性減緩雞胚長(zhǎng)骨的生長(zhǎng)速度,縮短長(zhǎng)骨長(zhǎng)度。(2)連續(xù)取16.5、17.5、18.5天雞胚長(zhǎng)骨進(jìn)行石蠟切片,HE染色處理,分別測(cè)量其脛骨、股骨骨骺端軟骨細(xì)胞增殖區(qū)和軟骨細(xì)胞膨大區(qū)的長(zhǎng)度,檢測(cè)氧化應(yīng)激對(duì)雞胚長(zhǎng)骨軟骨內(nèi)成骨的兩個(gè)關(guān)鍵步驟—軟骨細(xì)胞增殖和軟骨細(xì)胞膨大的影響。結(jié)果顯示,氧化應(yīng)激顯著性縮短了雞胚長(zhǎng)骨骨骺端軟骨細(xì)胞增殖區(qū)和膨大區(qū)的長(zhǎng)度,導(dǎo)致雞胚長(zhǎng)骨軟骨細(xì)胞增殖速度減慢,軟骨細(xì)胞膨大骨化速度降低。同時(shí)還發(fā)現(xiàn)雞胚長(zhǎng)骨骨骺軟骨增殖區(qū)軟骨細(xì)胞總數(shù)減少,正處于分裂期的細(xì)胞數(shù)下降。(3)采用Micro-CT術(shù)檢測(cè)雞胚發(fā)育后期長(zhǎng)骨的相關(guān)骨指標(biāo),驗(yàn)證氧化應(yīng)激導(dǎo)致的胚胎骨發(fā)育不良。結(jié)果顯示,氧化應(yīng)激顯著性降低了雞胚長(zhǎng)骨的骨量和骨密度,導(dǎo)致胚胎不良的骨生成。(4)采用RT-PCR術(shù)檢測(cè)軟骨內(nèi)成骨的關(guān)鍵調(diào)控因子Sox9和Runx2以及相關(guān)基因Type II collagen和Aggrecan的基因表達(dá)。結(jié)果顯示,氧化應(yīng)激顯著性降低了這些基因的表達(dá)水平。綜上所述,AAPH(0.5μmol/egg)誘導(dǎo)的慢性氧化應(yīng)激會(huì)導(dǎo)致胚胎長(zhǎng)骨Sox9的表達(dá)下降,從而下調(diào)了Type II collagen和Aggrecan的表達(dá),影響了軟骨細(xì)胞的生存、營(yíng)養(yǎng)和代謝,抑制了軟骨細(xì)胞的增殖,減緩了長(zhǎng)骨的生長(zhǎng)發(fā)育速度。AAPH氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的Sox9蛋白量表達(dá)下降,會(huì)直接導(dǎo)致預(yù)膨大軟骨細(xì)胞中磷酸化Sox9蛋白的減少,導(dǎo)致預(yù)膨大軟骨細(xì)胞直接進(jìn)入終末分化階段,發(fā)生凋亡,大大減少了成熟膨大軟骨細(xì)胞的數(shù)量,造成Runx2表達(dá)的降低,導(dǎo)致長(zhǎng)骨的骨化不良、骨量和骨密度降低。本研究結(jié)果闡明了氧化應(yīng)激對(duì)胚胎骨生成的影響,并初步揭示了具有臨床代表性的胚胎慢性氧化應(yīng)激對(duì)骨骼發(fā)育的影響機(jī)制,該研究結(jié)果對(duì)預(yù)防和治療氧化應(yīng)激對(duì)胚胎發(fā)育的影響、提高胚胎發(fā)育質(zhì)量有著重要意義。
【關(guān)鍵詞】：雞胚模型 胚胎骨生成 氧化應(yīng)激 活性氧自由基 軟骨內(nèi)成骨
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R321
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-7
• 英文縮略詞表7-11
• 第一章 前言11-21
• 1 氧化應(yīng)激與生物體的抗氧化系統(tǒng)11-12
• 1.1 氧化應(yīng)激11
• 1.2 活性氧自由基與抗氧化酶11-12
• 2 氧化應(yīng)激與胚胎發(fā)育12-16
• 2.1 胚胎發(fā)育14
• 2.2 骨骼發(fā)育14-16
• 3 成骨細(xì)胞系16-17
• 3.1 成骨細(xì)胞的特征16
• 3.2 成骨細(xì)胞系的分化16-17
• 4 胚胎期和胚胎出生后的骨骼發(fā)育17-19
• 4.1 調(diào)控因子17-19
• 5 雞胚模型的應(yīng)用性19
• 6 自由基誘導(dǎo)劑AAPH19
• 7 立題依據(jù)19-21
• 第二章 AAPH誘導(dǎo)胚胎慢性氧化應(yīng)激模型21-31
• 1 材料與方法21-25
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料21-23
• 1.2 實(shí)驗(yàn)分組23-24
• 1.3 阿利新蘭&茜素紅雙染檢測(cè)胚胎整體骨骼系統(tǒng)發(fā)育情況24
