目的:探討衰老的大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞凋亡抗性是否增加且是否通過凋亡抑制蛋白(IAP)家族介導(dǎo)。方法:用DMEM/F12中加入10%胎牛血清(FBS)的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞(BMSC)至第三代,使用D-半乳糖(D-gal)誘導(dǎo)成衰老的BMSC并用β-半乳糖苷酶染色做衰老鑒定。用腫瘤壞死因子α(TNF-α)和環(huán)己酰亞胺(CHX)共同處理正常對照組與衰老組的BMSC,通過貼壁細胞計數(shù)統(tǒng)計其生存率,并通過蛋白印跡法檢測兩組細胞中Cleaved PARP、Cleaved Caspase3蛋白、IAP家族成員c-IAP1、c-IAP2、XIAP以及衰老相關(guān)標志蛋白的水平。再用IAP抑制劑AT-406處理衰老的細胞,CCK-8檢測處理組以及未處理組細胞的細胞活力。最后用凋亡抑制劑z-VAD-fmk和AT-406共同處理正常對照組與衰老組細胞,觀察z-VAD-fmk能否減少IAP蛋白被抑制后所引起的細胞死亡。結(jié)果:與正常對照組相比,衰老的BMSC中由TNF-α和CHX共同誘導(dǎo)引起的細胞死亡數(shù)明顯減少,凋亡標志物Cleaved PARP和Cleaved Caspase3蛋白的水平降低,而I...

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【文章目錄】：
前言
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 大鼠原代BMSCs的分離培養(yǎng)
    1.3 細胞培養(yǎng)
    1.4 CCK-8試劑盒檢測細胞增殖活力
    1.5 β-半乳糖苷酶染色
    1.6 Western blot蛋白印跡分析
    1.7 流式細胞儀檢測細胞凋亡
    1.8 統(tǒng)計學分析
2 結(jié)果
    2.1 D-gal誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細胞衰老
    2.2 D-gal誘導(dǎo)的衰老細胞凋亡抗性升高
    2.3 D-gal誘導(dǎo)的衰老細胞中c-IAP1、c-IAP2和XIAP表達升高
    2.4 AT-406誘導(dǎo)衰老細胞凋亡
3 討論



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