目的以SREBP-1c下游調(diào)控基因為例,對HEK 293T細胞進行染色質(zhì)免疫共沉淀(chromatin co-immunoprecipitation, CHIP)實驗改進,獲得更好實驗結(jié)果。方法對常規(guī)CHIP改進方法包括細胞洗滌時添加蛋白酶抑制劑PMSF、免疫沉淀復合物采用3步洗滌法、解交聯(lián)采用蛋白酶K 56℃水浴10 min、樣品DNA采用基因組提取試劑盒回收。結(jié)果與常規(guī)CHIP相比,改進后的CHIP獲得純度更高的樣品DNA。結(jié)論改進后方法更適用于細胞染色質(zhì)免疫共沉淀,使細胞中基因表達調(diào)控研究中DNA提取與鑒定更高效。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料與試劑
    1.2 CHIP實驗流程
        1.2.1 細胞處理
        1.2.2 交聯(lián)
        1.2.3 超聲裂解
        1.2.4 樣品-抗體-磁珠耦合與孵育
        1.2.5 洗滌
        1.2.6 交聯(lián)
        1.2.7 基因組DNA純化
        1.2.8 引物設(shè)計
        1.2.9 PCR擴增體系
2 結(jié)果
    2.1 SREBP-1c 啟動子區(qū)的分析
    2.2 檢驗染色質(zhì)超聲破碎的效果
    2.3 解交聯(lián)結(jié)果
    2.4 DNA純化及PCR
3 討論



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