• 1.4 DCFH-DA熒光探針?lè)z測(cè)骨骺軟骨細(xì)胞的活性氧自由基生成速率24-25
• 1.5 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)骨骺軟骨細(xì)胞的線粒體膜電位25
• 1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析25
• 2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果25-29
• 2.1 不同濃度AAPH組的胚胎死亡率和畸形率25-26
• 2.2 通過(guò)阿利新蘭&茜素紅雙染檢測(cè)胚胎整體骨骼系統(tǒng)發(fā)育情況26-28
• 2.3 不同濃度AAPH對(duì)胚胎骨骺軟骨細(xì)胞活性氧自由基生成速率的影響28
• 2.4 不同濃度的AAPH對(duì)骨骺軟骨細(xì)胞線粒體膜電位的影響28-29
• 3 小結(jié)與討論29-31
• 第三章 活性氧自由基對(duì)軟骨內(nèi)成骨軟骨細(xì)胞增殖的影響31-47
• 1 材料與方法32-37
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料32-34
• 1.2 16.5、17.5、18.5 天胚胎長(zhǎng)骨阿利新蘭&茜素紅染色34
• 1.3 16.5、17.5、18.5 天胚胎長(zhǎng)骨H&E染色34-35
• 1.4 16.5、17.5、18.5 天胚胎長(zhǎng)骨阿利新蘭&伊紅染色35
• 1.5 RT-PCR檢測(cè)胚胎長(zhǎng)骨基因表達(dá)35-37
• 1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析37
• 2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果37-45
• 2.1 AAPH對(duì) 16.5、17.5、18.5 天雞胚股骨和脛骨長(zhǎng)度變化的影響37-39
• 2.2 AAPH對(duì) 16.5、17.5、18.5 天雞胚股骨和脛骨軟骨增殖區(qū)長(zhǎng)度變化的影響39-41
• 2.3 AAPH對(duì)軟骨增殖區(qū)軟骨細(xì)胞總數(shù)和處于分裂期的細(xì)胞數(shù)的影響41-43
• 2.4 AAPH對(duì)胚胎長(zhǎng)骨基因表達(dá)的影響43-45
• 3 小結(jié)與討論45-47
• 第四章 活性氧自由基對(duì)軟骨內(nèi)成骨軟骨細(xì)胞膨大的影響47-60
• 1 材料與方法48-52
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料48-50
• 1.2 16.5、17.5、18.5 天胚胎長(zhǎng)骨H&E染色50
• 1.3 DAPI染料檢測(cè)膨大軟骨細(xì)胞凋亡50-51
• 1.4 RT-PCR檢測(cè)胚胎長(zhǎng)骨基因表達(dá)51-52
• 1.5 微電腦x射線斷層掃描（Micro-CT）分析52
• 1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析52
• 2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果52-58
• 2.1 AAPH對(duì) 16.5、17.5、18.5 天雞胚股骨和脛骨軟骨膨大區(qū)長(zhǎng)度變化的影響52-55
• 2.2 AAPH對(duì)雞胚長(zhǎng)骨骨骺膨大軟骨細(xì)胞的凋亡與終末分化的影響55
• 2.3 AAPH對(duì)胚胎長(zhǎng)骨基因表達(dá)的影響55-56
• 2.4 AAPH對(duì) 18.5 天雞胚股骨和脛骨骨化的影響56-58
• 3 小結(jié)與討論58-60
• 結(jié)論與展望60-62
• 結(jié)論60-61
• 創(chuàng)新和突破61
• 展望61-62
• 參考文獻(xiàn)62-70
• 致謝70

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 李青春;李岱;;白藜蘆醇對(duì)眼部疾病防治機(jī)制的研究進(jìn)展[J];實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志;2014年24期

  本文關(guān)鍵詞：AAPH誘導(dǎo)氧化應(yīng)激對(duì)胚胎成骨的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：410578