目的以SREBP-1c下游調(diào)控基因?yàn)槔?對(duì)HEK 293T細(xì)胞進(jìn)行染色質(zhì)免疫共沉淀(chromatin co-immunoprecipitation, CHIP)實(shí)驗(yàn)改進(jìn),獲得更好實(shí)驗(yàn)結(jié)果。方法對(duì)常規(guī)CHIP改進(jìn)方法包括細(xì)胞洗滌時(shí)添加蛋白酶抑制劑PMSF、免疫沉淀復(fù)合物采用3步洗滌法、解交聯(lián)采用蛋白酶K 56℃水浴10 min、樣品DNA采用基因組提取試劑盒回收。結(jié)果與常規(guī)CHIP相比,改進(jìn)后的CHIP獲得純度更高的樣品DNA。結(jié)論改進(jìn)后方法更適用于細(xì)胞染色質(zhì)免疫共沉淀,使細(xì)胞中基因表達(dá)調(diào)控研究中DNA提取與鑒定更高效。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料與試劑
    1.2 CHIP實(shí)驗(yàn)流程
        1.2.1 細(xì)胞處理
        1.2.2 交聯(lián)
        1.2.3 超聲裂解
        1.2.4 樣品-抗體-磁珠耦合與孵育
        1.2.5 洗滌
        1.2.6 交聯(lián)
        1.2.7 基因組DNA純化
        1.2.8 引物設(shè)計(jì)
        1.2.9 PCR擴(kuò)增體系
2 結(jié)果
    2.1 SREBP-1c 啟動(dòng)子區(qū)的分析
    2.2 檢驗(yàn)染色質(zhì)超聲破碎的效果
    2.3 解交聯(lián)結(jié)果
    2.4 DNA純化及PCR
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